白酒中酯類的測定

1、反相液相色譜測定白酒中多種香味物質(zhì)前言：白酒是含香味物質(zhì)的高濃度酒精水溶液，其主要成分乙醇、水總量約占到 98%-99%以上，而其余的微量成分則占不到2%，但是這2%的微量成分是構(gòu)成不 同白酒香味特征的決定性因素。白酒中微量香味成分繁多，各種微量成分呈香呈 味強(qiáng)度的不同以及在他們白酒中含量和相互比例的不同，構(gòu)成了不同香型和不同 風(fēng)格的中國白酒，全國五大香型白酒，即醬香型、清香型、濃香型、米香型和其 他香型白酒。展為芝麻香型白酒、兼香型白酒、鳳香型白酒、豉香型白酒和特香 型白酒5種，與前面提到的五大類型并稱為全國白酒十大香型。白酒中微量成 分種類大概有成百上千種，其中乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯

2、、丙酸乙酯、戊 酸乙酯、辛酸乙酯、二元酸（庚/辛/壬）二乙酯、B-苯乙醇、3-甲硫基丙醇、 三/四甲基毗嗪、糠醛、乙縮醛等十幾種成分是白酒香味的常見重要組成，也是 各廠家質(zhì)量控制檢測的關(guān)鍵成分。每種香型的中國白酒都有其特征性的香味成 分，比如，B-苯乙醇是豉香型和米香型的特征性成分，醬香型茅臺酒糠醛含量 高，芝麻香型酒的特征性成分是3-甲硫基丙醇，三甲基毗嗪、四甲基毗嗪在鳳 香型白酒和醬香型茅臺中含量較高。白酒工藝精良，組成復(fù)雜，風(fēng)味獨(dú)特，準(zhǔn)確測定白酒中香味組分的含量是白 酒質(zhì)量控制分析的關(guān)鍵。目前對白酒的質(zhì)量控制和成分的分析檢驗(yàn)中，主要依靠 氣相色譜法、液相色譜法等方法。但是，白酒中香味組分

3、性質(zhì)各異，很難用一種 分析方法準(zhǔn)確地分析多種不同類別的香味成分，所以要根據(jù)具體的被測物質(zhì)選擇 合適的分析方法。本文建立了 HPLC-UV同時測定白酒中的5種香味化合物的方 法，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，對監(jiān)控白酒行業(yè)質(zhì)量及安全管理具有重要的實(shí)意義。實(shí)驗(yàn)方法：一、儀器與試劑儀器高效液相色譜儀配有紫外可見分光檢測器（LC-20A，島津，日本）固相萃取裝置（24 口，SUPELCO，美國）固相萃取小柱（Oasis HLB 6cc， Waters，美國）數(shù)控超聲波清洗器移液槍（5000UL. 1000 UL. 200 UL. 20uL, Eppendorf，德國）旋渦混合器（MVS-1，北京金北德工貿(mào)有限公司，中

4、國）天平 1（ME2355，Max=230g，d=0.01mg，德國）天平 2 （METTLER TOLEDO UMXZ，Max=2.1g，d=0.1 u g，德國）主要試劑色譜純試劑：丙酸乙酯、乳酸乙酯、糠醛、B-苯乙醇、己酸乙酯。流動相相關(guān)試劑：乙臘（色譜純）；乙酸（純度99.5%）；磷酸二氫鉀（純度 98%，）。白酒樣品所有樣品在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前均保存在4C冰箱中。所用水均為超純水二、實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)準(zhǔn)溶液配制將保存在4C環(huán)境下的丙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯、糠醛、*苯乙醇標(biāo) 準(zhǔn)品在室溫下平衡2h后開始配制。重量法準(zhǔn)確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)品各1mL，用 60%乙醇水溶液在10mL容量瓶中定容，得到五種香味化

5、合物濃度約為10 5mg/kg的儲備液。將儲備液用重量法進(jìn)一步準(zhǔn)確稀釋 7個數(shù)量級，即得 0.01-105mg/kg濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)點(diǎn)?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液配制采用重量法取4mL乳酸乙酯、200 uL糠醛、20uLB-苯乙醇、200 uL丙酸 乙酯、60uL己酸乙酯加入到20mL容量瓶中，以60%乙醇水溶液定容，得 到上述香味化合物分別 1000mg/kg、50mg/kg、5mg/kg、50mg/kg、3000mg/kg 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。樣品預(yù)處理直接進(jìn)樣：不經(jīng)過任何前處理直接進(jìn)樣。色譜條件色譜柱：Thermo HYPERSIL ODS-2 （250mmX4.6mm，5um），流動相 A：乙臘， B

6、： 0.1%乙酸水溶液；流動相梯度洗脫程序如下圖。流速：0.8 mL/min；柱 溫：35C ；進(jìn)樣量：20uL。標(biāo)樣與待測樣檢測，分別記錄標(biāo)樣與待測樣的保留時間與每種物質(zhì)的峰面積時間血in0-510905-2025752D 45505045-601090三、色譜條件的確定選取100%乙臘和0.2%乙酸水溶液作為高效液相色譜的流動相，分離五糧液 白酒中香味化合物成分。五種化合物的保留時間隨著乙臘相比例的增加變短， 但是保留時間過短將使化合物的峰面積受到溶劑峰的影響。為了獲得合適的 保留時間和令人滿意的分離效果，本文首選大比例的有機(jī)相開始實(shí)驗(yàn)。分別 選用85%，90%，95%的水相來分離乳酸乙酯

7、和糠醛（如圖3-2所示），實(shí)驗(yàn) 發(fā)現(xiàn)保留時間逐漸變長，為了得到良好的分離效果和較平滑的基線，選擇了 90%水相。但是以90%水相的條件，B-苯乙醇的保留時間將大于30分鐘。 為了減少分析時間，從15分鐘起將水相比例調(diào)整為70%、80%、85%。70% 的條件下B-苯乙醇出峰在基線下降的梯度上，影響B(tài)-苯乙醇峰面積的準(zhǔn) 確計算，水相80%時B-苯乙醇與丙酸乙酯能得到個較好的分離。低極性的 己酸乙酯在分離時需要低極性的流動相，所以45%、50%、55%水相作為備選 條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，最后選擇了能將雜質(zhì)分離開并能夠節(jié)約時間的50%水相比例 作為第三個梯度。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果物質(zhì)定性根據(jù)樣品中物質(zhì)的保留時間與待測樣的保留時間對比來進(jìn)行定性定量計算（采用外標(biāo)法）根據(jù)相對校正因子二標(biāo)樣濃度/峰面積樣品濃度二校正因子X峰面積就可以算出每種