氧化苦參堿與阿司匹林聯(lián)合應(yīng)用對(duì)小鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用

1、氧化苦參堿與阿司匹林結(jié)合應(yīng)用對(duì)小鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用【摘要】目的研究氧化苦參堿(T)與阿司匹林(ASA)結(jié)合應(yīng)用對(duì)小鼠急性腦組織缺血的保護(hù)作用。方法70只小鼠隨機(jī)分為7組(每組10只)：模型組;小劑量ASA組(ASA20gkg-1);大劑量ASA組(ASA80gkg-1);小劑量T組(T50gkg-1);大劑量T組(T200gkg-1);ASA+T小劑量合用組(ASA20gkg-1，T50gkg-1);尼莫地平組(尼莫地平20gkg-1)。小鼠腦缺血前各藥物組分別給予上述藥物灌胃6天，每天1次;模型組給予同體積生理鹽水連續(xù)灌胃6天，每天1次。末次給藥1h后采用斷頭法制備小鼠急性全腦缺血模型。

2、觀察小鼠的喘息次數(shù)和喘息維持時(shí)間，取小鼠腦組織測(cè)定丙二醛(DA)含量和乳酸脫氫酶(LDH)活性。結(jié)果與模型組比擬，T和ASA大劑量組及尼莫地平組小鼠斷頭后喘息次數(shù)增加(P0.05或P0.01);T大劑量組及尼莫地平組小鼠斷頭后喘息維持時(shí)間延長(zhǎng)(P0.05或P0.01);T與ASA小劑量合用組小鼠斷頭后喘息次數(shù)明顯增加、喘息維持時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P0.01)。與模型組比擬，T大劑量組和尼莫地平組腦組織DA含量降低(P0.01);ASA大劑量組和尼莫地平組LDH活性升高(P0.05);T與ASA小劑量合用組DA含量顯著降低、LDH活性顯著增加(P0.05或P0.01)。結(jié)論氧化苦參堿與阿司匹林合用較各

3、自單用對(duì)小鼠急性腦缺血有明顯的保護(hù)作用，其作用可能與其抗氧自由基有關(guān)。【關(guān)鍵詞】腦缺血;氧化苦參堿;阿司匹林;保護(hù)作用;小鼠氧化苦參堿(xyatrine,T)是從豆科植物苦參、苦豆子等中別離出來的生物堿,屬于四環(huán)的喹嗪啶類。T的藥理作用包括抗肝炎病毒、抗心律失常、抗癲疒間、抗肝腎和心臟纖維化、抗腫瘤1-10等，但對(duì)腦缺血的保護(hù)作用研究不多。本課題小組的先期研究說明T對(duì)大鼠和小鼠的腦缺血有保護(hù)作用。阿司匹林(aspirin,ASA)的藥理作用包括解熱鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕、影響血小板功能等作用，在臨床上治療范圍廣,但是劑量較大，引起的不良反響較多，使其臨床應(yīng)用受到了限制。本研究通過小鼠急性腦缺血損傷模型，

4、觀察小劑量ASA與T結(jié)合用藥對(duì)腦缺血是否有保護(hù)作用。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物70只小鼠，雌雄各半，體重1820g，由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SYXK(蘇)20222022。1.2藥品與試劑T(陜西昂盛生物醫(yī)藥科技，含量98%，批號(hào)：2022011)，實(shí)驗(yàn)時(shí)以生理鹽水配制成所需濃度使用。ASA(南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司)。尼莫地平(山東新華制藥股份)。乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。丙二醛(DA)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。752型紫外光柵分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)，高速離心機(jī)(珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器)，HH-42快速恒溫?cái)?shù)顯水箱(常州國(guó)

5、華電器)。1.3實(shí)驗(yàn)分組和給藥方法70只小鼠隨機(jī)分為7組(每組10只):模型組;小劑量ASA組(ASA20gkg-1);大劑量ASA組(ASA80gkg-1);小劑量T組(T50gkg-1);大劑量T組(T200gkg-1);ASA+T小劑量合用組(ASA20gkg-1，T50gkg-1);尼莫地平組(尼莫地平20gkg-1)。各給藥組給予不同藥物連續(xù)灌胃6天，每天1次;模型組給予同體積生理鹽水連續(xù)灌胃6天，每天1次。1.4小鼠急性腦缺血模型制備和觀察指標(biāo)末次給藥1h后，各組采用斷頭法制備小鼠的急性腦缺血模型，即在小鼠的兩耳根后面斷頭，立即記錄小鼠的喘息次數(shù)和喘息維持時(shí)間。取缺血腦組織,制成1

6、0%勻漿液,按試劑盒操作步驟測(cè)定腦組織DA和LDH活性。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所得計(jì)量資料均以s表示，采用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)各組之間進(jìn)展Dunnett方法分析。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1T與ASA合用對(duì)小鼠斷頭后喘息次數(shù)和喘息維持時(shí)間的影響與模型組比擬，T和ASA小劑量組小鼠斷頭后喘息次數(shù)和喘息維持時(shí)間差異均無顯著性(P0.05);T和ASA大劑量組及尼莫地平組小鼠斷頭后喘息次數(shù)明顯增加(P0.05或P0.01);T大劑量組及尼莫地平組小鼠斷頭后喘息維持時(shí)間延長(zhǎng)(P0.05或P0.01);而T與ASA小劑量合用組小鼠斷頭后喘息次數(shù)明顯增加、喘息維持時(shí)間明

7、顯延長(zhǎng)(P0.01)。見表1。表1T與ASA合用對(duì)小鼠斷頭后喘息次數(shù)和喘息維持時(shí)間的影響與模型組比擬：*P0.05，*P0.012.2T與ASA合用對(duì)缺血腦組織DA含量和LDH活性的影響與模型組比擬，T和ASA小劑量組腦組織DA含量和LDH活性差異均無顯著性(P0.05);T大劑量組和尼莫地平組腦組織DA含量降低(P0.01);ASA大劑量組和尼莫地平組LDH活性升高(P0.05);而T與ASA小劑量合用組DA含量顯著降低、LDH活性顯著增加(P0.05或P0.01)。見表2。表2T與ASA合用對(duì)小鼠腦組織DA含量和LDH活性的影響與模型組比擬：*P0.05，*P0.013討論本實(shí)驗(yàn)采用小鼠急

8、性腦缺血模型即全腦的急性缺血模型，在小鼠急性腦缺血實(shí)驗(yàn)中，腦血液供給中斷,但腦中原有的血液和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)尚能使腦功能維持一段時(shí)間。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，T和ASA的高劑量組小鼠的存活時(shí)間有所延長(zhǎng)，而且腦組織LDH活性增強(qiáng)、DA含量降低。而T和ASA的低劑量組與模型組比擬無明顯差異，T與ASA小劑量合用組顯著延長(zhǎng)了小鼠的喘息時(shí)間和呼吸次數(shù)，進(jìn)一步證實(shí)T與ASA合用產(chǎn)生協(xié)同作用，能使腦耗氧減少，從而對(duì)斷頭小鼠腦缺血產(chǎn)生保護(hù)作用，其作用與尼莫地平組相當(dāng)。DA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物,其含量的變化間接反映了組織中氧自由基含量的變化,因此可通過測(cè)定DA含量來評(píng)價(jià)腦組織中氧自由基

9、的程度和脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，T與ASA小劑量合用能降低小鼠腦缺血損傷后腦組織DA含量,提示T與ASA小劑量合用的作用與其抗自由基過氧化有關(guān)。LDH是腦缺血后腦組織受損時(shí)最敏感的酶，監(jiān)測(cè)LDH的活性變化可以理解腦缺血的范圍和輕重程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小劑量T與ASA合用在小鼠腦缺血后，能顯著升高腦組織中LDH活性，提示腦缺血損傷程度減輕，對(duì)腦缺血有保護(hù)作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1陳小松,王國(guó)俊,蔡雄，等.氧化苦參堿對(duì)乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)基因小鼠乙肝抗原表達(dá)的影響J.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1999,20(10):746-748.2韓向東，陳長(zhǎng)勛.苦參堿的心血管藥理研究進(jìn)展J.中藥新藥與臨床藥理,202

10、2,17(1):72-75.3閆桂珍,郭景生.苦參堿滴丸抗心律失常作用的實(shí)驗(yàn)研究J.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2022,25(3):142-143.4張琳娜,李斌,白潔.氧化苦參堿對(duì)青霉素致癇大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究J.山西中醫(yī),2022,21(4):50-52.5成揚(yáng)，張旻，李華，等.氧化苦參堿對(duì)小鼠免疫性肝纖維化作用機(jī)制的研究J.現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué),2001,13(1):14-16.6沈鐳,陸倫根,曾民德,等.氧化苦參堿注射液對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化治療作用J.肝臟,2022,8(1):35-36.7楊文卓,曾民德,范竹萍,等.氧化苦參堿防治半乳糖胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究J.中華肝臟病雜志,2002,10(3):193-196.8楊文卓,曾民德,范竹萍,等.氧化苦參堿防治二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究J.中華消化雜