轉(zhuǎn)基因檢測課件

1、生物技術(shù)09級3班第3小組轉(zhuǎn)基因植株的檢測第二頁什么是轉(zhuǎn)基因作物轉(zhuǎn)基因作物，是指利用分子生物學(xué)技術(shù)將某些生物的基因轉(zhuǎn)移到其他物種中，使遺傳物質(zhì)得到改造的生物，兼具高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)、多抗等諸多優(yōu)點(diǎn)。由于目前尚缺乏科學(xué)依據(jù)證明轉(zhuǎn)基因作物及產(chǎn)品的安全性，對人類健康和環(huán)境潛在的風(fēng)險已引起廣泛關(guān)注和憂慮。如何準(zhǔn)確檢測和識別轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品，也成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。第二頁生物表型檢測法PCR 檢測法 基因芯片檢測法中心法則：DNARNA蛋白質(zhì)表現(xiàn)型Southern雜交Northern雜交特異蛋白質(zhì)檢測法（雙向電泳、免疫熒光雜交、western雜交第三頁1.生物表型檢測法觀察植株是否具有轉(zhuǎn)基因的特定性狀，以此區(qū)分轉(zhuǎn)

2、基因和非轉(zhuǎn)基因幼苗。該方法的優(yōu)點(diǎn)是可利用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的設(shè)備和條件，成本低廉，不僅可以測定識別轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物，而且可判斷其活性。但其缺點(diǎn)是只能測定活的植株，不同的轉(zhuǎn)基因性狀需單獨(dú)測定，且需要的時間較長。第二頁1.生物表型檢測法第二頁1.生物表型檢測法第二頁1.生物表型檢測法第二頁P(yáng)CR 基本測定主要包括3 個步驟： DNA 提取和純化。插入DNA 的PCR 擴(kuò)增。 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物存在的電泳確認(rèn)。2 、PCR 檢測法第二頁定量PCR 測定法（競爭PCR法）：根據(jù)目的序列合成一種突變的DNA 序列作為競爭模板，競爭模板與目的序列十分相似，可共用一套引物，根據(jù)擴(kuò)增后這兩種DNA 的含量和已知的競爭模板起始

3、DNA 濃度，確定目的模板的起始DNA濃度。2、PCR 檢測法 第二頁2、PCR 檢測法 第二頁2、PCR 檢測法 第二頁轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測芯片法將當(dāng)前通用的報告基因、抗性基因、啟動子和終止子的特異片段(靶片段)固定在玻片上制成檢測芯片。將從待檢樣品中提取的DNA 擴(kuò)增、標(biāo)記后與檢測芯片進(jìn)行雜交，雜交信號由掃描儀掃描后再經(jīng)計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行分析判斷。 3、轉(zhuǎn)基因芯片法第二頁該技術(shù)具有如下特點(diǎn)：選擇檢測的報告基因是具有明顯區(qū)別于受體細(xì)胞遺傳背景的選擇標(biāo)記，通常是在離體條件下易于檢測的酶或發(fā)光蛋白綜合了PCR和分子雜交的優(yōu)點(diǎn)，用量少，快速而且準(zhǔn)確。 芯片具有高密度、高通量的優(yōu)點(diǎn)，可同時檢測報告基因、抗性基

4、因、啟動子和終止子，非常適合于轉(zhuǎn)基因作物及加工品的檢測，具有廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。 檢測結(jié)果直接由計(jì)算機(jī)分析軟件進(jìn)行處理，使得結(jié)果更加科學(xué)、準(zhǔn)確。 3、轉(zhuǎn)基因芯片法第二頁3、轉(zhuǎn)基因芯片法第二頁將DNA分子經(jīng)酶切及瓊脂糖凝膠電泳按大小分離后，用NaOH處理使之變性，再通過毛細(xì)管作用或電轉(zhuǎn)移把凝膠中的DNA片段轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，然后與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，最后通過放射自顯影、顯色等方法檢測雜交信號。通過Southern雜交可以檢測未知DNA樣品中是否存在與探針同源的DNA序列。4、Southern雜交第二頁將RNA分子經(jīng)酶切及瓊脂糖凝膠電泳按大小分離后，用甲醛處理使之變性，再通過毛細(xì)管作用或電轉(zhuǎn)移把

5、凝膠中的RNA片段轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，然后與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，最后通過放射自顯影、顯色等方法檢測雜交信號。Northern雜交是從RNA水平檢測目的基因的表達(dá)量和大小的試驗(yàn)方法。5、Northern雜交第二頁6、特異蛋白質(zhì)檢測法雙向電泳免疫膠體金技術(shù)免疫酶標(biāo)技術(shù)免疫熒光雜交western雜交第二頁6、特異蛋白質(zhì)檢測法 -雙向電泳技術(shù)雙向電泳技術(shù)是目前使用最廣泛的一種高分辨率的蛋白質(zhì)分離技術(shù)。2-DE技術(shù)利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異完成第一向電泳分離，隨后利用分子量差異進(jìn)行二維電泳分離后。比較分析不同樣品的蛋白質(zhì)的種類和含量。第二頁6、特異蛋白質(zhì)檢測法 -雙向電泳技術(shù)第二頁6、特異蛋白質(zhì)檢測法 -雙向電泳技術(shù)第二頁6、特異蛋白質(zhì)檢測法 -western雜交蛋白質(zhì)與SDS結(jié)合后，均帶有負(fù)電荷，在電場下，其遷移率只與蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量大小有關(guān)，依其大小得以分離，通過電轉(zhuǎn)移將蛋白質(zhì)固定在硝化纖維素膜上，然后與抗體進(jìn)行親和反應(yīng)，而二抗因被酶或熒光素標(biāo)記，可通過顯色或放射性自顯影檢測蛋白質(zhì)。第二頁6、特異蛋白質(zhì)檢測法 -western雜交第二頁生物表型檢測法PCR 檢測法 基因芯片檢測法中心法則：DNARNA蛋白質(zhì)表