紅車軸草總異黃酮粉劑中總異黃酮含量測定研究

1、紅車軸草總異黃酮粉劑中總異黃酮含量測定研究朱賢森黃志勤楊慶春齊來【摘要】目的建立紅車軸草總異黃酮粉劑中總異黃酮含量的測定方法，從而對(duì)該品進(jìn)展質(zhì)量控制。方法采用紫外分光光度法直接測定粉劑中總異黃酮含量，測定波長為250n。結(jié)果回歸方程為：Y0.1312X0.0095，相關(guān)系數(shù)r0.9997，平均回收率為98.3%，RSD為2.06%，線性范圍為1.00405.0200g/l。結(jié)論紫外分光光度法測定該粉劑中總異黃酮含量結(jié)果準(zhǔn)確、方便、快捷、重現(xiàn)性好?！娟P(guān)鍵詞】紫外分光光度法紅車軸草粉劑總異黃酮Abstrat：bjetiveTestablishthedeterinatinethdfntentfisf

2、lavnesinTrifliupratenseFenjibyUVspetrertryandntrlthequality.ethdsThententfisflavnesasdeterinedbyeasuringtheUVabsrbaneat250n.ResultsThelinearrelatinshipasy=0.1312x+0.0095,r=0.9997,thereveryas98.3%,RSD=2.06%;thelinearrangeas1.00405.0200g/l.nlusinItisspeifi，aurate，nvenientandrapidfreasuringthententfisf

3、lavnes.Keyrds：UVspetrertry;TrifliupratenseFenji;Isflavnes;Deterinatinfnentratin中藥紅車軸草TrifliupratenseL.為豆科車軸草屬多年生草本植物的枯燥花序及帶花枝葉,又名紅三葉紅花苜蓿三葉草等1，在我國大局部地區(qū)均有消費(fèi)，主要含有蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、維生素和異黃酮等成分，其中異黃酮具有抗腫瘤胃癌、乳腺癌和治療骨質(zhì)疏松、更年期綜合征2、抑制前列腺癌和骨髓白血病細(xì)胞的生長、改善動(dòng)脈血管的柔順性3等多種功能。隨著對(duì)研究的深化，目前國內(nèi)外科學(xué)家已從紅車軸草中發(fā)現(xiàn)了四十多種異黃酮類化合物，主要是大豆黃素、染料木素、

4、刺芒柄花素和鷹嘴豆芽素A等及其相應(yīng)的苷類。目前關(guān)于紅車軸草及其提取物中異黃酮報(bào)道較少，大多只測定了刺芒柄花素和鷹嘴豆芽素A。紅車軸草總異黃酮粉劑由中藥材紅車軸草經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提娶濃縮、枯燥、粉碎而成。本文對(duì)該粉劑中總異黃酮的含量測定進(jìn)展了相關(guān)研究。1儀器與試藥紫外可見分光光度計(jì)：UV2450P日本島津公司；紅車軸藥材購自廣東清遠(yuǎn)藥材市場，紅車軸草總異黃酮粉劑由實(shí)驗(yàn)室自制，芒柄花素對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇色譜純，水重蒸水，其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.2測定方法的選擇根據(jù)化學(xué)成分研究結(jié)果，紅車軸草含有黃酮類成分、蛋白質(zhì)、糖類、脂溶性色素和少量的甾醇類等成分，本品經(jīng)純化后，主

5、要含芒柄花素、鷹嘴豆芽素A等異黃酮類化合物及少量的脂溶性色素成分。這些異黃酮類化合物在紫外區(qū)具有很強(qiáng)的特征吸收，因此選擇紫外分光光度法測定本品總黃酮的含量。2.3對(duì)照品的選擇根據(jù)化學(xué)成分研究結(jié)果，芒柄花素frnnetin是本品含量最高的成分，因此選擇芒柄花素作為本品含量測定的對(duì)照品。2.4測定波長的選擇將樣品和芒柄花素對(duì)照品用甲醇配成適當(dāng)濃度，在200400n范圍內(nèi)掃描，兩者最大吸收波長均在250n，因此選擇250n作為本品的測定波長。2.5線性關(guān)系和回歸方程精細(xì)稱取芒柄花素對(duì)照品10g，置10l量瓶中，加適量的甲醇溶解并稀釋至刻度。精細(xì)汲取該溶液0.5l，置10l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即

6、得每毫升含0.05g的芒柄花素對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確汲取芒柄花素對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0l，分別置于10l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，以甲醇為空白對(duì)照，于250n波長處測定吸收值。以吸收度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性關(guān)系和回歸方程為：Y0.1312X0.0095，相關(guān)系數(shù)r0.9997，線性范圍為1.00405.0200g/l。2.6提取溶劑的選擇粉劑中所含的異黃酮類成分在甲醇、乙醇、丙酮等溶劑中均有較好的溶解度，因此我們對(duì)甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、丙酮和50%丙酮進(jìn)展了考察。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.詳細(xì)方法為：精細(xì)稱取樣品5份，每份50g，分別置

7、于100l具塞錐形瓶中，精細(xì)參加甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、丙酮和50%丙酮各50l，密塞，稱定重量，超聲處理20in，再稱定重量，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精細(xì)汲取濾液1l，置10l量瓶中，于水浴上揮干溶劑，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精細(xì)汲取該溶液0.5l，置10l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以甲醇為空白對(duì)照，于250n波長處測定吸收度，計(jì)算總異黃酮含量。結(jié)果說明甲醇提取的含量測定值最高，應(yīng)選擇甲醇為含量測定時(shí)的提取溶劑。2.7提取方法的選擇含量測定中，常用的提取方法有回流提取法、索氏提取器提取法和超聲提取法。以甲醇為溶劑，對(duì)這3種提取方法進(jìn)展了考察。結(jié)果說明超聲提取效果最

8、正確，因此選擇超聲提齲2.8提取時(shí)間的選擇以甲醇為溶劑，對(duì)超聲提取法的提取時(shí)間進(jìn)展考察。結(jié)果說明超聲提取20in以后，含量不再增加，因此選擇提取時(shí)間為20in。2.9穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品配制后分別在0，1，2，3，4，5，6h，測定吸收度，(見表1)。結(jié)果說明樣品在6h內(nèi)穩(wěn)定。表1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.10精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品的供試品溶液，連續(xù)測定5次見表2。結(jié)果說明儀器精細(xì)度良好。表2精細(xì)度實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.11重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取同一批號(hào)的樣品5份，測定吸光度結(jié)果見表3。結(jié)果說明樣品測定重現(xiàn)性好。表3重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.12加樣回收實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取樣品5g總異黃酮的含量為604.8g/g，置25l三角瓶

9、中，加芒柄花素對(duì)照品溶液3.0l濃度為1.004g/l，充分吸附后，置水浴上蒸發(fā)至干，再精細(xì)參加甲醇10l，稱定重量，測定吸光度，計(jì)算回收率結(jié)果見表4。平均回收率為98.3%。表4加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.134批中試產(chǎn)品的測定精細(xì)稱取供試品適量，配成供試品溶液。照擬定的測定方法測定，同法做空白實(shí)驗(yàn)，照分光光度法4，在250n處測定吸收度，計(jì)算，即得。結(jié)果見表5。表54批中試產(chǎn)品中總異黃酮的含量測定略根據(jù)測定結(jié)果，暫定本品每克含總異黃酮以芒柄花素16H124計(jì)，不得少于550g。3討論對(duì)總異黃酮提取工藝進(jìn)展了初步研究，結(jié)果說明超聲提取，用甲醇作提取溶劑，提取時(shí)間為20in，結(jié)果較理想。紫外分光光度法測定該粉劑中總異黃酮含量結(jié)果穩(wěn)定、方便、快捷，可為其他劑型總異黃酮含量測定提供方法借鑒。【參考文獻(xiàn)】1江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版,1977:1012.2曾虹燕,周樸華,侯團(tuán)章.紅車軸草有效成分的研究進(jìn)展J.中草藥，2001,32(2):189.3RieL,SaediVG,edranTA,