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1、紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)構(gòu)測(cè)定(紅細(xì)胞抗體)方法流式細(xì)胞儀(BeckmanCoulter,貝克曼庫爾特)原理:直接免疫熒光法。FITC標(biāo)記的各型多克隆抗體,加到全血中,與紅細(xì)胞膜上 的相應(yīng)的IgG-Fc片段結(jié)合,經(jīng)過洗滌(和固定)等步驟后,在流式細(xì)胞儀上進(jìn) 行分析。標(biāo)本采集與處理受檢者的準(zhǔn)備 檢查對(duì)象生活飲食處于日常狀態(tài),空腹采血。采集部位靜脈采血抗凝劑EDTA或肝素抗凝血要求1.樣本量至少1ml。樣本應(yīng)在采集后6小時(shí)內(nèi)處理,冷凍的標(biāo)本不能用。溶血樣本不能用。試劑品牌 聯(lián)科劑型規(guī)格貯存成分1:單克隆抗體液體1ML28C2:全血溶血試劑液體A:甲酸液體70ML室溫B:碳酸鈉等液體32ML室溫C:多聚甲醛液
2、體14ML室溫3:鞘液液體20L室溫4:清洗液液體5L室溫5:熒光微球液體10ML2-8C質(zhì)控品BEKAMANCOULTER產(chǎn)品,未開瓶的試劑于2-8C保存,可在有效期內(nèi)保 持穩(wěn)定,稀釋的試劑于2-8C可穩(wěn)定2周;每天校準(zhǔn)一次:遇特殊情 況隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra操作:1)按照要求,分別向已編好號(hào)的試管中加入10 ul單克隆抗體和同型對(duì)照 (IgG-FITC)2)分別向試管中加入混勻的100u1抗凝血(1: 200稀釋后)。3)混勻,避光,室溫孵育20-30分鐘4)上機(jī)測(cè)樣報(bào)告結(jié)果報(bào)告百分?jǐn)?shù)操作性能精密度批內(nèi)五次重復(fù)CV2 %靈敏度 5001000個(gè)熒光素分子參考值IgG2.98%IgD2.88%IgG2.98%IgD2.88%Ig
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