獨(dú)一味藥材中四種環(huán)烯醚萜苷的含量測定

1、獨(dú)一味藥材中四種環(huán)烯醚萜苷的含量測定【摘要】目的建立獨(dú)一味中四種環(huán)烯醚萜苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱atersSyetry(3.5，3.5100)，柱溫：25，流動相為甲醇-水梯度洗脫(08in，12%15%;811in，15%27%;1115in，27%;1518in，2740%;1825in，40%48%;2527in，60%甲醇)，流速1.0l/in，檢測波長235n。結(jié)果Sesaside在0.2361.18g、Shanzhisideethylester在0.4402.20g，7,8-dehydrpensteside在0.0940.470g，8-aetylshanzh

2、isideethylester在0.7503.75g的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率均在96%104%之間，RSD均小于5%。結(jié)論此方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，可作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制的方法?！娟P(guān)鍵詞】獨(dú)一味;高效液相色譜;環(huán)烯醚萜苷獨(dú)一味Laiphlisrtata(Benth.)Kud為唇形科植物，以全草或根及根莖入藥，是藏、蒙、納西族等少數(shù)民族常用草藥，生長于海拔3000以上的石質(zhì)高山草甸、河灘地，分布于甘肅、青海、西藏、四川等藏區(qū)，具有止血、鎮(zhèn)痛消腫、活血化瘀、續(xù)筋接骨等成效1。以獨(dú)一味開發(fā)出的國家新藥獨(dú)一味膠囊臨床用于治療骨外傷、術(shù)后疼痛、婦科疾病等獲得了滿意的療效。?中國藥典?2(

3、2022年版部)僅收載木犀草素做對照，以HPL測定了獨(dú)一味及膠囊中的含量3，而研究說明獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷類成分具有很好的止血、促凝血作用，是其中的止血活性成分4，5。為了更有效地控制獨(dú)一味的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜梯度洗脫法同時測定了四種環(huán)烯醚萜苷成分的含量，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)建立的測定方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，靈敏度高。1儀器與材料獨(dú)一味藥材藥材市場購置，由劉毅副教授鑒定為唇形科植物獨(dú)一味Laiphlisrtata(Benth.)Kud.的枯燥根;對照品Sesaside(純度99.87%)，Shanzhisideethylester(純度99.01%)，7,8-dehydrpenste

4、side(純度98.25%)，8-aetylshanzhisideethylester(純度98.63%)均為本實(shí)驗(yàn)自制，核磁共振檢測;甲醇為色譜純(SharlauheieS.A.)，其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：atersSyetry柱(3.5，3.5100)，柱溫：25，流動相為甲醇-水梯度洗脫(08in，12%15%;811in，15%27%;1115in，27%;1518in，27%40%;1825in，40%48%;2527in，60%甲醇)，流速1.0l/in，檢測波長235n。2.2系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性實(shí)驗(yàn)分別取對照品溶液、供試品溶液各5l進(jìn)樣，記錄色譜圖見

5、圖12。在上述色譜條件下Sesaside出峰時間為3.527in，Shanzhisideethylester出峰時間為6.605in，7,8-dehydrpensteside出峰時間為14.459in，8-aetylshanzhisideethylester出峰時間為19.775in。供試品在相應(yīng)位置有顯著峰。以Shanzhisideethylester計，理論塔板數(shù)1500，兩峰的別離度1.5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明該方法能使獨(dú)一味環(huán)烯醚萜苷較好別離，色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性及專屬性良好。圖1對照品的HPL圖譜圖2獨(dú)一味藥材的HPL圖譜2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)稱取經(jīng)五氧化二磷減壓枯燥24h的Sesaside、

6、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester對照品，加甲醇制成每毫升含Sesaside0.472g，Shanzhisideethylester0.880g，7,8-dehydr-pensteside0.188g，8-aetylshanzhisideethylester1.50g的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。精細(xì)量取上述對照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0l，分別置于6個5.0l量瓶里，甲醇定容，即得對照品溶液。分別進(jìn)樣5l，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫縱坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸，得各成分回歸方程見

7、表1。表14種成分的回歸方程ethylesterY=-7.37104+1.41106X0.99960.7503.752.4供試品溶液的制備獨(dú)一味藥材研細(xì)，過60目篩，精細(xì)稱取細(xì)粉0.5g，置25l具塞錐形瓶中，加70%甲醇25l，稱定重量，超聲20in，冷卻，用甲醇補(bǔ)充重量，過濾，精細(xì)汲取續(xù)濾液1.0l，至5l容量瓶中，70%甲醇定容，搖勻;用0.22微孔濾膜濾過即得。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.5儀器精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，10l/次，記錄峰面積，結(jié)果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetyl-shanz

8、hisideethylester峰面積的RSD分別為1.53%，3.25%，2.76%，1.97%，表示精細(xì)度良好。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液于0，2，4，6，8，10h進(jìn)樣分析，每次10l，記錄峰面積，結(jié)果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester峰面積的RSD分別為3.61%，1.20%，2.01%，3.37%。結(jié)果說明供試品溶液中Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisidee

9、thylester在10h內(nèi)穩(wěn)定。2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批獨(dú)一味，按照“2.4項(xiàng)下方法制備6份樣品液，分別測定峰面積，結(jié)果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester的RSD分別為2.75%，3.86%，3.24%，2.66%。2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取含量的獨(dú)一味樣品，6份，分別精細(xì)參加Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhi-sideethylester混合對照品溶液適量，按照“2.

10、4項(xiàng)下方法制備樣品液，進(jìn)樣10l測定峰面積，結(jié)果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester的平均回收率分別為96.75%，103.21%，103.77%，99.85%，RSD分別為2.86%，3.68%，2.77%，1.55%。2.9樣品含量測定取獨(dú)一味樣品，按上述“2.4方法制備樣品溶液，分別精細(xì)汲取10l供試品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，用外標(biāo)法測定樣品中環(huán)烯醚萜苷的含量。3批藥材的測定結(jié)果見表2。表2獨(dú)一味中Sesaside,Shanzhisideethyle

11、ster，7，8-Dehydrpensteside,8-Aetylshanzhisideethylester的測定結(jié)果3結(jié)論研究說明獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷類成分具有很好的止血、促凝血作用，是其中的止血活性成分3，本研究采用RP-HPL法對獨(dú)一味藥材中的Sesaside，Shanzhisideethylester，7,8-Dehydrpensteside，8-Aetylshanzhisideethylester4個環(huán)烯醚萜苷進(jìn)展定量測定，對獨(dú)一味藥材具有更實(shí)在際的指導(dǎo)意義。試驗(yàn)時考察了乙腈-水、乙腈-0.4%磷酸水、甲醇-水、甲醇-0.4%磷酸水4種流動相，并嘗試了這4種流動相的多種線性梯度洗脫，結(jié)果說明甲醇-水系統(tǒng)最正確，并進(jìn)展了梯度洗脫條件的優(yōu)化。采用該系統(tǒng)各個色譜峰的峰形和別離度都較好，基線穩(wěn)定。因此選用該系統(tǒng)為獨(dú)一味藥材含量測定的流動相。此方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，可作為該藥材質(zhì)量控制的方法。【參考文獻(xiàn)】1張鳳，孫連娜，陳萬生.獨(dú)一味的化學(xué)成分及藥理作用J.藥學(xué)理論雜志，2022，26(3)：169.2國家藥典委員會.中國藥典S.北京：化學(xué)出版社，2