杏仁核腦片場電位的記錄及其應(yīng)用

1、杏仁核腦片場電位的記錄及其應(yīng)用【關(guān)鍵詞】杏仁核；場電位；長時程增強(qiáng)0引言1材料和方法1.2方法1.2.1杏仁核腦片制備將SD大鼠以氟烷麻醉后斷頭，迅速取腦，放置在低于4的冰冷人工腦脊液中并進(jìn)展修塊.人工腦脊液中各種離子成分及其濃度(l/L)為：Nal124，Kl3.0，al21.5，gl21.5，NaH2P31.25，NaH325,葡萄糖11.人工腦脊液始終充以950L/L2和50L/L2，pH7.27.4.用振動切片機(jī)把含有杏仁核或海馬的大腦局部切成腦片橫切面，厚度500.腦片實驗記錄前在常溫人工腦脊液中孵育至少1h.1.2.2杏仁核腦片場電位記錄將腦片移至界面型記錄槽(自制)，通過尼龍網(wǎng)與

2、槽內(nèi)人工腦脊液接觸，以12L/in持續(xù)灌流腦片,腦脊液溫度控制在(301)，用950L/L2和50L/L2混合氣體彌散在腦片周圍.在解剖顯微鏡下將雙極不銹鋼刺激電極置于外囊，記錄微電極置于基底外側(cè)杏仁核(baslateralaygdale,BLA)區(qū)，其尖端置于腦片外表下約200處.刺激電極與記錄部位之間的間隔 約為2.微電極內(nèi)充灌3l/LNal溶液，阻抗為25.場電位經(jīng)微電極放大器放大后，輸出信號用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)R6240進(jìn)展信號的記錄、分析和處理.場電位記錄基線穩(wěn)定20in后才開場下一步的實驗.場電位的斜率用平均根底值標(biāo)準(zhǔn)化.常規(guī)刺激的單相方波信號由R6240的程控刺激器產(chǎn)生.刺激方波的波寬

3、為0.1s，頻率為0.1Hz，并調(diào)整刺激強(qiáng)度使突觸反響等于最大突觸電位的一半.LTP的引導(dǎo)應(yīng)用兩串頻率為100Hz的高頻刺激，每串持續(xù)1s，串間隔為10in.記錄海馬場電位時刺激電極放置于海馬rnuanis1,A1區(qū)的Shafer側(cè)支通路上，記錄電極位于海馬A1區(qū).1.2.3藥物參加實驗過程中應(yīng)用的藥物均參加到灌流腦片的人工腦脊液中.統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)展數(shù)據(jù)錄入和整理，實驗數(shù)據(jù)用xs表示，組間采用方差分析.P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義.2結(jié)果2.1杏仁核與海馬場電位的比擬海馬A1區(qū)場電位的幅度為(1.460.10)Vn=10，圖1.BLA的電位為(0.130.05

4、)Vn=9，其放大倍數(shù)為海馬的10倍，杏仁核的場電位只有海馬A1場電位的1/10.2.3杏仁核LTP的誘導(dǎo)在場電位記錄穩(wěn)定10in后，間隔10in應(yīng)用兩串高頻刺激外囊，同時觀察場電位幅度和斜率的變化情況.BLA場電位的幅度和斜率的變化趨勢一致(表1)，兩串高頻刺激后，場電位明顯增大，之后場電位逐漸下降，高頻刺激15in后場電位根本穩(wěn)定，但仍顯著大于根底值n=9,P0.01,這種增強(qiáng)作用持續(xù)30in以上.通過對場電位斜率用根底值標(biāo)準(zhǔn)化后，可見兩串高頻刺激后30in增強(qiáng)的場電位的斜率仍然維持在根底值的(146.16.9)(n=9,P0.01，圖3).表1兩串高頻刺激前后場電位幅度和斜率的變化3討論

5、杏仁核又稱杏仁復(fù)合體，是大多數(shù)哺乳類動物共有的構(gòu)造，位于顳葉內(nèi).杏仁核可分為許多大小不等的核團(tuán)，通常將這些核群分為皮質(zhì)內(nèi)側(cè)群、基底外側(cè)核群和前杏仁區(qū)、皮質(zhì)杏仁移行區(qū)兩大過渡區(qū)4.杏仁核與皮層和皮層下構(gòu)造有著廣泛的纖維聯(lián)絡(luò)，隨著神經(jīng)科學(xué)的開展，杏仁核的功能倍受關(guān)注5.然而由于解剖構(gòu)造的關(guān)系，很難通過電生理的手段直接記錄到在體動物杏仁核的神經(jīng)細(xì)胞的活動，而且在體實驗易受到血壓、呼吸和血腦屏障等的影響.腦片標(biāo)本具有有序的神經(jīng)元和纖維排列及比擬完好的神經(jīng)解剖通路，可在解剖顯微鏡下直接定位，便于電生理操作，腦片可以復(fù)制出整體動物大多數(shù)電生理現(xiàn)象，模擬在體實驗，因此腦片是研究杏仁核功能的比擬理想的標(biāo)本.在

6、杏仁核的腦片上，刺激外囊可以在BLA記錄到突觸后反響，來自皮層的神經(jīng)纖維經(jīng)外囊投射至BLA，刺激外囊可模擬皮層的興奮輸入8.由皮層投射到BLA的纖維主要是谷氨酸能神經(jīng)元，BLA記錄到的主要是興奮性的突觸后電位.在灌流液中參加谷氨酸，場電位明顯增大；參加APA受體阻斷劑NQX后，場電位的幅度顯著降低，進(jìn)一步參加NDA受體拮抗劑APV后，場電位幾乎完全被阻斷，洗去阻斷劑后場電位根本恢復(fù)，提示外囊至BLA的突觸聯(lián)絡(luò)主要以谷氨酸為神經(jīng)遞質(zhì)，由APA受體和NDA受體介導(dǎo)，以前者為主.也提示在灌流液中參加藥物，通過觀察藥物對場電位的作用討論藥物對杏仁核功能的影響.腦片場電位常用于研究海馬的突觸可塑性如LTP和LTD，LTP和LTD被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的根本機(jī)制9.研究說明杏仁核參與情緒情感相關(guān)的學(xué)習(xí)與記憶過程，提示杏仁核的場電位有可能誘導(dǎo)出LTP.結(jié)果說明，我們的實驗系統(tǒng)在杏仁核可以誘導(dǎo)出LTP,實驗中相隔10in予以外囊高頻刺激，觀察到記錄的BLA場電位的幅度和斜率均明顯增大，而且持續(xù)時間在30in以上.杏仁核的LTP可能參與