仙茅提取物體外抗氧化活性研究

1、仙茅提取物體外抗氧化活性研究【關(guān)鍵詞】仙茅；抗氧化才能；去除自由基；復(fù)原力仙茅為仙茅科仙茅屬植物仙茅(uruligrhiidesGaertn.)的枯燥根莖，其性溫，味苦，有小毒，用于腎陽缺乏、陽痿遺精、腰脊冷痛、尿頻尿急、寒虛崩漏、帶下、瘡瘍腫痛、癆虛內(nèi)傷、筋骨疼痛等臨床病癥1。仙茅中含有皂苷類、酚類、木脂素類、黃酮類、桉烷類及甜味蛋白和多糖類成分2。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，仙茅具有適應(yīng)原樣作用、抗炎、抗驚厥3、增強(qiáng)免疫功能4，5、抗衰老6、延緩生殖系統(tǒng)老化等生物活性2，7，8。為更好地開發(fā)利用仙茅藥用資源，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用體外抗氧化活性評價方法，對仙茅不同提取物抗氧化才能進(jìn)展評價，為仙茅的進(jìn)一步開發(fā)研究

2、提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)。1材料與方法1.1材料與試劑仙茅購自貴州省貴陽市萬東橋藥材市常二苯代苦味基肼自由基DPPH購自百靈威公司；抗壞血酸V、無水乙醇、H22、水楊酸、硫酸亞鐵、鐵氰化鉀、三氯化鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、三氟乙酸均為國產(chǎn)分析純試劑，乙醇為食用級。1.2儀器與設(shè)備1.3樣品的制備仙茅枯燥根0.9kg，加80%乙醇回流提取6次，每次2h，提取液減壓濃縮至無醇味，水浴上蒸干，得仙茅總醇提浸膏184g。取浸膏20g，用適量水混懸，分別用兩倍體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取6次，各萃取物經(jīng)真空枯燥得石油醚萃取物3g，氯仿萃取物2g，乙酸乙酯萃取物2g，正丁醇萃取物4g，避光貯存，備用。醇

3、提仙茅殘?jiān)鼡]去乙醇后，加蒸餾水回流提取6次，每次2h，合并水提液濃縮后，用乙醇沉淀多糖乙醇終濃度不小于80%，沉淀依次用95%乙醇、丙酮洗滌，真空枯燥得仙茅粗多糖186g。1.4抗氧化活性測定1.4.1去除羥基自由基H9采用Fentn反響，利用H22與Fe2+混合產(chǎn)生H，在該體系中參加水楊酸捕捉H并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510n處有最大吸收。取醇提局部萃取物各50g，用無水乙醇定容至25l；取粗多糖50g，用蒸餾水定容至25l，配制成質(zhì)量濃度為2g/l，再以該質(zhì)量濃度溶液配制成所需濃度。參加一定濃度樣品4l，9l/LFeS40.5l，9l/L水楊酸0.5l，8.8l/LH220.5l，混勻，于

4、37水浴中加熱30in，510n測定樣品吸光度Ai。將體系中的樣品改為參加4l蒸餾水，測定得空白對照吸光度A，向體系中參加0.5l蒸餾水代替8.8l/LH22，測定得樣品本底吸光度Aj，其中樣品吸光度Ai每個質(zhì)量濃度做3個平行，取平均值，以V作陽性對照，按下式計(jì)算去除率：K(%)=A-(Ai-Aj)/A100。1.4.2去除DPPH101.4.3Fe3+復(fù)原力實(shí)驗(yàn)測定11取2.5l不同質(zhì)量濃度的樣品溶液，參加0.2l/L，pH6.6磷酸緩沖液2.5l及1%鐵氰化鉀2.5l，50水浴反響20in后急速冷卻，參加10%三氟乙酸溶液2.5l混勻，0.2水相濾膜過濾，取上清液5l，參加0.02%三氯化

5、鐵溶液5l，10in后立即于700n處測定吸光值。吸光值越大那么復(fù)原才能越大，以V作為對照。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，進(jìn)展回歸、Prbit分析，選取可信度為95%，計(jì)算I50。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1對H的去除作用各提取物對H都表現(xiàn)出一定程度的去除才能圖1，并在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)呈明顯量效關(guān)系，但去除才能均弱于V。去除才能大小依次為：乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物粗多糖總醇提物，石油醚和氯仿萃取物由于樣品本身干擾大，用該方法測定誤差較大，未對其進(jìn)展比擬分析。從去除才能大小可以看出醇提局部抗氧化活性物質(zhì)主要分布在乙酸乙酯和正丁醇萃取相中?？紤]到樣品本底吸收的影響，本試驗(yàn)

6、樣品最高濃度為1g/l，未測定更高濃度樣品的去除作用。仙茅提取物對H的半去除率濃度I50大小順序?yàn)椋篤乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物粗多糖總醇提物，I50值分別為0.062、0.247、0.358、0.796和0.871g/l。I50值越小說明去除才能越強(qiáng)，乙酸乙酯萃取物相對較好，但不如V的去除效果。2.2對DPPH的去除作用從圖2可看出，各提取局部對DPPH都表現(xiàn)出較強(qiáng)的去除才能，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)呈量效關(guān)系。其中乙酸乙酯萃取物對DPPH的去除才能最好，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.05g/l時去除率到達(dá)80%，只略差于V。去除才能大小依次為：V乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物總醇提物氯仿萃取物石油醚萃取物粗多糖?？?/p>

7、以看出在醇提局部，除乙酸乙酯提取物外，隨著萃取用溶劑極性的增大，所得萃取物對DPPH的去除才能越好；水提粗多糖去除才能相對最差，濃度為0.7g/l時對DPPH的去除才能僅為80%。仙茅提取物對DPPH的I50大小順序?yàn)椋篤乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物總醇提物氯仿萃取物石油醚萃取物粗多糖，I50值分別為0.007、0.026、0.055、0.062、0.071、0.122和0.275g/l。乙酸乙酯萃取物局部I50遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其他各樣品(P0.01)，但是不如V效果顯著。圖2去除DPPH作用2.3Fe3+復(fù)原力的測定復(fù)原力的測定，可檢驗(yàn)化合物是否為良好的電子供給體，它所提供的電子可以使Fe3+復(fù)原為F

8、e2+，從而使體系溶液顏色改變，即反映出體系中氧化復(fù)原狀態(tài)的改變。吸光值越大，復(fù)原力越強(qiáng)，抗氧化效果越佳。由圖3可看出，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，各萃取物的復(fù)原力與其質(zhì)量濃度成明顯量效關(guān)系，各局部復(fù)原力大小依次為V乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物總醇提物氯仿萃取物石油醚萃取物粗多糖。從復(fù)原力測定的試驗(yàn)結(jié)果可知，在醇提局部，除乙酸乙酯提取物外，隨著萃取用溶劑極性的增大，各萃取物對Fe3+復(fù)原力增強(qiáng)。粗多糖的復(fù)原力比醇溶性物質(zhì)差。3討論在實(shí)驗(yàn)所選的3種體外抗氧化活性評價方法中，乙酸乙酯萃取物對H和DPPH的去除以及對Fe3+復(fù)原力作用均顯示出很好的效果，其次是正丁醇提取物，這可能與其化學(xué)成分主要是酚類及黃酮類大極性物質(zhì)有關(guān)，據(jù)報道仙茅中的酚性成分具有抗氧化作用12，13。仙茅含有一定量的揮發(fā)油14，在本實(shí)驗(yàn)中，相對其他組分石油醚提取物抗氧化作用不明顯，說明仙茅中揮發(fā)油成分抗氧化活性較弱。自由