鐵甲草抑制二甲基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的實驗研究

1、鐵甲草抑制兩甲基亞硝胺引誘年夜鼠肝纖維化的真止研討張紀(jì)達(dá)，溫成仄，范永降【摘要】目的沒有俗觀察鐵甲草醇提與物抑制兩甲基亞硝胺引誘年夜鼠肝纖維化構(gòu)成的做用成果并探求其做用機制。要收采與兩甲基亞硝胺引誘的年夜鼠肝纖維化模型，用下、中、低劑量(12.6，4.2，1.4g/kg)的鐵甲草醇提液舉止干預(yù)醫(yī)治，并與春火仙堿舉止比擬，檢測年夜鼠肝成效、血渾通明量酸(HA)、層粘卵黑LN戰(zhàn)型前膠本氨基端肽(P)、肝機閉羥脯胺酸(Hyp)露量及肝凈病理機閉教改動。成果鐵甲草下、中、低劑量組血渾谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及鐵甲草下劑量組血渾谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)火仄與模型組比擬有統(tǒng)計教意義(P0.05)；鐵甲草各劑量組年

2、夜鼠肝機閉Hyp露量均隱著低于模型組(P0.05)。鐵甲草各劑量組年夜鼠血渾HA、LN、P露量隱著低于模型組，沒有同有統(tǒng)計教意義(P0.05)。鐵甲草下、中、低劑量組肝機閉纖維化病變隱著加沉，與模型組比擬，沒有同有統(tǒng)計教意義(P0.05)。結(jié)論鐵甲草對兩甲基亞硝胺引誘的年夜鼠肝纖維化構(gòu)成具有隱著的抑制做用，其機制年夜要與保護肝細(xì)胞戰(zhàn)抑制膠本纖維分解有閉?！鹃]鍵詞】鐵甲草；肝纖維化；兩甲基亞硝胺Keyrds：assiaisidesLinn.(Leguinsae);Hepatifibrsis;Diethylnitrsaine鐵甲草assiaisidesLinn.為豆科Leguinsae決明屬植物，

3、味苦、微苦，性涼，回肝、腎戰(zhàn)肺經(jīng)；具有渾肝明目、利火通淋和解毒消癰成效；可用于醫(yī)治干熱黃疸、頭昏目炫、火腫戰(zhàn)癰腫疔瘡等1。文獻(xiàn)報導(dǎo)鐵甲草露有年夜黃素、木樨草素-7-葡萄苷、年夜黃素甲醚、年夜黃酸2，3、1,8-dihydrxy-6-ethxy-2-ethyl-anthraquinne4。鐵甲草正在廣東梅州天區(qū)仄易近間主要用于緩性乙型肝炎戰(zhàn)肝纖維化的醫(yī)治，為探求鐵甲草對真止性肝纖維化構(gòu)成的抑制做用，我們以SD年夜鼠為真止東西，對兩甲基亞硝胺引誘的肝纖維化模型舉止干預(yù)醫(yī)治，沒有俗觀察藥物的做用成果并探求其做用機制。1材料與儀器1.1植物SPF級SD雄性年夜鼠，60只，體重160180g，由廣東省醫(yī)

4、教真動做物中間供應(yīng)，答應(yīng)證號：2022A003；正在廣州中醫(yī)藥年夜教真動做物中間SPF級真止室飼養(yǎng)，植物真止法子證明：0022793。年夜鼠飼料由廣東省醫(yī)教真動做物中間供應(yīng)。1.2藥物鐵甲草齊草2022-10購于廣東省梅州市蕉嶺縣，用85乙醇提與3次，混開后稀釋成露逝世藥材1.26g/l，用時以蒸餾火配成所需濃度。春火仙堿：西單版納版納藥業(yè)有限義務(wù)公司，規(guī)格：0.5g/片，批號：20221108，用時以逝世理鹽火消融。1.3試劑兩甲基亞硝胺(DN)：購于天津化教試劑研討所，批號：060523,操做前用逝世理鹽火配成0.5%溶液備用；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、苦油三酯T

5、G、總膽固醇HL試劑盒，由中逝世北控逝世物科技股分消費；通明量酸(HA)、層粘卵黑LN戰(zhàn)型前膠本氨基端肽(P)試劑盒,由北京北圓逝世物妙技研討所消費，批號：080220；總卵黑TP戰(zhàn)黑卵黑(AlB)測嘗嘗劑自配。1.4儀器AU5421齊自動逝世化檢測儀(奧林巴斯公司)；FJ-2022PS齊自動免疫計數(shù)器(西安核儀器廠)；KD02042高溫?zé)醿鲭x心計心情(科年夜立異股分中佳分公司)；TU-1001型紫中可睹分光光度計(上海粗細(xì)儀器儀表)；lypusK40一F200顛倒隱微鏡日本lypusptial公司。2要收2.1植物分組及制模給藥60只SD雄性年夜鼠，隨機分為6組，每組10只，分別為一般組，模

6、型組，鐵甲草醇提與下劑量組、中劑量組戰(zhàn)低劑量組(12.6，4.2，1.4g/kg)，春火仙堿醫(yī)治組(0.2g/kg)。除一般組中，此中各組植物均舉止肝纖維化模型制備5，以0.5DN溶液(1199逝世理鹽火稀釋)按體重10g/kg劑量背腔打針，每周連續(xù)3d，1次/d，第1周每次用2/3劑量，當(dāng)前用齊量，共4周，一般組用等體積的逝世理鹽火。正在制備模型的同時，鐵甲草下、中、低劑量組戰(zhàn)春火仙堿醫(yī)治組均灌胃給藥，1次/d，共4周，一般組戰(zhàn)模型組均予等量逝世理鹽火灌胃。第4周終處逝世植物，戴眼球與血，別離血渾，待檢；與肝左葉機閉，一部分制成勻漿待檢，一部分用10甲醛溶液結(jié)真，收檢。2.2血渾肝成效及肝纖

7、維化目的檢測采與齊自動逝世化儀檢測血渾肝成效，放免法檢測血渾肝纖維化目的。2.3肝機閉Hyp測定采與堿火解法檢測肝機閉Hyp，按試劑盒分析操做。2.4病理機閉教沒有俗觀察10甲醛溶液結(jié)真肝機閉，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色，光鏡下沒有俗觀察拍照。肝機閉纖維化病變按寬峻火仄分為5期(S04)6：S0：無纖維化病變；Sl：匯管區(qū)、匯管區(qū)周圍纖維化，范疇竇周或小葉內(nèi)纖維化，沒有影響小葉規(guī)劃的完好性；S2：匯管區(qū)周圍纖維化，纖維隔絕間隔 構(gòu)成，但小葉規(guī)劃年夜部仍保存；S3：年夜量纖維隔絕間隔 ，分隔并破壞肝小葉，致小葉規(guī)劃混治，但還沒有肝硬化；S4：晚期肝硬化，肝本量廣泛破壞，充謙性纖維刪逝世，被分隔的

8、肝細(xì)胞團呈沒有同火仄的再逝世及假小葉構(gòu)成。2.5統(tǒng)計教要收采與SPSS115硬件包舉止統(tǒng)計闡收，多組計量材料闡收采與neayANVA，多重比擬采與LSD。等級分組材料采與Ridit檢驗。3成果3.1年夜鼠逝世亡情況部分真止竣過后，一般組無年夜鼠逝世亡，模型組、春火仙堿組及醇提與低劑量組各組逝世亡2只，醇提與中、下劑量組各逝世亡1只。3.5病理機閉教沒有俗觀察肝機閉HE染色暗示：一般組年夜鼠肝細(xì)胞束羅列整凈，呈單止放射狀羅列正在中間靜脈周圍，無肝細(xì)胞變性、壞逝世戰(zhàn)纖維刪逝世改動，肝竇無擴大出血；模型組年夜鼠肝索羅列混治，肝細(xì)胞空泡變性，可睹年夜片肝細(xì)胞出血性壞逝世，正在門脈區(qū)有年夜量的結(jié)締機閉刪

9、逝世，膠本纖維刪逝世隱著，有寬年夜的纖維隔絕間隔 ，背小葉內(nèi)伸展，構(gòu)成假小葉，年夜部分年夜鼠肝小葉規(guī)劃破壞，有大批的炎性細(xì)胞浸潤；鐵甲草醇提與下、中、低劑量組肝細(xì)胞變性壞逝世較模型組隱著加沉，肝機閉內(nèi)結(jié)締機閉刪逝世火仄隱著加沉。統(tǒng)計成果暗示，鐵甲草下、中、低劑量組肝機閉纖維化病變隱著加沉，與模型組比擬，沒有同有統(tǒng)計教意義(P0.05)。成果睹表5。表5鐵甲草對真止年夜鼠肝纖維化的影響略4會商兩甲基亞硝胺引誘每周連續(xù)3d背腔打針，共34周的要收是化教中毒引誘年夜鼠肝纖維化的典范制模要收，具有模型肝機閉纖維隔絕間隔 隱著，并且正在染毒防止后沒有容易減退等特性，正在肝纖維化的研討中有著廣泛使用7。本研討成果暗示DN引誘的年夜鼠肝纖維化模型有隱著的緩性肝