基于磁珠微陣列的多重血型檢測技術

1、基于磁珠微陣列的多重血型檢測技術來源： ： 時間：2022-10-27 【】 張強； 陳藝心； 趙樹銘； 【機構】 第三軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院輸血科； 第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院檢驗科；【摘要】 目的 建立并評價基于磁珠微陣列技術的血型表型的鑒定方法。方法 用Tris-HCl(0.01 mol/L,p H 7.4)裂解濃縮紅細胞作為待檢樣本,將探針抗體包被于經(jīng)醛基修飾的三維基片上,將待測樣本與抗體進行反應,最后用C1q包被的磁珠識別抗原抗體復合物,在磁針的磁力吸附下將未結合的磁珠清除。顯微攝影每個微陣列檢測點,通過Photoshop圖像分析判斷信號強度。結果 針對108個檢測樣本的5種抗原(A、B、D

2、、M、N)進行分析,以含有40%甘油的PBS做為反應介質(zhì)能有效避免咖啡環(huán)的形成,方法敏感性為86%93%,特異性為98%100%。通過C1q包被的磁珠識別抗原抗體復合物能在1020 min完成檢測,所需樣本10L。結論 本方法有較高的敏感性與特異性,同一個芯片上可同時檢測5種血型抗原,節(jié)約樣本,且不受樣本損傷的影響,為血型鑒定提供了一種新的手段?！娟P鍵詞】 輸血； 血型鑒定； 蛋白質(zhì)芯片； 磁珠芯片； 目前人類已發(fā)現(xiàn)35個血型系統(tǒng)、包含1500多個等位基因1，其中很多編碼的血型抗原具有重要的臨床意義。自ABO血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)以來，輸血安全性得到極大的提高。然而，隨著更多的血型抗原的發(fā)現(xiàn)，為了更大程

3、度上保證輸血的安全性，血型鑒定靶標將不僅限于A、B及hD抗原?，F(xiàn)有血型鑒定技術包含基因分型與表型分型兩大類?；蚍中腿鏟C、測序以及基因芯片等2，這些技術雖然靈敏度高，但設備及人員技能要求高，且耗時較長，不適合于急救或戶外應用。 現(xiàn)有的表型分型技術雖然能有效降低設備、人員、時間成本，但靈敏度受到一定限制，且均只能針對單個抗原進行檢測，不能滿足未來多重血型檢測的臨床要求3。為此，本研究將微陣列技術與磁珠分離技術相接合，建立一種快速多重的血型鑒定技術。1材料與方法11樣本收集與處理經(jīng)獻血員同意后留取血液樣本，EDTA-K2抗凝后離心取100L濃縮紅細胞，用PBS(001mol/L，pH74)洗滌3

4、次后用1mLTris-HCl(001mol/L，pH74)存放4裂解，最后以10LPBS重懸待用12微陣列芯片的制備選用醛基修飾的三維基片(CapitalBio，755mm252mm10mm)作為反應基片。每張基片分為6個反應區(qū)，每個反應區(qū)包含8個檢測點(42陣列)，用于一種抗原的檢測。人IgG及血型抗體探針(單克隆抗體A、B、D、M、N，Abacam公司)包被于各個檢測區(qū)，每個點點樣02L(100g/mL，Abcam公司)。37溫育30min后用10g/L牛血清清蛋白(BSA)封閉(加拿大BBI公司)，隨后置于4保存?zhèn)溆谩?3C1q包被磁珠取100L超順磁珠(SM3-P100磁珠，上海奧潤公

5、司)用001mol/L嗎啉乙烷磺酸吐溫(MES，上海生工公司，005%吐溫-20)清洗3次，加100L5mg/mL偶聯(lián)劑3-(二甲基氨基)丙基乙酯碳亞胺鹽酸鹽(EDC，加拿大BBI公司)與100L5mg/mLN-羥基丁二酰亞胺(NHS，上海生工公司)混勻，37振蕩偶聯(lián)30min。磁分離去上清后加100LC1q(100g/mL，Abacam公司)，37振蕩偶聯(lián)30min。最后以10g/LBSA封閉，置于4保存?zhèn)溆谩?4血型微陣列檢測在包被有抗體探針的反應點上加待測樣品02L，隨后加02LC1q偶聯(lián)的磁珠，室溫反應1020min后用磁針吸去未接合磁珠。15傳統(tǒng)血清學鑒定所有樣本的A，B，D，M，N采用微柱凝膠法進行鑒定(抗A，B，上海血液公司，抗D，M