血液標(biāo)本采集與處理課件

1、1臨床基礎(chǔ)檢驗 第一章血液標(biāo)本采集與處理1臨床基礎(chǔ)檢驗 第一章血液標(biāo)本采集與處理2第一節(jié) 血液標(biāo)本的采集檢驗申請：身份證實名制掛號，真實！采集和處理要求：LIS條碼可以自動顯示標(biāo)本信息完整性：采集流程控制標(biāo)本拒收：應(yīng)制定標(biāo)準(zhǔn)拒收SOP文件。一、標(biāo)本采集的要求2第一節(jié) 血液標(biāo)本的采集檢驗申請：身份證實名制掛號，真實！3 二、血液標(biāo)本類型全血：由血細(xì)胞和血漿組成，主要用于臨床血液學(xué)檢查，如血細(xì)胞計數(shù)、分類和形態(tài)學(xué)檢查等。如靜脈、動脈、毛細(xì)胞血管全血。血漿：為全血除去血細(xì)胞的部分，適合臨床生化檢查，特別是內(nèi)分泌激素的測定；血漿除鈣離子外，含有其他全部凝血因子，適合血栓與止血的檢查血清：是離體后的血液

2、自然凝固后析出的液體部分，除纖維蛋白原等凝血因子在凝血時消耗外，其他成分與血漿基本相同，更適用于多數(shù)臨床化學(xué)和臨床免疫學(xué)檢查。血細(xì)胞：濃縮粒細(xì)胞，血小板等第一節(jié) 血液標(biāo)本的采集3 二、血液標(biāo)本類型第一節(jié) 血液標(biāo)本的采集4第一節(jié) 血液標(biāo)本的采集 三、血液標(biāo)本的采集方法 血液標(biāo)本的采集 (The Collection of Blood) 是分析前質(zhì)控的重要環(huán)節(jié)，直接影響到檢 驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。Note:很多因素會影響到血液標(biāo)本檢測: 患者的活動情況和精神狀態(tài)、藥物、年齡、性別、 種族、標(biāo)本采集的時間以及是否吸煙等 根據(jù)檢驗項目來選擇采集方法（量、抗凝、）。血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，并盡快進(jìn)行檢查。

3、4第一節(jié) 血液標(biāo)本的采集 5（一）皮膚采血法（skin puncture for bloodcollection ) 以前叫毛細(xì)血管采血法 ( The Collection of Copillary Blood ) 視頻錄像觀看 5（一）皮膚采血法（skin puncture for6皮膚采血法特點 部位 ： 左手無名指指尖內(nèi)側(cè) 、耳垂、足根等 用血量： 少（0.5ml） 適用范圍 ： 窄（細(xì)胞計數(shù) 、Hb） 結(jié)果： 不夠穩(wěn)定，不能重復(fù) 一般較靜脈血高 影響因素： 多（部位、氣候、采血技術(shù)) 注意事項：一人一針一次使用，去第一滴血， 采血動作要快，首采血小板計數(shù) 6皮膚采血法特點7 自動皮膚采

4、血法TZD-100的工作原理： 儀器中的激光發(fā)射器在不超過500S時間內(nèi)發(fā)出一束波長為2.94m的激光,在耗材（一次性）鏡頭保護(hù)片的配合下，細(xì)微的光束打在采血者手指的滑囊處，在1/1000秒時間內(nèi)使皮膚瞬間溫度達(dá)到1K左右,組織溶解、揮發(fā),出現(xiàn)一個0.5毫米的小孔，而打孔后的殘留物呈現(xiàn)出等離子狀態(tài)，吸附在鏡頭保護(hù)片的表面,從而實現(xiàn)采集血液樣本的目的。標(biāo)本廣泛運用于血常規(guī)、血型、各類干化學(xué)測試等一切使用適量末梢血的分析項目,適合于各種類型的醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用。 7 自動皮膚采血法TZD-100的工作原理：8（二）靜脈采血法venipuncture for blood collection嚴(yán)格生物安全防

5、護(hù)技術(shù)：戴帽、口罩、手套、一人一針一帶。嚴(yán)格遵守窗口人員采血規(guī)范確認(rèn)病人信息：詢問、醫(yī)療就診卡確認(rèn)采血項目使用的采血管類型選取靜脈采血部位：肘部靜脈,手背靜脈,股靜脈、頸外靜脈。不能采血部位：水腫、血腫、疤痕、點滴側(cè)靜脈。確認(rèn)采血量，采血下班后應(yīng)記錄工作日記8（二）靜脈采血法venipuncture for blo9靜 脈 采 血 法 特 點部位： 肘部靜脈,手背靜脈, 股靜脈、頸外靜脈等用血量： 較多（2ml）適用范圍： 廣（生化、血液、微生物）結(jié)果： 穩(wěn)定，可重復(fù)影響因素： 少， 但要防止溶血9靜 脈 采 血 法 特 點部位： 肘部靜脈,手10靜 脈 采 血 法 常 見 問 題血腫淤青：穿

6、刺太深、太淺、針頭晃動、止血按壓方式錯誤（揉搓）凝固：采血的技術(shù)問題；抗凝劑沒加或失效；抗凝劑沒有充分混勻止血帶壓迫時間過長。溶血： 器材不干燥、不清潔；血液注入試管時產(chǎn)生大量氣泡；針頭沒有拔下；混勻或攪拌時過猛。暈血解救：讓病人平躺或指掐人中合谷。10靜 脈 采 血 法 常 見 問 題血腫淤青：穿刺太深、太11采血時注意：血量的多少 抗凝劑是否需要試管的編號、是否加塞、保存的方式暈血的處理止血帶壓迫時間不宜過長，最好不超過半分鐘注射器和容器必須干燥抽血不宜過快采血后禁止直接用手拔針頭。11采血時注意：血量的多少 12（三）真空采血法（vacuum tube for bloodcollecti

7、on） 真空采血法，又稱為負(fù)壓采血法。國內(nèi)外已生產(chǎn)專供醫(yī)學(xué)檢驗使用的真空采血裝置，有套筒式（硬接式）和頭皮靜脈式（軟接式）兩種，后者還設(shè)計備有軟橡皮套管式止血裝置，穿刺回血后，即可將另一端的硬插管插入真空定量硅化的采血試管中，血液足量后，拔出硬插管即止血，當(dāng)插另一真空定量試管時又可采血，整個采血過程無血液外溢和污染。血標(biāo)本轉(zhuǎn)運方便，特別適用于病房和野外流動采血；能避免對醫(yī)護(hù)人員的感染和患者血標(biāo)本間的交叉污染。 12（三）真空采血法（vacuum tube for blo13干凈安全：鈷60照射，保證內(nèi)壁100%無菌；去離子水和去污劑沖洗，內(nèi)壁無致熱源；并經(jīng)硅酮處理；超凈室內(nèi)組裝：標(biāo)本溶血或被外

8、源性物質(zhì)污染的可能性極小 簡便快捷：不需配制添加劑，平均減少采血時間20%，檢驗操作時間12%；減少患者不適：可實現(xiàn)一針多管操作 準(zhǔn)確可靠：預(yù)置真空度準(zhǔn)確定量采樣，血樣與添加劑的比例準(zhǔn)確，減少溶血和微凝血，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。國際統(tǒng)一頭蓋顏色標(biāo)記，易于選擇、辨認(rèn)及分類 經(jīng)濟(jì)有效：省略采樣及試驗前繁雜準(zhǔn)備工作，節(jié)省了人力和物力；定量采集，避免患者血樣浪費；直接上機(jī)檢測，減少不必要操作且樣品中無微血塊，避免機(jī)器堵塞；減少因溶血或異常凝血造成的誤檢和再檢；減少因誤檢而導(dǎo)致患者診斷及治療的延誤 真空采血法特點：13干凈安全：鈷60照射，保證內(nèi)壁100%無菌；去離子水和去14真空采血采集步驟 14真空采血采集

9、步驟 15真空采血常用器材及用途15真空采血常用器材及用途16 真空采血容器色澤及應(yīng)用范圍顏 色 抗 凝 劑 應(yīng) 用 范 圍 灰 草酸鹽、氟化鈉 全血、血漿，抑制糖原分解的酶 黃 生化、免疫檢驗 綠 肝素 全血、血漿 紅 血清 藍(lán) 枸櫞酸鹽 全血、血漿，凝血一般檢查 紫 乙二胺四乙酸鹽 全血、血漿 鉀鹽用于血細(xì)胞、血小板和血液學(xué)檢查黑色 枸櫞酸鹽 血沉16 真空采血容器色澤及應(yīng)用范圍顏 色 17BD公司建議：無菌培養(yǎng)管-無添加劑紅色管-出凝血-生化管-血常規(guī)-血糖17BD公司建議：無菌培養(yǎng)管-無添加劑紅色管-出凝血-生化管18（四）動脈采血法部位:橈動脈,股動脈,肱動脈適用:血氣分析測定抗凝劑

10、:肝素注意事項:(1)必須隔絕空氣 (2)及時送檢，止血10-15min18（四）動脈采血法部位:橈動脈,股動脈,肱動脈19采血的方法學(xué)評價皮膚采血主要缺點是易于溶血、凝血和可能混入組織液。檢查結(jié)果重復(fù)性差，現(xiàn)在多已改用靜脈采血。 開放式采血由于操作環(huán)節(jié)多、難于規(guī)范統(tǒng)一，在移液及丟棄注射器時可能造成環(huán)境污染。封閉式采血法操作規(guī)范，從靜脈穿刺到血標(biāo)本轉(zhuǎn)運，整個過程血標(biāo)本皆不與外界接觸。既有利于標(biāo)本的收集運送和保存，也有利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境保護(hù)。 19采血的方法學(xué)評價皮膚采血主要缺點是易于溶血、凝血和可能混20第二節(jié) 血液標(biāo)本處理抗凝（Anticoagulation）： 應(yīng)用

11、物理或化學(xué)的方法，除去或抑制血液中某些 凝血因子的活性，以阻止血液凝固?？鼓齽ˋnticoagulant）： 能夠阻止血液凝固的化學(xué)試劑或物質(zhì)。 促凝(Coagulation )：就是用化學(xué)物質(zhì)激活血液中的纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白原變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白多聚體，進(jìn)而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊，可在短時間內(nèi)（5分鐘左右）加速所采集的血液凝固加速血液凝固的過程。 20第二節(jié) 血液標(biāo)本處理抗凝（Anticoagulatio21常用抗凝劑1、 EDTA鹽 （乙二胺四乙酸鹽）2、 枸櫞酸鈉 （檸檬酸鈉）3、 肝素4、 其它（草酸鹽等）21常用抗凝劑1、 EDTA鹽22常用抗凝劑 1、乙二胺四乙酸（EDT

12、A）鹽： 原理： EDTA有二鈉、二鉀和三鉀鹽，均可與鈣 離子結(jié)合成螯合物，從而阻止血液凝固。 Na2C10H14O8N2+Ca2+CaC10H12O8N2+2Na+2H+ 22常用抗凝劑 1、乙二胺四乙酸（EDTA）鹽：23常用抗凝劑乙二胺四乙酸（EDTA）鹽適用：血細(xì)胞計數(shù)。用量為EDTA-K2-2H2O 1.52.2mg /ml血液 不適合: 出凝血檢查。 用法:15g/L，0.4ml/5mlBlood 特點:對細(xì)胞形態(tài)影響小，但影響血小板聚集23常用抗凝劑乙二胺四乙酸（EDTA）鹽適用：24常用抗凝劑2.枸椽酸鈉（trisodium citrate） 原理： 可與血中鈣離子形成可溶性螯

13、合物，從 而阻止血液凝固。 2Na3C6H5O7+2Ca2+2CaC6H5O7-+6Na+ 24常用抗凝劑2.枸椽酸鈉（trisodium citrat25常用抗凝劑枸椽酸鈉（trisodium citrate適用： 出凝血(1:9)、血沉(1:4)、血液保養(yǎng)液 用法： 109mmol/L當(dāng)紅細(xì)胞壓積0.55或0.20時：抗凝劑用量（ml）=0.00185血量（100病人紅細(xì)胞比積%）對貧血或紅細(xì)胞增多癥患者的血液仍按1：9的比例加入抗凝劑就會發(fā)生抗凝劑相對過多/少，這將明顯地影響凝血象檢查結(jié)果。 25常用抗凝劑枸椽酸鈉（trisodium citrate適26常用抗凝劑3.肝素（hepari

14、n）：鈉鹽或鋰鹽 原理：由肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生，加強(qiáng)抗凝血酶（AT-）滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶形成 適用：血液流變學(xué)、RBC脆性、血氣分析、生化分析 26常用抗凝劑3.肝素（heparin）：鈉鹽或鋰鹽27常用抗凝劑肝素（heparin）用量：15IU/1mlBlood特點：抗凝效果強(qiáng)； 不影響血細(xì)胞體積、 不易溶血 過量會使WBC凝集、PLT減少 不適于血液學(xué)一般檢查 27常用抗凝劑肝素（heparin）28常用抗凝劑 4.草酸鈉（sodium oxalate）原理： 草酸鈉可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀， 從而阻止血液凝固。 適用：可用于凝血象檢查。 用法：常用0.1mo

15、l/L濃度，與血液按1：9比例使用。 特點： 對凝血V因子保護(hù)功能差，影響凝血酶原時間測定效果； 由于草酸鹽與鈣結(jié)合形成的是沉淀物，影響自動凝血儀的使用，因此，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為凝血象檢查選用枸椽酸鈉為抗凝劑更為適宜。28常用抗凝劑 4.草酸鈉（sodium oxalate）原29常用抗凝劑5.雙草酸鹽抗凝劑： 原理： 草酸鉀可使紅細(xì)胞縮小，而草酸銨可使 紅細(xì)胞脹大，二者適量混合后，恰好不 影響紅細(xì)胞的形態(tài)和體積。 適用： 紅細(xì)胞比積29常用抗凝劑5.雙草酸鹽抗凝劑：30物理法抗凝原理：用物理攪拌的方法去除纖維蛋白使用：玻璃珠轉(zhuǎn)動器皿采集血培養(yǎng)的綿羊血；用竹簽攪拌法抗凝，進(jìn)行紅斑狼瘡細(xì)胞檢查。30物

16、理法抗凝原理：用物理攪拌的方法去除纖維蛋白31真空采血常用促凝劑種類：凝血酶、蛇毒、硅石粉、硅碳素、纖維蛋白酶等原理：激活凝血蛋白酶，加速血液凝固 適用項目：血清生化、免疫檢驗 特別適用于急診血清生化檢驗 31真空采血常用促凝劑種類：凝血酶、蛇毒、硅石粉、硅碳素、纖32真空采血分離膠分離膠:是一種聚合高分子材料，不溶于水，具有抗氧化，耐高溫，抗低溫，高穩(wěn)定性等特性分離膠具有觸變性的性質(zhì)。觸變性現(xiàn)象就是凝膠和溶膠在機(jī)械力作用下的互變現(xiàn)象 .分離原理：分離膠的比重約在1.041.05之間。（血清的比重約在1.0261.031之間，血細(xì)胞的比重約在1.0921.095之間，在離心力的作用下，分離膠就

17、在血清和血塊間形成隔離層）。 32真空采血分離膠分離膠:是一種聚合高分子材料，不溶于水，具33血液標(biāo)本采集和保存的質(zhì)量控制采血場所要求：空間寬敞，光線明亮，通風(fēng)良好，臺面高低和寬度適宜，設(shè)置叫號設(shè)備系統(tǒng)等。 防止交叉感染， 履行環(huán)境消毒 ?；颊郀顟B(tài)要求：生理狀態(tài)飲食藥物 采血時間采血部位體位輸液壓脈帶使用溶血、凝血和脂血 33血液標(biāo)本采集和保存的質(zhì)量控制采血場所要求：患者狀態(tài)要求：34血液標(biāo)本采集和保存的質(zhì)量控制標(biāo)本運送及保存 ：唯一標(biāo)識原則 生物安全原則 盡快運送原則 一般4 冰箱；20 冰箱（1月）70保存（3月）。 標(biāo)本拒收常見原因： 溶血、脂血、抗凝標(biāo)本出現(xiàn)凝固、血液采集容器不當(dāng)、采血

18、量不足或錯誤、轉(zhuǎn)運條件不當(dāng)、申請和標(biāo)本標(biāo)簽不一致、標(biāo)本污染、容器破漏等廢棄標(biāo)本處理：實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004） 34血液標(biāo)本采集和保存的質(zhì)量控制標(biāo)本運送及保存 ：標(biāo)本拒收常35第三節(jié) 血涂片的制備和細(xì)胞染色Making Blood Films and Staining35第三節(jié) 血涂片的制備和細(xì)胞染色Making Blood36一、制備血涂片的玻片要求玻片要求：清潔、干燥、中性、無油膩 新玻片： 重鉻酸鉀洗液或稀鹽酸10%浸泡 24小時，然后清洗。舊玻片： 肥皂水泡，煮沸20分，清洗，烘干。推片： 光滑 36一、制備血涂片的玻片要求玻片要求：清潔、干燥、中性、無油37二

19、、血涂片制備方法 37二、血涂片制備方法 38兩種推片方式38兩種推片方式39三、一張良好的血涂片要求 良好的血片：厚薄適宜，頭體尾分明， 分布均勻，邊緣整齊、 兩邊留有一定的空隙。 影響因素：血量（多厚） 速度（快厚） 角度（大厚），一般3045度。 39三、一張良好的血涂片要求404041四、血片的染色1瑞氏（Wright）染色法 伊紅瑞氏染料： 1g 美藍(lán) 甲醇（AR）:600ml瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成的復(fù)合染料。亞甲藍(lán)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)，通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)。伊紅通常為鈉鹽將一定的伊紅和美藍(lán)溶解在甲醇中，即為瑞氏染液。 ME 甲醇 M+

20、+ E-41四、血片的染色1瑞氏（Wright）染色法 伊紅42甲醇的作用、溶解美藍(lán)和伊紅ME，使其解離為M+和E-，后兩者可以選擇性地被吸附于血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色。、具有很強(qiáng)的脫水作用，可固定細(xì)胞的形態(tài)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凝固時，蛋白質(zhì)被沉淀為顆粒狀或者網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高對染料的吸附作用，增強(qiáng)染色效果。42甲醇的作用、溶解美藍(lán)和伊紅ME，使其解離為M+和E-，43Wright染色法原理 染色作用： 細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用， 又有化學(xué)的親和作用。 各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對 各種染料的親和力也不一樣。43Wright染色法原理 染色作用：44Wright染色法原理酸性染料

21、伊紅+堿性物質(zhì)（HB、嗜酸顆粒） 紅色堿性染料美藍(lán)+酸性物質(zhì)（核染色質(zhì)、嗜 堿顆粒、PLT等）蘭色ME+中性物質(zhì)紫紅色44Wright染色法原理45Wright染色法原理PH對細(xì)胞染色影響1、細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定。2、酸性環(huán)境：偏紅 H+增多，與蛋白COO-結(jié)合增多，游離NH4+增多， 與伊紅結(jié)合增多。3、堿性環(huán)境：染色偏蘭 H+減少，COO-游離增多，與美藍(lán)結(jié)合增多。4、要求 PH6.46.8為宜。（磷酸鹽緩沖液）45Wright染色法原理PH對細(xì)胞染色影響46試劑使用注意點：新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37下貯存一定時間，才能使用。貯存時間越久，染色效果越好。如2010年配制2011年使用，一般至少年。采用吸光度比值來評價瑞氏染液的質(zhì)量。 rA=A650/A525。美藍(lán)吸收峰波長為650nm，伊紅吸收峰波長為525nm，天青B吸收峰也為650nm。RA下降到1.30.1時即可使用。 實際血片染色觀察46試劑使用注意點：新鮮配