西番蓮葉有效成分及其非酶糖基化作用的研究

1、西番蓮葉有效成分及其非酶糖基化作用的研究【摘要】目的研究西番蓮葉有效成分抑制其非酶糖基化作用。方法運用GF254薄層層析，HPL等對西番蓮葉石油醚部位進展提取別離。結(jié)果石油醚部位的主要黃酮物質(zhì)為蕓香苷。結(jié)論蕓香苷為西番蓮葉石油醚部位抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化作用的主要成分。【關鍵詞】西番蓮；蕓香苷；非酶糖基化；高效液相色譜；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用西番蓮Passiflra是西番蓮科(Passiflraeae)西番蓮屬的多年生常綠藤本植物。西番蓮果大，可鮮食，其汁蛋黃色，尤其突出的是，其果汁所含的六十多種酯類等香味成分使其具有強烈誘人的風味和香氣，被譽為“百香果1。祖國醫(yī)學在治療糖尿病及其并發(fā)癥方面有悠久的

2、歷史，如何從中草藥中尋找抑制蛋白質(zhì)糖基化的有效成分是一項非常有價值的工作，目前這方面的研究還不多。蛋白質(zhì)非酶糖基化在糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生中占有重要地位。蛋白質(zhì)與羰基化合物(葡萄糖、果糖和乙二醛等)發(fā)生非酶糖基化反響，最終可形成一系列不可逆的糖基化終產(chǎn)物AGEs。AGEs可與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，改變蛋白質(zhì)的生理活性，引起一系列病理生理改變。此外，AGEs與動脈粥樣硬化的發(fā)生開展親密相關2。因此，如何抑制蛋白質(zhì)的非酶糖基化是近年來國內(nèi)外研究的熱點。目前國外已證實，氨基胍,二甲雙胍可抑制蛋白質(zhì)的糖基化，并相繼開發(fā)出一系列藥物3。本文通過對西番蓮葉用95%乙醇浸泡7d4，用石油醚萃取別離，對乙醇和石油醚

3、局部薄層分析、HPL分析，并對提取物進展了抑制糖基化作用的研究。1儀器與材料1.1儀器高效液相色譜日本島津公司)；pH-3型酸度計；熒光分析儀器日本島津；DHG-9246A型電熱恒溫鼓風枯燥箱上海精宏實驗設備；F-117中草藥粉碎機天津泰斯特儀器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。1.2試劑乙醇，醋酸乙酯，石油醚，正丁醇,乙二醛，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，葡萄糖，D-果糖，疊氮化鈉，牛血清白蛋白，鹽酸二甲雙胍，蕓香苷。2方法2.2鑒定HPL的色譜條件：用2%的乙酸溶液和乙腈2080做流動相，天津天和18柱，2504.6，波長337n,靈敏度0.01AuFs,柱溫30，流速0.8l/in，進樣量20l5。蕓香苷和石油醚

4、部位的薄層分析提取物的HPL的色譜見圖12。通過對上面HPL譜圖分析可知，蕓香苷對照品的主峰出峰時間與西番蓮石油醚部位的主峰出峰時間一樣，可以得出石油醚部位通過薄層色譜別離得到了蕓香苷。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3非酶糖基化2.3.1西番蓮提取物的制備文獻報道了蕓香苷和西番蓮具有抑制糖基化作用6，但是石油醚部位抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化作用的研究還未見報道。所以主要對石油醚部位進展了非酶糖基化研究。稱取西番蓮粉5g，用150l95%的乙醇浸泡7d，重復3次，減壓抽濾用下面的濾液到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)得到浸膏，用水溶解所得浸膏，依次用12，9，6l的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇各萃取3次，將所得的不同提取層的溶

5、液置于60枯燥，得到各提取層所得的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水層提取物質(zhì)量，每一層各取10g用無水乙醇溶解定容到50l備用。2.3.2溶液配制pH=7.4磷酸鹽緩沖液PBS的配制7：精細稱取Na2HP47.1635g溶解至100l,NaH2P40.9368g溶解至30l，配制成了0.2l/L的Na2HP4100l和0.2l/L的NaH2P430l，然后按8119體積比配制成0.2l/l的磷酸鹽緩沖液100l。2.3.3蛋白質(zhì)非酶糖基化反響根據(jù)文獻，反響液由12g/l乙二醛，10g/l牛血清白蛋白和2g/l疊氮化鈉在pH7.4，0.2l/L的磷酸緩沖液，2l反響液與2l水混合，于37恒溫水浴箱避

6、光孵育，15d測定熒光強度(熒光分光光度計，日本島津公司。測定條件:激發(fā)波長370n，狹縫3n，發(fā)射波長440n，狹縫3n)。2.3.4藥物干預試驗將2l提取液與2lpH7.4的PBS90下混合40in，去除有機物，再參加2l反響液，37恒溫水浴箱避光孵育。蕓香苷和二甲雙胍(100l/L)溶液2l分別與2l反響液作為陽性藥物對照，2l水與2l反響液混合作為對照組。2.3.5蛋白質(zhì)糖基化抑制率的測定根據(jù)糖基化終產(chǎn)物有自發(fā)熒光的特性，采用熒光法測定熒光值(測定條件:激發(fā)波長370n，狹縫3n，發(fā)射波長440n，狹縫3n)。根據(jù)以下公式計算抑制率：I=a-ba式中，I為抑制率;a為對照，即不加樣品液

7、的熒光強度;b為樣品熒光強度。2.3.6數(shù)據(jù)處理采用方差分析檢驗其顯著性，中藥抑制率指標均以s表示。3結(jié)果取定容于50l的石油醚部位、醋酸乙酯部位、正丁醇部位、水層部位各2l，分別參加2l反響液混合。取定容于50l的石油醚部位，精細量取2,1.6，1.2，0.8，0.4l分別與2l反響液混合，分別命名為樣1，樣2，樣3，樣4，樣5。西番蓮提取物的抑制率結(jié)果見圖3，西番蓮石油醚部位的熒光強度和抑制率見圖4。通過圖3，可以得出蕓香苷的抑制率最強，其次為石油醚部位，而且石油醚部位的作用強于二甲雙胍，西番蓮抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化的研究還是有一定的研究價值。通過圖4可知，西番蓮石油醚部位的抑制率是隨著濃度

8、的減小而減校4討論本文通過對西番蓮葉的石油醚提取物進展了薄層分析，得出石油醚局部含有蕓香苷，蕓香苷具有抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化作用，比擬了西番蓮的有效成分蕓香苷和二甲雙胍的作用效果，發(fā)現(xiàn)蕓香苷效果明顯強于二甲雙胍，可見西番蓮葉應用可能會為糖尿病患者帶來福音。【參考文獻】1陳智毅,李升峰,吳繼軍，等.西番蓮的加工利用研究J.現(xiàn)代食品科技,2022,22(1:186.2Vlassarah.Advanedglslatinend-prdutesandatherslersisJ.Anned,1996,28:419.3陳睿杰.劉允堅.糖尿病治療藥物的研究現(xiàn)狀J.廣東藥學院學報，2001,17:131.4art

9、inaRudniki，arsRbertdelivEira，TiagdaVEIgaPereira,etal.AntixidantandantiglyatinprpertiesfPassiflraalataandPassiflraedulisextratsJ.Fdheistry，2022,100:719.5ntiaA.Pereira,JaneteH.Yariake,AHPTLDensitetriDeterinatinfFlavnidsfrPassiflraalata,P.edulis,P.inarnataandP.aeruleaandparisnithHPLethdJ.PhytheialAnalysisPh