血管性癡呆大鼠腦內(nèi)超微結(jié)構(gòu)變化及生長(zhǎng)抑素和nNOS的表達(dá)

1、血管性癡呆大鼠腦內(nèi)超微構(gòu)造變化及生長(zhǎng)抑素和nNOS的表達(dá)【摘要】目的研究血管性癡呆(VD)大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)、一氧化氮合酶(nNS)的變化，討論兩者與認(rèn)知功能的關(guān)系。方法將30只1415齡大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(SG)和模型組(DG)，DG組采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈絲線結(jié)扎方法，制備慢性前腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，SG組僅別離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，但不阻斷血流。應(yīng)用水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠空間學(xué)習(xí)記憶才能，應(yīng)用透射電鏡觀察大鼠神經(jīng)元超微構(gòu)造變化，應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)海馬及顳葉皮層SS及nNS的表達(dá)情況。結(jié)果水迷宮實(shí)驗(yàn)中DG組大鼠的逃避埋伏期(69.704.77)s較SG組(12.932.77)s明顯延長(zhǎng)(P0.05)，DG組

2、大鼠的跨平臺(tái)次數(shù)(1.801.31)較SG組(8.331.30)明顯減少(P0.05)。透射電鏡觀察，海馬神經(jīng)元高度水腫，核固縮或崩解，線粒體腫脹。免疫組化結(jié)果說(shuō)明，海馬區(qū)SS的表達(dá)DG組(3.071.44)較SG組(13.731.87)明顯下降(P0.05)，顳葉皮層區(qū)SS的表達(dá)DG組大鼠(2.730.96)較SG組(12.931.67)明顯下降(P0.05);海馬區(qū)nNS的表達(dá)DG組大鼠(29.602.03)較SG組(9.331.63)明顯增加(P0.05)，顳葉皮層區(qū)nNS的表達(dá)DG組大鼠(28.872.47)較SG組(8.401.64)明顯增加(P0.05)。結(jié)論VD大鼠學(xué)習(xí)記憶才能降

3、低，腦內(nèi)超微構(gòu)造變化明顯，腦內(nèi)SS表達(dá)程度下降、nNS表達(dá)程度增高?！娟P(guān)鍵詞】血管性癡呆;水迷宮實(shí)驗(yàn);透射電鏡;生長(zhǎng)抑素;一氧化氮合酶【Keyrds】Vasulardeentia;aterazetest;Transissineletrnirspy;Satstatin;Nitrixidesynthase血管性癡呆(vasulardeentia，VD)發(fā)病機(jī)制尚不非常清楚，目前尚無(wú)有效方法和藥物控制病程進(jìn)展。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎能造成大鼠明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙1。本文通過(guò)雙側(cè)永久性結(jié)扎老齡大鼠頸總動(dòng)脈，建立VD動(dòng)物模型，觀察VD大鼠學(xué)習(xí)記憶才能、海馬神經(jīng)元的構(gòu)造以及海馬、顳葉皮層生長(zhǎng)抑素

4、(SS)及一氧化氮合酶(NS)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況，討論VD的發(fā)病機(jī)制。1材料與方法1.1動(dòng)物模型的制備SD大鼠30只，體重約450550g，1415，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將SD大鼠隨機(jī)分為模型組(DG)及假手術(shù)組(SG)。DG組根據(jù)lssn方法2，術(shù)前12h禁食、6h禁水。10%水合氯醛(0.30l/100g)腹腔注射麻醉，頸前部去毛，消毒后沿腹側(cè)頸正中切開(kāi)，氣管旁別離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈，以“0號(hào)線雙重結(jié)扎頸總動(dòng)脈。SG組動(dòng)物行頸前切開(kāi)，別離但不結(jié)扎頸總動(dòng)脈。1.2大鼠空間學(xué)習(xí)記憶才能測(cè)試(rris水迷宮)3分為定位航行實(shí)驗(yàn)及空間搜索實(shí)驗(yàn)兩局部。定位航行實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5d，第1天讓大鼠自由游

5、泳2in;從第2天起，每天分上、下午兩段，每段訓(xùn)練4次，每次訓(xùn)練間隔為60s。訓(xùn)練時(shí)隨機(jī)選擇一個(gè)入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水中，記錄大鼠尋找并爬上平臺(tái)時(shí)所需時(shí)間(即埋伏期)。假如大鼠在120s內(nèi)未找到平臺(tái)，須將其引至平臺(tái)，這時(shí)埋伏期計(jì)為120s。空間搜索實(shí)驗(yàn)：在第5天最后一次訓(xùn)練后撤除水下平臺(tái)，在同一入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，測(cè)其在120s內(nèi)跨過(guò)原平臺(tái)相應(yīng)位置的次數(shù)。術(shù)后61d按上述方法進(jìn)展學(xué)習(xí)記憶測(cè)試，按癡呆標(biāo)準(zhǔn)以假手術(shù)組大鼠逃避埋伏期的平均值作為參考值，計(jì)算VD大鼠逃避埋伏期的平均值與參考值之差占該鼠逃避埋伏期的比值，假設(shè)該值大于20%為癡呆鼠。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xs表示，組間

6、比擬采用t檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)采用運(yùn)用SPSS11.5醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1行為學(xué)測(cè)試應(yīng)用水迷宮實(shí)驗(yàn)，對(duì)兩組大鼠學(xué)習(xí)記憶成績(jī)進(jìn)展比擬，結(jié)果說(shuō)明DG組大鼠的逃避埋伏期較SG組明顯延長(zhǎng)(P0.05)，DG組大鼠的跨平臺(tái)次數(shù)較SG組明顯減少(P0.05)，見(jiàn)表1，說(shuō)明VD大鼠學(xué)習(xí)記憶才能降低。表1水迷宮試驗(yàn)中小鼠的學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)與SG組比擬：1)P0.05，下表同2.2透射電鏡觀察SG組可見(jiàn)神經(jīng)元核膜完好，細(xì)胞器構(gòu)造正常，線粒體構(gòu)造明晰，可見(jiàn)溶酶體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。DG組可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞高度水腫，細(xì)胞核變性，核固縮或崩解;線粒體腫脹，嵴的雙層膜構(gòu)造不清、斷裂、萎縮，重者線粒體高度空

7、泡化，正常線粒體少見(jiàn);粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重脫顆粒。見(jiàn)圖1。2.3海馬區(qū)及顳葉皮層區(qū)SS、nNS陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況免疫組化結(jié)果說(shuō)明，與SG組比擬DG組SS的表達(dá)明顯下降(P0.05)，nNS的表達(dá)明顯增加(P0.05)，見(jiàn)表2、圖2。表2海馬區(qū)及顳葉皮層區(qū)SS、nNS陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況3討論智能障礙是VD的主要病癥，其中學(xué)習(xí)記憶才能減退尤為明顯。本研究行為學(xué)結(jié)果顯示，DG組的逃避埋伏期明顯延長(zhǎng)，跨越平臺(tái)次數(shù)也明顯減少，說(shuō)明VD大鼠學(xué)習(xí)記憶才能降低，與文獻(xiàn)報(bào)道一致1。本研究透射電鏡觀察DG組可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞高度水腫，細(xì)胞核變性，核固縮或崩解;線粒體腫脹，嵴的雙層膜構(gòu)造不清、斷裂、萎縮，重者線粒體高度空泡化，正常

8、線粒體少見(jiàn);粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重脫顆粒。結(jié)果顯示，DG組大鼠行為障礙的程度與海馬神經(jīng)元變性、水腫程度平行。SS為從下丘腦別離出來(lái)的能抑制生長(zhǎng)激素分泌的14氨基肽，具有激素和神經(jīng)遞質(zhì)的雙重作用。作為一種神經(jīng)遞質(zhì)廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織，參與了學(xué)習(xí)和記憶的過(guò)程，其含量降低與癡呆存在明顯相關(guān)性。早期研究發(fā)現(xiàn)癡呆者皮質(zhì)、基底核、邊緣系統(tǒng)SS含量明顯降低。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道多堵塞性癡呆(ID)患者SF中SS降低與癡呆程度呈正相關(guān)4，還有人認(rèn)為SS神經(jīng)元的損害可能是癡呆神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生紊亂的最早啟動(dòng)環(huán)節(jié)5。本研究結(jié)果顯示DG組在海馬區(qū)及顳葉皮層區(qū)SS陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯減少，證實(shí)SS表達(dá)減少與VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能減退有親密關(guān)系，提示SS參與了VD的病理過(guò)程，與文獻(xiàn)報(bào)道一致6。SS在VD發(fā)病機(jī)制中的作用尚不清楚，有學(xué)者認(rèn)為SS調(diào)控學(xué)習(xí)和記憶的途經(jīng)可能與直接興奮SS能神經(jīng)元引起鈣離子內(nèi)流增加有關(guān);此外，也可能由