免疫學(xué)：免疫血清學(xué)技術(shù)課件

1、第13章 免疫學(xué)技術(shù)概論重點(diǎn) 免疫學(xué)技術(shù)類型 影響免疫血清學(xué)反應(yīng)的因素第1節(jié) 免疫血清學(xué)技術(shù)概述免疫血清學(xué)技術(shù)類型：凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、標(biāo)記抗體技術(shù)（免疫熒光抗體技術(shù)、免疫酶標(biāo)記技術(shù)、放射免疫測定）、中和試驗(yàn)等血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性和交叉性抗原與抗體結(jié)合機(jī)理血清學(xué)反應(yīng)的影響因素：電解質(zhì)、溫度、酸堿度 帶現(xiàn)象：前帶 后帶第3節(jié) 血清學(xué)技術(shù)的應(yīng)用及發(fā)展趨勢疫病診斷動(dòng)植物生理活性物質(zhì)研究物種及微生物鑒定動(dòng)植物形狀的免疫標(biāo)記生物制品研究致病機(jī)理研究分子生物學(xué)研究發(fā)展趨勢第14章 凝聚性試驗(yàn) 第1節(jié) 凝集試驗(yàn) 直接凝集試驗(yàn)：顆粒性抗原間接凝集試驗(yàn)：間接血凝實(shí)驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、炭素凝集試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)

2、：基本原理可溶性抗原（或抗體）+惰性載體（聚苯乙烯乳膠微粒、炭粒、綿羊紅細(xì)胞等） 抗原（或抗體）致敏載體 抗原（抗體）致敏載體+相應(yīng)抗體（或抗原） 被動(dòng)載體凝集（間接乳膠凝集、間接炭素凝集、間接紅細(xì)胞凝集等 ）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)雙向單擴(kuò)散（輻射擴(kuò)散）雙向雙擴(kuò)散免疫電泳對流免疫電泳火箭免疫電泳環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理：小試管內(nèi)，下層沉 淀素與上層沉淀原 在界面應(yīng)，形成白 色沉淀環(huán)。用途：檢測皮毛中的炭疽 桿菌抗原（Ascoli試驗(yàn)）標(biāo)記抗體的制備：抗原免疫動(dòng)物 抗體提取IgG標(biāo)記標(biāo)記抗體的提純標(biāo)記抗體的鑒定熒光抗體染色：標(biāo)本制備染色（直接法、間接發(fā)）應(yīng)用：用AbF檢測抗原 （定性、定位）特點(diǎn)：敏感，需熒光顯微

3、鏡免疫酶標(biāo)記技術(shù)原理：常用標(biāo)記酶：辣根過氧化物酶（HRP）酶標(biāo)抗體的制備：抗原免疫動(dòng)物 抗體提取IgG標(biāo)記（戊二醛法、過碘酸鈉法）標(biāo)記抗體的提純標(biāo)記抗體的鑒定常用免疫酶技術(shù)：免疫酶組織化學(xué)染色技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）應(yīng)用：放射免疫分析原理：競爭性RIA 固相夾心RIAAg*(F)+Ab Ag*-Ab(B) + Ag Ag-Ab標(biāo)記用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫測定、固相非競爭放射免疫測定應(yīng)用：用于藥物、激素、酶、腫瘤抗原等測定 中和試驗(yàn)（病毒、毒素中和試驗(yàn)）原理：病毒與抗血清中抗體特異結(jié)合后失去感 染易感動(dòng)

4、物、雞或鴨胚、細(xì)胞活性例1 -NDV 911d雞胚 2448h雞胚死亡 -NDV+抗血清 911d雞胚 雞胚不死亡例2 口蹄疫病毒(FMDV) 47d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 47d乳鼠 乳鼠不死亡例3 FMDV 仔豬腎傳代細(xì)胞(IB-RS-2)單層細(xì)胞 細(xì)胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解FMDV+抗血清 IB-RS-2單層細(xì)胞 細(xì)胞無病變CPU用途：1.用已知血清鑒定病毒診斷病毒病2.用已知病毒檢測血清抗體診斷病毒感染，測定病毒免疫血清效價(jià)（中和價(jià)）免疫檢測新技術(shù)SPA免疫檢測技術(shù)免疫膠體金檢測技術(shù)：免疫膠體金光鏡染色法、免疫膠體金電鏡染色法、膠體金免疫層析法等免

5、疫轉(zhuǎn)印技術(shù)免疫核酸探針技術(shù)細(xì)胞免疫技術(shù)一E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)原理：人、豬、牛、羊等的T細(xì)胞膜上的CD2是綿羊紅細(xì)胞受體，馬、豬的T細(xì)胞膜上的CD2是豚鼠紅細(xì)胞的受體。E花環(huán) 二. 酸性醋酸萘酯酶測定 原理：酸性醋酸萘酯酶 醋酸萘酯 萘酚+醋酸離子 + 六偶氮副品紅 紅色反應(yīng)物 + 甲基綠 紅黑色顆粒用途：1.鑒別T、B細(xì)胞；2.血液中T細(xì)胞計(jì)數(shù) 三淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（一）形態(tài)學(xué)試驗(yàn)法原理：PHA+T細(xì)胞（有PHA受體） 轉(zhuǎn)化 大的淋巴母細(xì)胞 顯微鏡觀察計(jì)算轉(zhuǎn)化率 轉(zhuǎn)化率=(過渡型細(xì)胞+母細(xì)胞)/200個(gè)淋巴細(xì)胞100%特點(diǎn)：簡便，準(zhǔn)確性較差 （二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）摻入法原理： 試驗(yàn)管 對照管 PHA+T細(xì)胞+3H-TdR PHA+T細(xì)胞 轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化 淋巴母細(xì)胞 淋巴母細(xì)胞 （摻入3H-TdR） （無3H-TdR摻入） 液體閃爍儀測摻入 測CPM