促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素對(duì)小鼠小腦皮層浦肯野細(xì)胞簡(jiǎn)單峰電位活動(dòng)的影響

1、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素對(duì)小鼠小腦皮層浦肯野細(xì)胞簡(jiǎn)單峰電位活動(dòng)的影響 目的 小腦是哺乳動(dòng)物重要的運(yùn)動(dòng)中樞, 外部信息經(jīng)攀爬纖維 (Climbingfiber,CF)和苔蘚纖維 (Mossy fiber,MF)傳入小腦皮層 , 經(jīng)精密運(yùn)算后 , 由浦肯野細(xì)胞 (Purkinje cell,PC)發(fā)出各種輸出指令 , 來(lái)完成各種生理活動(dòng)。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素 (Corticotropin releasing hormone,CRH)是調(diào)控應(yīng)激反應(yīng)和內(nèi)臟活動(dòng)的一種重要神經(jīng)肽,CRH可通過(guò)傳入纖維分布于哺乳動(dòng)物小腦環(huán)路, 影響PCs的自發(fā)性放電和指令輸出, 但其影響機(jī)制尚不明確。本研究擬采用在體的

2、電生理記錄技術(shù)以及神經(jīng)藥理學(xué)手段, 在烏拉坦麻醉的狀態(tài)下 , 研究不同濃度 CRH對(duì)小鼠小腦 PC自發(fā)性單純峰電位活動(dòng)的影響, 探討CRH對(duì)小腦皮層 PC自發(fā)性活動(dòng)影響的受體機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)材料與方法 成年 (6-8 周齡 )ICR 小鼠 , 腹腔注射烏拉坦 (1.3 g/kg) 麻醉后 , 于小腦 Vermis 區(qū)的相應(yīng)部位行一個(gè)直徑為 1-1.5 mm 的開(kāi)顱術(shù) , 剝除硬腦膜 , 腦表面的暴露部位持續(xù)給予人工腦脊液 (Artificial cerebrospinal fluid,ACSF)灌流。PC自發(fā)性放電活動(dòng)采用細(xì)胞外貼附式記錄記錄方法, 通過(guò)膜片鉗放大器(AxopatCh-200B)

3、及數(shù)據(jù)采集軟件記錄小腦皮層PC自發(fā)性活動(dòng) ;CRH及受體阻斷劑采用小腦表面灌流給藥; 電生理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit 10.3軟件。各組數(shù)據(jù)均用 Mean 土表示 , 記錄細(xì)胞數(shù)用n 表示 . 采用 SPSS(Version 21) 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析, 使用單因素方差分析進(jìn)行均數(shù)的比較,P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 (1) 腦表面灌流 CRH,可導(dǎo)致 PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電即時(shí)頻率顯著減少 , 峰值左移 ; 簡(jiǎn)單峰電位放電頻率由給藥前的24.3 1.6 Hz降低到 19.4 2.1 Hz(P0.05),但 CRF對(duì)簡(jiǎn)單峰電位放電的變異系數(shù)(Coefficient ofv

4、ariation,CV)無(wú)顯著影響。 (2) 在 GABAA受體阻斷劑存在下 ,CRH可導(dǎo)致 PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電即時(shí)頻率顯著增加, 峰值右移。簡(jiǎn)單峰電位放電頻率由25.5 1.8Hz升高到 30.7 2.4 Hz(P0.05),表明 CRF可能興奮小腦皮層抑制性中間神經(jīng)元, 導(dǎo)致 PC簡(jiǎn)單峰電位放電頻率減少;阻斷抑制性中間神經(jīng)元的抑制性傳入后,CRH可興奮 PC導(dǎo)致簡(jiǎn)單峰電位放電頻率升高。 (3.) 在阻斷抑制性中間神經(jīng)元介導(dǎo)的GABA能突觸傳遞后 ,CRH對(duì) PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電頻率的升高作用具有濃度依存性, 引起 PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位升高的半數(shù)有效濃度是53.8 nM, 最大濃度

5、是 1 M。阻斷 GABAA和 AMPA受體 ,CRH可使 PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位頻率升高 , 即時(shí)頻率顯著升高 , 峰值右移 ;CRH對(duì) fPC 自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電 CV影響不大 , 表明CRH興奮 PC導(dǎo)致簡(jiǎn)單峰電位放電頻率升高不是通過(guò)增加CF和 PF的興奮性傳入來(lái)實(shí)現(xiàn)的。 (5) 在非選擇性 CRH受體阻斷劑存在下 ,CRH對(duì) PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電即時(shí)頻率影響消失 , 簡(jiǎn)單峰電位平均頻率不再升高, 表明 CRH通過(guò) CRF受體興奮小腦皮層 PC,導(dǎo)致 PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電頻率升高。在 CRH-R2阻斷劑存在下 ,CRH對(duì) PC自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位放電即時(shí)頻率的影響依然存在 , 簡(jiǎn)單峰電位平均頻率顯著升高 , 表明 CRH興奮小腦皮層 PC,不依賴于CRH-R2,提示 CRH直接作用于 PC膜上的 CRH-R1而興奮 PC導(dǎo)致自發(fā)性簡(jiǎn)單峰電位頻率升高。 結(jié)論 本研究結(jié)果表明 ,CRH可興奮小腦皮層抑制性中間神經(jīng)元導(dǎo)致PC抑制 , 阻斷 MLI-PC間的 GABA能突觸傳