超濾法對(duì)綠原酸提取率的影響

1、超濾法對(duì)綠原酸提取率的影響【摘要】目的考察超濾法純化金銀花提取液的最正確條件。方法采用超濾法分子截留值5000，采用高效液相色譜法測(cè)定綠原酸的含量，挑選超濾壓力、藥液流速、循環(huán)時(shí)間3個(gè)因素的最正確條件。結(jié)果壓力控制在0.050.07Pa，循環(huán)流速控制在2d/s左右，循環(huán)時(shí)間控制在2h內(nèi)，最終純化液干浸膏中綠原酸高達(dá)44.10g/g.。結(jié)論本法是純化金銀花藥材及其制劑的一種快速有效的方法?！娟P(guān)鍵詞】超濾法；金銀花；綠原酸；純化條件超濾法是20世紀(jì)60年代興起的一項(xiàng)膜別離新技術(shù)。國內(nèi)已有人將超濾法運(yùn)用到金銀花的提取中，以超濾法與醇沉法相比擬,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示70%醇沉法較超濾法得到的提取物多，但綠原酸

2、得率低，超濾法較水提醇沉法能更有效地保存有效成分1。綠原酸分子量為354.3，采用超濾(分子量截留值5000)可以除去其中的多糖、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)高速離心后的水提液進(jìn)展超濾，用高效液相色譜法測(cè)定超濾液中綠原酸含量，以確定超濾程度，防止有效成分的損失。2實(shí)驗(yàn)方法2.1綠原酸含量的測(cè)定2.1.1對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取在50真空枯燥至恒重的綠原酸對(duì)照品5g，置10L棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻；精細(xì)量取1L，置10L棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1L中含綠原酸50g)。因綠原酸受熱見光易分解，宜用棕色量瓶貯存并置4冰箱備

3、用。2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)汲取對(duì)照品溶液(50.10g/L)1,5,10,20,40L分別注入液相色譜儀，以綠原酸對(duì)照品的量為橫坐標(biāo)(x)，以綠原酸峰面積為縱坐標(biāo)(y)，計(jì)算回歸方程為：y=158.69x+2.1483，r=0.99998。結(jié)果說明綠原酸在0.05012.0040g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。2.1.4樣品測(cè)定精細(xì)汲取樣品溶液1L于10L量瓶中，相應(yīng)溶劑定容，搖勻，采用隨行標(biāo)準(zhǔn)法。2.1.5供試品溶液的制備提取液經(jīng)0.45濾膜濾過，即可。2.2超濾儀的使用2.2.1初用時(shí)的前期處理將超濾組件內(nèi)的保護(hù)液放掉，儲(chǔ)液箱內(nèi)參加清洗水，水壓不超過0.15Pa，進(jìn)水通過超濾組件經(jīng)濃縮液口和

4、超濾液口排出，不得小于10in。采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%0.5%的氫氧化鈉溶液循環(huán)清洗30in。清洗時(shí)濃縮液口排液量應(yīng)稍大于超濾液口的排液量。蒸餾水清洗超濾組件，至少40in。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.2運(yùn)行樣品經(jīng)高速離心后從料液槽中經(jīng)蠕動(dòng)泵輸入中空纖維超濾柱，其中的大分子雜質(zhì)從濃縮液出口回到原樣品料液槽中，而小分子藥液那么在壓力驅(qū)動(dòng)下透過超濾膜，從中空纖維外腔的透過液出口流出。如此反復(fù)循環(huán)，直到到達(dá)別離和濃縮要求。超濾過程中，壓力通過調(diào)壓閥和蠕動(dòng)泵的轉(zhuǎn)速來控制，流量通過蠕動(dòng)泵的轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)鈕控制。超濾完畢，用蒸餾水等壓沖洗關(guān)閉超濾液出口數(shù)次，至到達(dá)要求。2.2.3清洗每次運(yùn)行完畢后，應(yīng)對(duì)整個(gè)超濾

5、系統(tǒng)進(jìn)展清洗：用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%0.5%的NaH溶液,浸泡2h，循環(huán)清洗1h;質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%0.5%的Hl溶液，浸泡2h，循環(huán)清洗1h;用純水清洗至排出液pH值為67。洗滌過程中可正、反向交替洗滌，假如污染較嚴(yán)重那么用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的過氧化氫進(jìn)展清洗。2.3超濾條件確實(shí)定在超濾設(shè)備已經(jīng)確定的情況下，可調(diào)整的操作條件主要有操作壓力、溫度、時(shí)間、循環(huán)流速等2。2.3.1操作壓力確實(shí)定當(dāng)操作壓力較低時(shí)，膜阻可近似為常數(shù)，此時(shí)膜通量與膜兩側(cè)的壓力差成正比，壓力過低，通量過低，純化效率低。隨著操作壓力的增加，膜通量增加，純化效率進(jìn)步。但當(dāng)操作壓力過高時(shí)，由于膜的構(gòu)造比擬疏松，這樣會(huì)使膜產(chǎn)生壓實(shí)

6、或增厚，其通道變窄，膜阻增大，使溶質(zhì)對(duì)流遷移到膜外表的速度增大，從而局部地或完全地抵消了錯(cuò)流流動(dòng)的剪切力所產(chǎn)生的在膜外表沉淀的溶質(zhì)的遷移，膜通量下降。通過實(shí)驗(yàn)得出操作壓力對(duì)流速影響的曲線見圖1。從圖1可見，當(dāng)操作壓力在0.050.07Pa時(shí)，濃縮液的流速是最快的。圖1操作壓力對(duì)流速的影響略Fig.1Theeffetfperatinpressuretflrate2.3.2循環(huán)流速確實(shí)定通常操作壓力及溫度一定時(shí)，超濾循環(huán)液流速對(duì)膜通量的影響非常顯著。低流速時(shí)，大分子物質(zhì)趨向于在膜外表沉積，從而增加了濃差極化及凝膠層的形成，此時(shí)濃差極化阻力以及凝膠層的阻力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于膜阻，膜通量主要受濃差極化及凝膠層的

7、控制。因此，為減少濃差極化及凝膠層的影響，在條件允許的情況下，應(yīng)盡可能地進(jìn)步循環(huán)流速。通過實(shí)驗(yàn)，選取循環(huán)流速2d/s或偏大一些，見圖2。2.3.3循環(huán)時(shí)間確實(shí)定從圖3可看出，隨著時(shí)間的增多，超濾液不斷透過，濃縮液中大分子雜質(zhì)量也在不斷地進(jìn)步，2h之后，濃縮液流速下降迅速。所以為了進(jìn)步純化效率，節(jié)約操作時(shí)間，延長設(shè)備使用壽命，超濾2h即可。圖2超濾液流速確實(shí)定略Fig.2Deterinatinfflratefultrafitratin圖3循環(huán)時(shí)間確實(shí)定略Fig.3Deterinatinfirletie3結(jié)果與討論3.1本實(shí)驗(yàn)選用分子量截留值為5000的超濾膜，最終工藝定為超濾設(shè)備壓力控制在0.0

8、50.07Pa，循環(huán)流速控制在2d/s左右，將原藥材100g，水煎煮后合并提取液，高速離心后，進(jìn)展超濾，搜集超濾液。濃縮枯燥，測(cè)最終純化后提取物干膏得率為6.12%，其中綠原酸為44.10g/g。3.2文獻(xiàn)3,4報(bào)道超濾法較醇沉法更能有效地保存有效成分,并能進(jìn)步口服液的穩(wěn)定性和澄明度。文獻(xiàn)報(bào)道中多項(xiàng)選擇用分子量截留值為10000的超濾膜,綠原酸得率為95.37%1。我們發(fā)現(xiàn)藥物中大局部有效成分分子量皆小于5000,故采用5000分子量的超濾膜,結(jié)果純化效果更佳，實(shí)驗(yàn)過程中藥液雜質(zhì)少，透明度高，因此超濾儀器的清洗及超濾膜的再生也較10000級(jí)超濾膜簡單快速,可大大縮短工藝的時(shí)間。最終產(chǎn)品得率高，符合工藝要求?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1劉振麗，張秋海，歐興長超濾及醇沉對(duì)金銀花中綠原酸的影響J中成藥，1996，182：5.2孟根達(dá)萊,劉栓娣,青格樂.醇沉工藝對(duì)中成藥質(zhì)量的影響J.中成藥,1996,18