細菌簡單染色和革蘭氏染色課件

1、實驗目的染色原理染色方法實驗材料實驗內容與步驟注意事項實驗結果一、實驗目的 1. 學習微生物涂片，染色原理和染色的基本操作技術，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。 2. 鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術。二、染色原理 由于微生物細胞含有大量水分，對光線的吸收和反射與水溶液的差別不大,機體是無色透明的，與周圍背景沒有明顯的反差,在普通光學顯微鏡下不易識別，必須對它們進行染色，使經染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結構。 微生物細胞是由蛋白質、核酸等兩性電解質及其他化合物組成。所以，微生物細胞表現(xiàn)出兩性電解質的性質。兩性電解質兼有堿性基和酸性基，在酸性

2、溶液中離解出堿性基呈堿性帶正電。在堿性溶液中離解出酸性基呈酸性帶負電。 經測定，細菌等電點pH在2-5之間，故在中性、堿性或偏酸性溶液中，細菌的等電點均低于上述溶液的pH值，所以細菌帶負電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結合，故用堿性染料染色的較多。微生物體內各結構與染料結合力不同，故可用各種染料分別染微生物的各結構以便觀察。 三、染色方法(一)簡單染色法 簡單染色法又叫作普通染色法，只用一種染料使細菌染上顏色，如果僅為了在顯微鏡下看清細菌的形態(tài)，用簡單染色即可。(二)復染色法 用兩種或多種染料染細菌，目的是為了鑒別不同性質的細菌，所以又叫鑒別染色法。主要的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法。

3、革蘭氏染色法：不僅能觀察到細菌的形態(tài)，而且還可將所有細菌區(qū)分為兩大類：染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；染色反應呈紅色（復染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G-表示。細菌對革蘭氏染色的不同反應，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。五、實驗內容與步驟(一)細菌的簡單染色步驟 涂片干燥固定染色水洗干燥鏡檢1涂片 取干凈的載玻片于實驗臺上，在載玻片的中央滴一滴無菌蒸餾水，將接種環(huán)在火焰上燒紅，待冷卻后從斜面挑取少量菌種(表皮球菌或變形桿菌)與玻片上的水滴混勻后，在載玻片上涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜過大。2干燥 涂片最好在室溫下使其自然干燥，有時為了使之干得更快些，可將標本面向

4、上，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。 3固定 固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過23次，共約23秒鐘，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60）,放置待冷后，進行染色。4染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸復紅、草酸銨結晶紫或美藍任選一種)一滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。5水洗 斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。6干燥 用吸水紙吸去涂片邊緣的水珠，置于室溫下自然干燥。用吸水紙時切勿將菌體擦掉。 5用沙黃染液復染1mi

5、n，水洗。6用吸水紙吸掉水滴，待標本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細菌細胞的顏色。繪出細菌的形態(tài)圖并說明革蘭氏染色的結果。六、注意事項1革蘭氏染色成敗的關鍵是脫色時間，如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認為革蘭氏陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被誤認為是革蘭氏陽性菌。因此必須 嚴格把握脫色時間。 2 選用培養(yǎng)18-24小時菌齡的細菌為宜，若細菌太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。思考題1 作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關鍵一步是什么？2 通過革蘭氏染色，你認為它在微生物學中有何實踐意義？七、實驗結果簡單染色 ： 表

6、皮球菌和變形桿菌染成（ ）色。革蘭氏染色（變形桿菌與表皮球菌）；將結果填于下表中實 驗細菌的芽孢染色法和鞭毛染色法南昌大學生物基礎實驗中心一、實驗目的學習并掌握芽孢染色方法。初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征。學習并初步掌握鞭毛染色法，觀察細菌鞭毛的形態(tài)特征。二、實驗原理1.芽孢染色法原理 芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理，用不同染料進行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難，因此，當先用一弱堿性染料，如孔雀綠（malachite green）或堿性品紅（basicfuchsin）在加熱條件下進行染色時，此染料不僅可以進入菌體，而且也可以

7、進入芽孢，進入菌體的染料可經水洗脫色，而進入芽孢的染料則難以透出，若再用復染液（如番紅液）或襯托溶液（如黑色素溶液）處理，則菌體和芽孢易于區(qū)分。 2. 鞭毛染色法的原理 鞭毛是細菌的運動“器官”，一般細菌的鞭毛都非常纖細，其直徑為0.01-0.02m，在普通光學顯微鏡的分辨力限度以外，故需要用特殊的鞭毛染色法，才能看到。 鞭毛染色是借媒染劑和染色劑的沉淀作用，使染料堆積在鞭毛上，以加粗鞭毛的直徑，同時使鞭毛著色，在普通光學顯微鏡下能夠看到。鞭毛染色方法很多，本實驗主要介紹硝酸銀染色法。（見實驗課本35頁）三、實驗器材1. 儀器：顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈等。2. 染色液： 芽孢染色液：孔雀綠水溶液，沙黃水溶液 鞭毛染色液：硝酸銀鞭毛染色液A液，B液3. 菌種：枯草芽孢桿菌、變形桿菌（4）傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。（5）用沙黃水溶液復染2-3分鐘，水洗。（6）待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。2、鞭毛染色（1）菌種的準備 要求用活躍生長期菌種作為鞭毛染色的觀察。（2）載玻片的準備 將載玻片在含適量洗義粉的水中煮沸約20min,取出用清水充分洗凈，瀝干水后備用，（也可置95%乙醇中，