結(jié)核桿菌對利福平藥物的敏感性試驗(yàn)

1、結(jié)核桿菌對利福平藥物的敏感性試驗(yàn)【摘要】目的分析結(jié)核分枝桿菌對利福平的耐藥現(xiàn)況，為結(jié)核病的防治提供根據(jù)。方法采用直接涂片檢查法和培養(yǎng)法,對肺結(jié)核病人的痰液進(jìn)展檢查，陽性標(biāo)本經(jīng)抗酸染色鏡檢確認(rèn)后，采用絕對濃度法的間接法進(jìn)展耐藥性測定。結(jié)果131例疑似肺結(jié)核病人痰標(biāo)本中，直接涂片法檢出陽性標(biāo)本21例，陽性檢出率為16.0%21/131；培養(yǎng)法共檢出陽性標(biāo)本56例，陽性檢出率為42.7%56/131。比擬兩種檢測方法的陽性檢出率，差異有顯著性P0.05。培養(yǎng)法高于直接涂片法。將培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)展利福平藥物敏感性試驗(yàn)，其中有17株發(fā)生耐藥，耐藥率為30.4%17/56。結(jié)論結(jié)核桿菌對利福平的初始耐藥率仍

2、處在較高程度，必須進(jìn)一步加強(qiáng)對耐藥結(jié)核桿菌的監(jiān)控?！娟P(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌福平藥敏試驗(yàn)Studynthepriarydrugresistaneagainstrifapiinfrtuberlusis(InstitutefDiseasePreventandntrlfSnggangTn,Shenzhen518105;GuangdngllegefPharay,Guangzhu,Guangdng510006,hina)Abstrat:bjetiveTstudythesituatinandtrendfrifapiinresistanefrtuberulsisandprvidethebasisfrtuberu

3、lsispreventinandtreatent.ethdsSputufluidisexainedithdiretsearandulturendifiedLenstEIn-Jensenediuaftertreatentith4%NaH.Thenthepsitivesapleseresubjetedtsuseptibilitytestingagainstrifapiinusingabslutenentratinethd.ResultsThepsitiverateithulturingandsearingethdas42.7%56/131,andthepsitiverateithdiretsear

4、ingethdas16.0%21/131.Theprevaleneratefpriarydrugresistaneas30.4%(17/56).nlusinTheratefpriarydrugagainstrifapiinisstillatahigherlevel.nitringftheresistaneftuberulsisshuldbestrengthened.Keyrds:ybateriutuberulsis;rifapiin;drugresistanetest結(jié)核病是我國重點(diǎn)控制的重大疾病之一，也是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題和社會(huì)問題,世界衛(wèi)生組織已將結(jié)核病作為重點(diǎn)控制的傳染病之一。全球8

5、0%的結(jié)核患者分布在22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家,中國是其中之一,結(jié)核患者人數(shù)僅次于印度居世界第二位1。但是，近10年來,臨床上發(fā)現(xiàn)抗結(jié)核藥的耐藥性對結(jié)核病化療效果的影響日益嚴(yán)重,尤其是利福平耐藥的發(fā)生率不斷上升給抗結(jié)核治療帶來較大的困難。為理解結(jié)核桿菌對利福平耐藥的狀況，為臨床合理、結(jié)合用藥提供根據(jù)，特作本研究。結(jié)果報(bào)告如下。1材料與方法1.1病例來源2022年11月2022年5月，在廣州市白云區(qū)某醫(yī)院、深圳市寶安區(qū)某醫(yī)院檢查首次確診為肺結(jié)核的病人，共131例。病例發(fā)病前均未服用過抗結(jié)核藥物。結(jié)核分枝桿菌參考菌株為H37Rv敏感株，由中國結(jié)核病防治臨床中心國家參比實(shí)驗(yàn)室提供。1.2痰液直接涂片檢查

6、用接種環(huán)取膿性痰液12環(huán)，均勻涂于載玻片上，待自然枯燥，微火焰固定，經(jīng)抗酸染色后鏡檢。1.3分枝桿菌培養(yǎng)1.3.1培養(yǎng)基為酸性羅氏培養(yǎng)基。成分：谷氨酸鈉(純度95%以上)7.2g,KH2P414g,gS47H20.24g,枸櫞酸鎂0.6g,甘油12L,蒸餾水600L,馬鈴薯淀粉30g,新穎雞卵液1000L,2%孔雀綠水溶液20L。1.3.2制備方法各鹽類成分溶解后，加馬鈴薯淀粉，混勻，沸水浴煮沸1h呈糊狀(不時(shí)搖動(dòng)，防凝塊)，待冷后，加經(jīng)消毒紗布過濾的新穎雞卵液，混勻，再參加2%孔雀綠水溶液，混勻，分裝于經(jīng)121高壓滅菌的中型試管，每管加培養(yǎng)基約7L，斜置血清凝固器內(nèi)12層，斜面高度占試管2/

7、3,901.5h或851h間歇2次。冷卻后，37無菌試驗(yàn)24h。培養(yǎng)基斜面顏色鮮艷，外表光滑無泡，有一定韌性和酸堿緩沖才能,4保存，1個(gè)月內(nèi)使用。1.3.3接種方法取痰標(biāo)本12L，參加2倍量4%NaH，于室溫下放置30in期間振蕩23次后，取處理消化后痰液0.1L，無菌操作接種于培養(yǎng)基斜面上，每份標(biāo)本同時(shí)接種2支酸性改進(jìn)羅氏培養(yǎng)基，放置37恒溫箱培養(yǎng)。每周觀察1次,記錄細(xì)菌生長情況，至8周為止。1.4藥敏試驗(yàn)詳細(xì)操作參照結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程2。1.4.1藥物利福平由美國Siga公司消費(fèi)，北京索萊寶科技提供。為純品，粉劑。1.4.2培養(yǎng)基改進(jìn)羅氏培養(yǎng)基。成分：谷氨酸鈉(純度95%以上)7.2

8、g,KH2P42.4g,gS47H22.4g,枸櫞酸鎂0.6g,甘油12L,蒸餾水600L,馬鈴薯淀粉30g,新穎雞卵液1000L,2%孔雀綠水溶液20L。1.4.3制備方法制備方法同酸性羅氏培養(yǎng)基，只是在培養(yǎng)基制成后分裝于中型試管前，按每100L培養(yǎng)基參加1L利福平稀釋藥液，混勻，再行分裝中型試管，加溫凝固成斜面。1.4.4利福平藥液配制及稀釋利福平藥物為純品，生物效價(jià)為1000g/g。參照文獻(xiàn)2，配制2個(gè)濃度的含藥培養(yǎng)基，藥物濃度為：50g/L、250g/L。根據(jù)痰培養(yǎng)陽性標(biāo)本例數(shù)，每支試管含培養(yǎng)基7L，計(jì)算所需培養(yǎng)基體積。每100L培養(yǎng)基參加1L利福平稀釋藥液。1.4.5菌懸液的制備及接

9、種方法參照?全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)?進(jìn)展。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.4.6質(zhì)控每批藥敏試驗(yàn)應(yīng)以結(jié)核分枝桿菌參考菌株H37Rv檢測含藥培養(yǎng)基質(zhì)量。1.4.7結(jié)果斷定對照培養(yǎng)基菌落數(shù)必須在200以上且無交融。假設(shè)菌落數(shù)低于50時(shí)，重新做藥物敏感性測定。-：培養(yǎng)基斜面上無分枝桿菌菌落生長。1+：菌落數(shù)約占斜面面積的1/4。2+：菌落數(shù)約占斜面面積的1/2。3+：菌落數(shù)約占斜面面積的3/4。4+：菌落呈菌苔樣生長。菌落數(shù)少于20個(gè)時(shí)，報(bào)告菌落數(shù)。含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)少于20個(gè)時(shí)，當(dāng)作不生長。低濃度含藥培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)多于20個(gè)時(shí)，即可斷定為耐藥。低濃度生長、高濃度不生長為中度耐藥；高、低濃度均

10、生長為高度耐藥。2結(jié)果2.1痰涂片情況131例肺結(jié)核病人標(biāo)本中，共有21例痰涂片為陽性,陽性率為16.0%。2.2痰培養(yǎng)情況131例標(biāo)本中，經(jīng)培養(yǎng)有菌生長且經(jīng)抗酸染色鏡檢后，共有56例確定為結(jié)核分枝桿菌，陽性檢出率為42.7%。兩種檢測方法其陽性檢出率比擬，差異有顯著性P0.05。培養(yǎng)法高于直接涂片法。見表1。表1直接涂片法和培養(yǎng)法檢出陽性結(jié)果略Tab.1Theresultsfsputufluidexainatinithdiretsearandulture與直接涂片法比擬：*P0.052檢驗(yàn)2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果質(zhì)控H37Rv生長情況：對照培養(yǎng)基為4+，高、低濃度含藥培養(yǎng)基均不生長，為敏感。故所配

11、制的培養(yǎng)基質(zhì)量合格，能用于藥物敏感性測試。56株痰培養(yǎng)陽性標(biāo)本中，共有17株出現(xiàn)耐藥，總耐藥率為30.3%，其中，屬中度耐藥有10株，耐藥率為17.8%，屬高度耐藥有7株，耐藥率為12.5%。見表2。表256株痰培養(yǎng)陽性標(biāo)本利福平敏感性測定結(jié)果略Tab.2Theresultsfsuseptibilitytestingagainstrifapiinin56psitivesaples3討論直接涂片檢查法和分枝桿菌培養(yǎng)法是結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷中常用的2種方法，2種方法的陽性檢出率對結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷有重要影響。本研究中培養(yǎng)法陽性檢出率高于直接涂片檢查法。因此，臨床上可將2種方法結(jié)合使用，以進(jìn)步結(jié)核菌的陽性

12、檢出率。耐藥性試驗(yàn)不僅是臨床選擇和評價(jià)化療方案的根據(jù)，更是流行病學(xué)的重要指標(biāo)。我國于2000年開展了第4次全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查，結(jié)果顯示，利福平耐藥的初始耐藥率為10.3%3，本研究中利福平敏感性試驗(yàn)初始耐藥率為30.3%，比全國流行病學(xué)調(diào)查測出的耐藥率要高；與其他省份耐藥情況相比，湖北省的研究顯示結(jié)核桿菌對利福平的初始耐藥率為3.8%4，福建省的為9.5%5，本研究中利福平初始耐藥率高于該兩省；與廣東省內(nèi)其他城市相比，深圳市利福平初始耐藥率為7.7%6，東莞地區(qū)為7.5%7，本次藥敏實(shí)驗(yàn)利福平初始耐藥率也均高于兩市的研究結(jié)果。利福平自1971年創(chuàng)造以來，一直是結(jié)核化療方案中的一個(gè)關(guān)鍵藥物。特別在短程化療中起著重要作用。而對利福平的耐藥意味著一方面由于患者對利福平耐藥，臨床上須加大用藥劑量或改用其他抗結(jié)核藥物，使患者的療程延長，增加患者的危險(xiǎn)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；另一方面擴(kuò)大耐藥性傳播的時(shí)機(jī)，使得總體人群暴露于耐藥結(jié)核桿菌的危險(xiǎn)性增加。研究說明8，利福平產(chǎn)生耐藥性是由于其作用靶分子RNA多聚酶亞單位的編碼基因rpB突變所致。由于結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生自然耐藥變異的頻率很低，造成耐藥的主要原因是治療過程中不合理的結(jié)合用藥、連續(xù)用藥、不執(zhí)行歸口管理與治療等。因此，在今后的結(jié)核病防治工作中，重點(diǎn)為社