小建中湯有無飴糖對實驗性脾虛證小鼠血管活性腸肽的影響

1、小建中湯有無飴糖對實驗性脾虛證小鼠血管活性腸肽的影響【摘要】目的研究小建中湯有無飴糖對實驗性脾虛證小鼠血管活性腸肽的影響。方法以脾虛證小鼠為實驗對象，運(yùn)用放免法測定血漿血管活性腸肽(vasativeintestinalpeptide,VIP)含量，免疫組化法分析空腸VIP的表達(dá)。結(jié)果小建中湯有無飴糖均能顯著降低血漿中VIP含量，減少空腸VIP表達(dá)。結(jié)論小建中湯有無飴糖均能顯著降低VIP，為小建中湯配伍規(guī)律研究提供實驗基矗【關(guān)鍵詞】小建中湯；脾虛證；血管活性腸肽脾虛證本質(zhì)的現(xiàn)代研究至今已有二十多年的歷史，其中胃腸激素與胃腸運(yùn)動關(guān)系的研究一直是中西醫(yī)結(jié)合研究消化系統(tǒng)及脾虛癥、脾主運(yùn)化本質(zhì)的一個熱點(diǎn)

2、1。VIP是腸神經(jīng)系統(tǒng)中具有代表性的神經(jīng)肽2，由胃腸道粘膜上的D1細(xì)胞所分泌，對胃腸運(yùn)動有重要的調(diào)節(jié)作用3。本實驗以苦寒瀉下藥番瀉葉復(fù)制脾虛證的實驗動物模型為研究對象，觀察小建中湯方中有無飴糖對實驗性小鼠脾虛證的胃腸動力及血管活性腸肽的影響，為小建中湯的臨床應(yīng)用及配伍規(guī)律研究提供藥理學(xué)實驗基矗1材料1.1藥物制備小建中湯：由飴糖、桂枝、芍藥、甘草、生姜、大棗6味中藥組成。以上中藥均購自貴陽市阜康堂藥店除飴糖外。除飴糖外，其余5味先用常水浸泡30in后加水煎煮2次，每次以武火煮沸15in，再以文火煎煮30in；煎液過濾，合并濾液；取1/2濾液按處方量參加飴糖，另1/2濾液不加飴糖，將兩濾液于60

3、水浴減壓濃縮成100%濃度(1g生藥/l)的藥液，即得實驗用原方小建中湯(XJZT)、無糖小建中湯(XJZT)，4保存?zhèn)溆?。處方中藥物比例?yán)格按照張仲景?傷寒論?與統(tǒng)編教材方劑學(xué)的藥物劑量與比例要求4。番瀉葉水浸劑：番瀉葉購自貴陽市阜康堂藥店。將番瀉葉投入沸水浸泡5，自然冷卻后過濾，搜集濾液于60水浴減壓濃縮成100%濃度(1g生藥/l)的藥液，4保存?zhèn)溆谩Ｋ兴幉慕?jīng)貴陽醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)與藥用植物學(xué)教研室龍慶德教師鑒定，均符合?中國藥典?2022版要求。補(bǔ)中益氣丸(BuzhngYiqiPill，BYP)，襄樊隆中藥業(yè)，批號：050102。實驗時用蒸餾水配成所需濃度。1.2動物清潔級K小鼠，雌雄兼用

4、，202g，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物合格證號：SXK(黔)2002-0001。1.3試劑兔抗血管活性腸肽抗體(武漢博士德生物工程)，即用型SAB試劑盒(武漢博士德生物工程)，VIP放射免疫測定試劑盒(尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù))，Biias99圖象分析系統(tǒng)(四川大學(xué)圖像圖形研究所)。2方法2.1實驗性小鼠脾虛證模型的復(fù)制、分組及給藥6取清潔級K小鼠70只，雌雄各半，體質(zhì)量202g，按體質(zhì)量隨機(jī)分為7組每組10只：正常對照組等容積蒸餾水、模型組(等容積蒸餾水)、BYP組2g/kg、XJZT高劑量組48g/kg、XJZT低劑量組12g/kg、XJZT高劑量組28g/kg、XJZT低劑量組7g/kg

5、。除對照組ig給予等容積蒸餾水外，其余組動物均ig給予番瀉葉水浸劑0.5l/只，1次/d，連續(xù)7d以復(fù)制脾虛證模型。實驗第8天，動物均ig給予相應(yīng)藥物，1次/d，連續(xù)7d。其間親密觀察小鼠的外觀體征精神活動狀況、皮毛色澤等及飲食、飲水、大小便，并每日稱量體質(zhì)量。2.2小建中湯有無飴糖對脾虛證小鼠血漿VIP含量的影響末次給藥后，小鼠眼球取血0.2l，加10EDTA-Na230l、抑肽酶40l混勻，2000r/in離心10in，取上清液于-40保存，按試劑盒說明用放免法檢測VIP含量。2.3小建中湯有無飴糖對脾虛證小鼠空腸VIP表達(dá)的影響末次給藥小鼠脫頸椎處死后，取空腸組織，10%福爾馬林固定，常

6、規(guī)脫水，包埋，切片，采用即用型二步法VIP試劑盒，檢測空腸組織VIP表達(dá)的變化。用Biias99圖像分析系統(tǒng)觀察VIP免疫反響陽性產(chǎn)物的分布情況，并測量平均灰度(平均灰度值與切片陽性表達(dá)強(qiáng)弱成反比，即平均灰度值越小，切片陽性表達(dá)越強(qiáng)，說明VIP含量越多；反之，平均灰度值越大，切片陽性表達(dá)越弱，那么VIP含量越少)。2.4數(shù)據(jù)分析與處理數(shù)據(jù)以s表示，所有資料采用Student-t檢驗處理。3結(jié)果3.1小建中湯有無飴糖對脾虛證小鼠血漿VIP含量的影響番瀉葉灌胃給予小鼠復(fù)制實驗性脾虛證動物模型，小鼠血漿中VIP含量顯著增加，連續(xù)灌胃給予XJZT和XJZT7d，XJZT和ZJZT均可以顯著降低血漿中V

7、IP的含量，而且XJZT與XJZT高、低劑量組間未見顯著性差異。結(jié)果見表1。表1小建中湯有無飴糖對實驗性脾虛證小鼠血漿VIP含量的影響略3.2小建中湯有無飴糖對脾虛證小鼠空腸VIP表達(dá)的影響免疫組化染色顯示，模型組VIP陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒，主要分布在空腸粘膜腺上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)；應(yīng)用小建中湯加減飴糖方后，空腸粘膜腺上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)VIP陽性產(chǎn)物明顯減少，表如今平均灰度值增加。XJZT高、低劑量組及XJZT高、低劑量組均可顯著降低實驗性脾虛證小鼠空腸VIP蛋白的表達(dá)，與模型組比擬，差異顯著。XJZT高、低劑量組與XJZT高、低劑量組比擬，未見明顯差異，提示小建中湯加減飴糖方對實驗性脾虛證小鼠空腸V

8、IP蛋白表達(dá)的影響無明顯差異。結(jié)果見表2和圖1。表2小建中湯有無飴糖對實驗性脾虛證小鼠空腸組織VIP蛋白表達(dá)的影響略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.4討論中醫(yī)認(rèn)為，脾胃為氣血生化之源，后天之本。脾胃具有受納水谷，并把水谷化為精微，將精微物質(zhì)吸收運(yùn)輸至全身的生理功能7。脾胃虛弱，那么受納運(yùn)輸水谷瀆職，導(dǎo)致機(jī)體胃脘脹痛，腹痛，腹脹等病癥。小建中湯是健脾益氣的著名古方，原方來源于漢代張仲景的?傷寒雜病論?，其功能“溫中補(bǔ)虛，緩急止痛，臨床主要用于治療脾胃虛寒引起的胃脘痛、腹痛、泄瀉、嘔吐、反胃、便血、水腫、痰飲等病證。“脾胃虛寒證是指中焦陽虛,納運(yùn)無權(quán)而出現(xiàn)的證候。本證多因過食生冷或投藥過寒，損傷中陽，以及久

9、病失養(yǎng)或命門火衰，中土失于溫煦所致。中焦虛寒，治宜溫陽益氣，暖胃散寒。?素問臟氣時論?：“脾欲緩，急食甘以緩之立論，既能溫中，又能祛寒，當(dāng)投以小建中湯8。本實驗發(fā)現(xiàn)給脾虛小鼠灌服小建中湯加減飴糖方后，小鼠的胃腸動力有明顯改善，其作用可能與降低血漿及空腸組織的VIP含量有關(guān)。VIP是調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)功能的重要胃腸激素之一，主要分布在胃腸神經(jīng)系統(tǒng)的粘膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢的神經(jīng)元和神經(jīng)纖維中，通過旁分泌形式作用于靶細(xì)胞，而不是以循環(huán)激素的方式對消化道運(yùn)動起抑制性調(diào)節(jié)作用9。VIP作用于胃腸平滑肌細(xì)胞外表的特異性受體，通過結(jié)合Gs蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶(A)，使細(xì)胞內(nèi)AP含量增加，從而活化AP依賴的蛋白激

10、酶A(PKA)，引起平滑肌細(xì)胞超極化，a2+內(nèi)流減少，從而導(dǎo)致平滑肌舒張10。脾虛患者血漿及腸組織VIP程度升高，其程度在一定程度上可反映胃腸道的運(yùn)動狀態(tài)。VIP的代謝異常可能是脾虛“運(yùn)化失常、運(yùn)化無權(quán)從而產(chǎn)生納呆、腹脹等病癥的因素之一。胃腸上皮細(xì)胞基底膜的VIP受體11與VIP結(jié)合，激活細(xì)胞中的A-P，促進(jìn)腸上皮細(xì)胞分泌電解質(zhì)和水分，從而導(dǎo)致腹瀉12。VIP的程度異?？赡苁瞧⑻撟C小鼠在出現(xiàn)腹脹、胃腸蠕動減弱的同時又出現(xiàn)腹瀉、便溏甚至脫肛的病理基矗本實驗采用小建中湯加減飴糖方治療脾虛證小鼠，通過降低血漿、空腸組織的VIP含量，調(diào)節(jié)小鼠的胃腸道運(yùn)動，使小鼠的腹脹、胃腸蠕動減弱、腹瀉、便溏甚至脫肛

11、等脾虛病癥得以改善。實驗結(jié)果提示小建中湯有無飴糖對VIP未見顯著影響，為其臨床應(yīng)用及配伍規(guī)律研究提供實驗基?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1劉峰,高士杰,胡慧剛，等.大黃治療休克后胃腸功能障礙的臨床研究J.中國急救醫(yī)學(xué),2022,23(1):38.2YaatH,KuaharaA,Fujiura,etal.trativityfvasularlyperfusedratdudenuJ.Neurgastrenterltil,1999,11:232.3VittriaA，staglilaA，arreseE，etal.Nitrixide-ntainingneurnsinthebvinegut,ithspeialreferen

12、etthEirrelatinshipithVIPandgalaninJ.ArhHistlytl,2000,63(4):357.4許濟(jì)群.方劑學(xué).上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1994:80.5劉汶，張敦義.番瀉葉致脾虛證動物模型的造型方法J.中國中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志,1998,6(4):231.6陶玲,史琴,沈祥春.小建中湯有無飴糖對實驗性小鼠脾虛模型的作用研究J.中藥藥理與臨床,2022,24(6):12.7賈守寧.蕨麻對脾氣虛小鼠防治作用的實驗研究J.中成藥,2022,28(7):1044.8李智申,王立紅.小建中湯制方本義淺探J.河北中醫(yī)藥學(xué)報，1997,12(4):34.9AatA,Bald

13、assanS,SeriR,etal.Gluagn-likepeptide-2relaxesusestahthrughvasativeintestinalpeptidereleaseJ.AJPhysilGastrintestLiverPhysil，2022,296(3):G678.10ShiXZ,hudhuryBK,PasrihaPJ,etal.AnvelrlefVIPinlnitilityfuntin:indutinfexitatin-transriptinuplinginsthusleellsJ.Gastrenterlgy，2022,132(4):1388.11ThpsnG,IrvineEJ,PareP,etal.Funtinalgastrintes