課題計劃項目以及可行性研究報告

1、河南省重點研發(fā)打算工程申報書河南省重點研發(fā)打算工程申報書課題題目為：瓊脂糖自組裝膜基底型免疫芯片載體制備及抗體固定爭辯工程內(nèi)容摘要：工程內(nèi)容摘要：方法，為后 續(xù)免疫芯片的制備供給試驗參考和理論支持。爭辯內(nèi)容：本文選擇多糖中水溶性的瓊脂糖為基質(zhì)，利用分子自組裝技術(shù)，以玻片為載體， SEM、AFMFTIR 對載體進(jìn)展表征，獲 得最正確制備條件；利用熒光顯微成像及ImageJ2體的固定效果進(jìn)展比照分析。關(guān)鍵字瓊脂糖;免疫芯片;抗體固定工程概況1、主要爭辯開發(fā)內(nèi)容選擇多糖中水溶性的瓊脂糖為基質(zhì)，利用分子自組裝技術(shù)，以玻片為載體，SEM、AFMFTIRImageJ 軟件，爭辯該載體對 2 種不同種屬來源

2、抗體的固定效率，對瓊脂糖自組裝膜載體和一般醛基修飾載體對抗體的固定效果進(jìn)展比照分析。APTES) ( Sigma高碘酸鈉、戊二醛、36%冰乙酸、無水乙醇等均為分析純( 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑FITCAFP空掃描電鏡，F(xiàn)TS3000FX 型的傅立葉變換紅外光譜儀，OLYMPUS BX51 型倒置熒光顯微鏡，NanoscopeIIIa 型原子力顯微鏡。 115) 置搖床上振搖 2h，取出后用超純水清洗干凈，放入1mol/LHCl10min25置電熱恒溫箱(1202 h。試驗組瓊脂糖自組裝膜載體制備，比照組進(jìn)展一般醛基載體制備。 2、主要技術(shù)和經(jīng)濟(jì)指標(biāo)1000主要技術(shù)： 的瓊脂糖溶液，微波爐煮沸 3 mi

3、n 完全溶解; 將 2 ml 瓊脂糖溶液掩蓋在60預(yù)熱的清潔玻片上; 瓊脂糖室溫凝固后，置 37烤箱烘干 2 h; 置室溫保50 mmol /L NaIO460 min0. 1 mol /L pH7. 4 PBS5 min3APTES 活化試劑( 丙酮稀釋) 中 20min 后取出，玻片用丙酮、去離子水沖洗， 120下烘干，然后放入含 5%戊二醛溶液中室溫下浸泡 2 h，取出用去離子水沖洗5min3IgGAFP 抗體，濃度為 1mg /ml 的探針溶于含 20%甘油的 PBS 溶液中稀釋，使探針終濃度分別為0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6 mg /ml，將探針分子分別

4、鏈接到修飾后3 h，PBS3的熒光探針，晾干后熒光顯微鏡檢測，獵取熒光圖像。經(jīng)濟(jì)指標(biāo)：載體對抗體的固定效率多糖納米膜基底型芯片載體成品的銷售3、技術(shù)創(chuàng)點3、技術(shù)創(chuàng)點案在課題組通過，已經(jīng)組織選拔了課題組相關(guān)工作人員。APTES)Sigma戊二醛、36%冰乙酸、無水乙醇等均為分析純( 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑) ;，F(xiàn)ITCAFP3.特色和創(chuàng)：在免疫芯片的制備和應(yīng)用過程中，大膽承受瓊脂糖建立一種4、獲得成果和學(xué)問產(chǎn)權(quán)此處需要作者自己填寫4、獲得成果和學(xué)問產(chǎn)權(quán)此處需要作者自己填寫以下為工程可行性爭辯報告一目的意義一目的意義1000速、高通量的檢測; 同時極大節(jié)約時間、試劑，被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)爭辯，免疫芯

5、片制備中，載體的外表修飾及抗體固定是影響芯片檢測靈敏度的關(guān)鍵因 飾。二維外表修飾包括聚賴氨酸修飾、氨基修飾、醛基修飾、巰基修飾、鏈霉親的自然活性。但是二維外表修飾技術(shù)制備的載體在進(jìn)展過程中仍存在不少問題，體制備的方法，為后續(xù)免疫芯片的制備供給試驗參考和理論支持1。二國內(nèi)外同類產(chǎn)品和技術(shù)狀況500得多，而且凝膠的固-液環(huán)境使固定在上面的蛋白質(zhì)不易失去活性。所以三修理3，多糖膜具有三維多孔構(gòu)造，經(jīng)水化后可在內(nèi)部形成固-液狀態(tài)的水凝膠構(gòu)造，這種三維、多孔構(gòu)造以及潮濕的微環(huán)境不但能固定足夠的蛋白質(zhì)，同時還可以防止蛋白質(zhì)變性失活。固-液潮濕環(huán)境使固定在上面的蛋白質(zhì)不易失去活性，因此更有利于固定抗體探針分

6、子。有爭辯說明4膜的厚度和孔徑的大小會直接影響蛋白質(zhì)的固定。參考文獻(xiàn)Sjberg，MattssonC，AnderssonE，etalExplorationofhigh-den-sity protein microarrays for antibody validation and autoimmunity profilingJNew Biotechnol，2022，33(5): 582-592.SM，Bonabi A，Nordberg ME，et alThiol-ene microfluidic devicesformicrochipelectrophoresis:Effectsofcurin

7、gconditionsandmonomer233-240.233-240.Klimushina MV，Gumanova NG，Metelskaya VA. Direct labeling of serum proteins by fluorescent dye for antibody microarrayJBio-chem Biophyes Commun，2022，486(3): 824-826.Chang SY，Bong JH，Yoo G，et alActivity control of autodisplayed proteins on the same outer membrane l

8、ayer of E. coli by using Z-domainstreptavidinandlipasefoldasesystemJEnzymeMi-crobial2022，96:85-95.備方法，為后續(xù)免疫芯片的制備和應(yīng)用不斷供給試驗參考和理論支持。二、爭辯開發(fā)內(nèi)容、方法、技術(shù)路線一具體爭辯開發(fā)內(nèi)容和要重點解決的技術(shù)關(guān)鍵問題1000SEM、AFM 和 FTIR 對載體進(jìn)展表征，獲得最正確制備條件；利用熒光顯微成像及ImageJ2裝膜載體和一般醛基修飾載體對抗體的固定效果進(jìn)展比照分析。APTES) ( Sigma高碘酸鈉、戊二醛、36%冰乙酸、無水乙醇等均為分析純( 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑FI

9、TCAFP空掃描電鏡，F(xiàn)TS3000FX 型的傅立葉變換紅外光譜儀，OLYMPUS BX51 型倒置熒光顯微鏡，NanoscopeIIIa 型原子力顯微鏡?；念A(yù)處理：25mm75mm光學(xué)載玻片用氨水洗液(體積比為氨水過氧115) 置搖床上振搖 2h，取出后用超純水清洗干凈，放入1mol/LHCl10min25置電熱恒溫箱(1202 h。 的瓊脂糖溶液，微波爐煮沸 3 min 完全溶解; 將 2 ml 瓊脂糖溶液掩蓋在6037烤箱烘干 2h; 置室溫保50 mmol /L NaIO460 min0. 1 mol /L pH7. 4 PBS5 min320min120下烘干，然后放入含 5%戊

10、二醛溶液中室溫下浸泡 2 h，取出用去離子水沖5 min3IgGAFP 抗20%PBS 3 h，PBS3結(jié)合的熒光探針，晾干后熒光顯微鏡檢測，獵取熒光圖像。JSM-6360LVAFM)IRPrestige-21FTI) ，用來分析載體外表存在的化學(xué)鍵 ; 用OLYMPUS BX51重點解決的技術(shù)關(guān)鍵：瓊脂糖自組裝膜載體的制備。二工程的特色和創(chuàng)之處1000方法。三要到達(dá)的技術(shù)、經(jīng)濟(jì)指標(biāo)及社會、經(jīng)濟(jì)效益限 1000 字測定載體對抗體的固定效率多糖納米膜基底型芯片載體成品銷售獲得的經(jīng)濟(jì)效益四承受的方法、技術(shù)路線以及工藝流程、合作方式三、工程總體目標(biāo)及考核指標(biāo)、實施年限、年度打算安排與階段目標(biāo)三、工程

11、總體目標(biāo)及考核指標(biāo)、實施年限、年度打算安排與階段目標(biāo)時間進(jìn)度作者可以自行調(diào)整，半年為一個進(jìn)度，一般是爭辯周期是 2一總體目標(biāo)及考核指標(biāo)包括工程與所屬指南方向的匹配性，對指南方向目標(biāo)的支撐作用。1000半年為時主要工作內(nèi)容及階段目標(biāo)每階段限200 字間段202261 日 數(shù)據(jù)庫查詢資料，資料的篩選-2022121202211 日-20226 月 1臨床試驗的預(yù)備階段20222022年 7月 1日臨床試驗階段-2022121 日202211-數(shù)據(jù)統(tǒng)計階段2022612022年 7月 2 日結(jié)題階段，論文書寫、發(fā)表階段-202212 月 1日備供給試驗參考和理論支持。2測評方法：測定載體對抗體的固定效率。七