米諾環(huán)素對(duì)衰老癡呆大鼠腦組織eNOS、iNOS表達(dá)的影響

1、米諾環(huán)素對(duì)朽邁癡呆大鼠腦構(gòu)造eNOS、iNOS表達(dá)的影響趙宇蔡志友晏勇余昌胤張駿黃良國(guó)晏寧承歐梅李潔穎蔣萍【摘要】目的不雅察米諾環(huán)素(inyline)對(duì)朽邁癡呆大鼠學(xué)習(xí)影象和腦構(gòu)造eNS、iNS表達(dá)的影響，探究米諾環(huán)素對(duì)朽邁癡呆腦庇護(hù)作用機(jī)制。要領(lǐng)istar大鼠隨機(jī)分組：假手術(shù)組(S組)、癡呆模子組(組)、米諾環(huán)素治療組(T組)。酶聯(lián)免疫吸附法和免疫構(gòu)造化學(xué)法檢測(cè)大鼠腦構(gòu)造eNS、iNS的含量，舉動(dòng)學(xué)檢測(cè)大鼠影象學(xué)習(xí)改變。效果T、組與S組大鼠前后兩次跳臺(tái)實(shí)行、水迷宮實(shí)行的效果有明顯性差異(P0.01)，T組與組大鼠前后兩次跳臺(tái)實(shí)行、水迷宮實(shí)行的檢測(cè)效果有明顯性差異(P0.01)。T組iNS表達(dá)

2、較組低落(P0.01),T組eNS表達(dá)較組增高(P0.01)；T組eNS、iNS表達(dá)較S組增高(P0.01)；組eNS、iNS表達(dá)較S組明顯增高(P0.01)。結(jié)論米諾環(huán)素能低落朽邁癡呆大鼠腦構(gòu)造iNS、加強(qiáng)eNS表達(dá)按捺氧化應(yīng)激反響發(fā)揮腦庇護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】癡呆；米諾環(huán)素；一氧化氮合酶【Keyrds】Deentia;inyline;Nitrixidesynthas一氧化氮合酶(NS)是催化一氧化氮(N)生物合成的酶，普及存在于種種范例的細(xì)胞中。內(nèi)皮源性一氧化氮合酶(eNS)可以激活血管平滑肌細(xì)胞中的可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，使胞內(nèi)AP濃度升高，從而起到擴(kuò)張血管、按捺血小板和白細(xì)胞黏附、聚攏的作用，

3、發(fā)揮神經(jīng)庇護(hù)成效1。誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNS)重要漫衍于巨噬細(xì)胞、炎性中性粒細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和星型細(xì)胞等，一旦合成績(jī)不竭地產(chǎn)生N，直至底物耗盡，過(guò)量產(chǎn)生的N可通過(guò)活性氮、氧化應(yīng)激效應(yīng)對(duì)腦構(gòu)造造成損害2。米諾環(huán)素作為四環(huán)素類(lèi)藥物中一種有用的神經(jīng)細(xì)胞庇護(hù)劑，在按捺神經(jīng)炎癥3、按捺小膠質(zhì)細(xì)胞激活4、按捺基質(zhì)金屬卵白酶表達(dá)5，6、按捺活性氧產(chǎn)物和氧化應(yīng)激的產(chǎn)生7，8、按捺細(xì)胞調(diào)亡9歷程等發(fā)揮腦庇護(hù)作用。本研究通過(guò)不雅察朽邁癡呆大鼠動(dòng)物模子腦構(gòu)造eNS和iNS的表達(dá)，探究NS在朽邁癡呆中的發(fā)病機(jī)制，并接納米諾環(huán)素對(duì)朽邁癡呆大鼠舉行干預(yù)，探究米諾環(huán)素對(duì)朽邁癡呆腦庇護(hù)作用的機(jī)制。

4、1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1質(zhì)料1.2要領(lǐng)穿梭箱底部鋪以不銹鋼電柵，巨細(xì)為601625，箱頂部裝有蜂鳴器。練習(xí)時(shí)，將大鼠放在箱內(nèi)任一側(cè)，20s后出現(xiàn)蜂鳴音，連續(xù)15s，蜂嗚5s后由底部電柵賜與電刺激(電流強(qiáng)度1.5A)，大鼠受到電刺激后逃到另一端，電擊蜂鳴主動(dòng)制止。記載動(dòng)物在單獨(dú)蜂鳴期間躲避的時(shí)間(主動(dòng)躲避時(shí)間)和遭受電刺激的時(shí)間以及電擊的次數(shù)。全部動(dòng)物天天測(cè)試1次，每次20個(gè)循環(huán)，全程練習(xí)。rris水迷宮作為檢測(cè)實(shí)行動(dòng)物學(xué)習(xí)影象程度的緊張東西，其測(cè)試步伐重要包羅定位飛行實(shí)行和空間探究實(shí)行兩個(gè)部門(mén)。(1)定位飛行實(shí)行：用于丈量大鼠獵取履歷(學(xué)習(xí))的本領(lǐng)。實(shí)行前1d下戰(zhàn)書(shū)將大鼠放入水中自由游泳2in，不雅

5、察其游泳姿勢(shì)并使其認(rèn)識(shí)實(shí)行情況。實(shí)行歷時(shí)4d，天天上、下戰(zhàn)書(shū)兩個(gè)時(shí)間段，每個(gè)時(shí)間段練習(xí)4次，每次練習(xí)隨機(jī)選擇一個(gè)入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水池，同一次練習(xí)全部大鼠入水點(diǎn)雷同。記載大鼠尋到平臺(tái)的時(shí)間，即暗藏期。(2)空間探究實(shí)行：用于丈量大鼠保存履歷(影象)的本領(lǐng)，即大鼠學(xué)會(huì)探求平臺(tái)后，對(duì)平臺(tái)空間位置影象的本領(lǐng)。在練習(xí)的末了時(shí)段撤消平臺(tái)，然后在B象限任選一個(gè)入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，不雅測(cè)其在120s內(nèi)涵各象限的游泳間隔及其占總間隔的百分比，以及120s內(nèi)穿越各象限平臺(tái)相應(yīng)位置(即平臺(tái)在D象限地點(diǎn)的位置)的次數(shù)。記載大鼠尋到平臺(tái)的時(shí)間(學(xué)習(xí)暗藏期)，及120s內(nèi)穿越各象限平臺(tái)相應(yīng)位置的次數(shù)(

6、影象暗藏期)，比力各組暗藏期，評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)影象成效。大鼠麻醉后結(jié)實(shí)于手術(shù)臺(tái)上，快速心臟抽血約5l注入試管中，室溫下靜置2h后，4離心，3000r/in，10in，取血清。在冰臺(tái)上敏捷分散大鼠一側(cè)的海馬，按2.5l/g腦質(zhì)量參加相稱(chēng)體積的冰生理鹽水，用勻漿器將構(gòu)造研磨，然后冰浴下超聲波破壞制成勻漿，4，10000r/in離心10in，取上清液。實(shí)行嚴(yán)酷根據(jù)eNS、iNS酶聯(lián)免疫吸附法說(shuō)明書(shū)步調(diào)舉行。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰全部數(shù)據(jù)以xs表現(xiàn)，全部數(shù)據(jù)接納SPSS11.0軟件包舉行統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰，同一組內(nèi)差異時(shí)相點(diǎn)的比力接納方差闡發(fā)，兩組之間同一時(shí)相點(diǎn)的比力接納t查驗(yàn)。2效果2.1水迷宮、穿梭箱實(shí)行效

7、果穿梭箱實(shí)行檢測(cè)表現(xiàn)組大鼠的電擊次數(shù)與S組比力明顯增長(zhǎng)(P0.01)，主動(dòng)躲避次數(shù)明顯低落(P0.01)；組大鼠的學(xué)習(xí)暗藏期和影象暗藏期時(shí)間明顯延伸(P0.01)；T組與組同時(shí)相點(diǎn)比力電擊次數(shù)明顯低落(P0.01)，主動(dòng)躲避次數(shù)明顯增高(P0.01)，T組大鼠的學(xué)習(xí)暗藏期和影象暗藏期時(shí)間明顯延伸(P0.01)，組各組間大鼠舉動(dòng)學(xué)的檢測(cè)效果間差異無(wú)明顯性(P0.05)，T組各組間大鼠舉動(dòng)學(xué)的檢測(cè)效果差異也無(wú)明顯性(P0.05)(表1)。表1水迷宮、穿梭箱實(shí)行效果(略)2.2iNS的表達(dá)與闡發(fā)ELISA法檢測(cè)iNS表現(xiàn)組腦構(gòu)造內(nèi)iNS程度顯著增高(P0.01),顛末米諾環(huán)素治療后，iNS程度明顯低

8、落(P0.01)(表2)。免疫構(gòu)造化學(xué)法D值與ELISA值具有同等性，模子鼠腦構(gòu)造內(nèi)iNS程度明顯增高(P0.01)，顛末米諾環(huán)素治療后，iNS程度明顯低落(P0.01)；T組與組同時(shí)相點(diǎn)比力iNS表達(dá)明顯低落(P0.01)；組各組間效果差異無(wú)明顯性(P0.05)，T組各組間檢測(cè)效果差異無(wú)明顯性(P0.05)。顛末米諾環(huán)素治療后iNS腦內(nèi)表達(dá)程度明顯低落。2.3各組大鼠腦構(gòu)造eNS的表達(dá)ELISA法檢測(cè)eNS表現(xiàn)組腦構(gòu)造內(nèi)eNS程度顯著增高(P0.01)。和iNS相反，顛末米諾環(huán)素治療后，eNS程度明顯增高(P0.01)(表2)。免疫構(gòu)造化學(xué)法D值與ELISA值具有同等性，模子鼠腦構(gòu)造內(nèi)eNS

9、程度明顯增高(P0.01)，顛末米諾環(huán)素治療后，eNS程度明顯增高(P0.01)；T組與組同時(shí)相點(diǎn)比力eNS表達(dá)明顯低落(P0.01)；組各組間效果間差異無(wú)明顯性(P0.05)，T組各組間檢測(cè)效果間差異無(wú)明顯性(P0.05)。顛末米諾環(huán)素治療后eNS腦內(nèi)表達(dá)程度明顯增高。表2各組iNS、eNS表達(dá)程度(略)3討論活性氮介質(zhì)N到場(chǎng)了腦缺血后的病理?yè)p傷歷程。而NS是N合成歷程中的關(guān)鍵酶。如今已有3種特異的NS被克隆，根據(jù)細(xì)胞或構(gòu)造泉源差異別離稱(chēng)為eNS、nNS、iNS。這三種亞型的NS從成效上可分為兩大類(lèi)。布局型NS包羅nNS和iNS，差異的NS在腦缺血?dú)v程中起到差異乃至相反的作用。nNS和eNS

10、漫衍于血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)構(gòu)造和血小板中，在生理?xiàng)l件下，腦構(gòu)造中eNS合成量很小，通過(guò)擴(kuò)張血管按捺血小板和白細(xì)胞黏附、聚攏，發(fā)揮神經(jīng)庇護(hù)成效1。而nNS那么是神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞在缺血急性期，NDA受體激活a2+大量?jī)?nèi)流時(shí)產(chǎn)生的，具有神經(jīng)毒性作用14。iNS一旦合成績(jī)不竭地產(chǎn)生N，直至底物耗荊這種過(guò)量產(chǎn)生的N可對(duì)缺血構(gòu)造造成損害2。通過(guò)米諾環(huán)素治療后，模子組大鼠不但舉動(dòng)學(xué)病癥明顯改進(jìn)，而且iNS的表達(dá)明顯低落，eNS的表達(dá)明顯增高，表白米諾環(huán)素對(duì)朽邁癡呆學(xué)習(xí)影象的進(jìn)步與按捺朽邁癡呆大鼠腦內(nèi)活性氮的產(chǎn)生、氧化應(yīng)激途徑有關(guān)。本研究創(chuàng)造自由基慢性中毒朽邁癡呆模子活性氮產(chǎn)物明顯增高，表白了活性氮產(chǎn)物通過(guò)氧化應(yīng)激途徑到