中成藥常規(guī)檢查課件

1、中成藥常規(guī)檢查及中蒙藥薄層色譜鑒別內(nèi)蒙古藥品檢驗所 郝美玲前言中成藥常規(guī)檢查中蒙藥薄層色譜鑒別前 言中成藥檢驗主要包括：性狀、鑒別、檢查、含量測定等。性狀從某種程度來講也是檢查的一個部分，可以作為直觀檢查。 一 . 中成藥常規(guī)檢查中國藥典2000年版一部附錄“制劑通則”項下共介紹了28個劑型，2005年版一部附錄“制劑通則”項下共介紹了30個劑型，新增了凝膠劑和涂膜劑。這里主要講幾個常見劑型的檢查項目及判定標(biāo)準(zhǔn)。有：丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑。 （一）丸劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄5頁 丸劑包括：蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、濃縮丸、蠟丸。外觀應(yīng)圓整、均勻、色澤一致，蜜丸應(yīng)細膩滋

2、潤、軟硬適中。 （2）含揮發(fā)性成分的藥品采用第二法，也叫甲苯法。具體操作：取供試品適量（約相當(dāng)于含水量14ml），精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時加入干燥、潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細部分。將A瓶置電熱套中，待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍粉末少量，使水染成藍色，以便分離觀察）。檢讀水量，并計算供試品中的含水量（%）。甲苯法儀器裝置A為500m

3、l的短頸圓底燒瓶。B為水分測定管。C為直形冷凝管。判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 大小蜜丸、濃縮蜜丸水分不得過15.0%。水蜜丸、濃縮水蜜丸水分不得過12.0%。水丸、糊丸、濃縮丸水分不得過9.0%。蠟丸不檢查水分。2. 重 量 差 異 按丸服用的丸劑照第一法檢查 取供試品10份，分別稱定重量，再與標(biāo)示總量（每丸標(biāo)示重量稱取丸數(shù)）或標(biāo)示重量相比較（無標(biāo)示重量的丸劑，與平均重量比較）。判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 9g6%（丸重范圍 9.548.46）6g7%（丸重范圍 6.425.58）3g8%（丸重范圍 3.242.76）超出重量差異限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度一倍。判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出重量差異限度的不得多于

4、2份，并不得有1份超出限度一倍。包糖衣的丸劑應(yīng)檢查丸芯的重量差異并符合規(guī)定，包糖衣后不再檢查重量差異。其他包衣丸劑應(yīng)在包衣后檢查重量差異并符合規(guī)定；凡進行裝量差異檢查的單劑量包裝丸劑，不再進行重量差異檢查。 3. 裝 量 差 異 單劑量分裝的丸劑 （袋或瓶）取10袋（瓶），分別稱定每袋（瓶）內(nèi)容物的重量，每袋（瓶）裝量與標(biāo)示裝量相比較。9g5%（丸重范圍 9.458.55）6g6%（丸重范圍 6.365.64）3g8%（丸重范圍 3.242.76）4. 裝 量裝量以重量標(biāo)示的多劑量包裝的丸劑，照最低裝量檢查法（2005年版一部附錄64頁），目前多劑量包裝的中成藥不多見，蒙成藥大多是多劑量包裝。

5、具體操作：取供試品5個（50g以上者3個），采用減重法分別求出每個內(nèi)容物的裝量與平均裝量，應(yīng)符合下列規(guī)定。如有1個內(nèi)容物不符合規(guī)定，則另取5個同法進行復(fù)驗。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn)標(biāo)示裝量20g以下規(guī)定：平均裝量不少于標(biāo)示裝量，每個內(nèi)容物裝量不少于標(biāo)示裝量的93%標(biāo)示裝量20g至50g規(guī)定：平均裝量不少于標(biāo)示裝量，每個內(nèi)容物裝量不少于標(biāo)示裝量的95%標(biāo)示裝量50g至500g規(guī)定：平均裝量不少于標(biāo)示裝量，每個內(nèi)容物裝量不少于標(biāo)示裝量的97% 4. 溶 散 時 限 根據(jù)丸劑直徑選擇不同孔徑的篩網(wǎng)（丸劑直徑在2.5mm以下的用孔徑約0.42mm的篩網(wǎng)，在2.53.5mm之間的用孔徑1.0mm的篩網(wǎng)，在3.5

6、mm以上的用孔徑約2.0mm的篩網(wǎng)）供試品黏附擋板妨礙檢查，去掉擋板再進行檢查。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 小蜜丸、水蜜丸和水丸應(yīng)在1小時內(nèi)全部溶散。 濃縮丸和糊丸應(yīng)在2小時內(nèi)全部溶散。蠟丸照腸溶衣片崩解時限檢查法檢查。大蜜丸不檢查溶散時限。 （二） 片劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄7頁 片劑包括：浸膏片、半浸膏片和原粉片片劑以口服普通片為主，另有含片、咀嚼片、泡騰片、陰道片、陰道泡騰片和腸溶片等。外觀應(yīng)完整光潔，色澤均勻，應(yīng)有適宜的硬度。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度一倍。2. 崩 解 時 限 做此項檢查（附錄62頁）時應(yīng)注意： （1）1000ml的燒杯 （2）

7、T=371 （3）擋板以“V”字形放置 （4）升降的金屬支架上下移動距離為55mm 2mm，往返頻率為每分鐘3035次。（5）調(diào)節(jié)吊藍位置使其下降時篩網(wǎng)距燒杯底部25mm，上升時篩網(wǎng)在水面下15mm處。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn)泡騰片 （含NaHCO3和有機酸）250ml燒杯（200ml1525的水）當(dāng)氣體停止逸出時，片劑應(yīng)溶解或分散在水中，無凝聚的顆粒剩留。5分鐘內(nèi)崩解含有藥材浸膏、樹脂、油脂或大量糊化淀粉的片劑，如有小部分顆粒狀物未通過篩網(wǎng)，已軟化無硬芯，按符合論。判 定 標(biāo) 準(zhǔn)陰道片 照融變時限檢查法（附錄63頁）檢查供試品3片應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部溶化或崩解溶散并通過開孔金屬圓盤，或僅殘留少量無硬芯

8、的軟性團塊。含片、咀嚼片不檢查崩解時限 3. 發(fā) 泡 量陰道泡騰片25ml具塞刻度試管（內(nèi)徑1.5cm）10支，各精密加水2ml，置371 水浴中5分鐘，各管中投入供試品1片，密塞，20分鐘內(nèi)觀察最大發(fā)泡量的體積。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn)平均發(fā)泡體積應(yīng)不少于6ml少于4ml的不得超過2片 （三）膠囊劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄10頁膠囊劑包括：硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊。 外觀應(yīng)整潔、不得有粘結(jié)、變形、滲漏或囊殼破裂現(xiàn)象，并應(yīng)無異臭。 1. 水 分 硬膠囊 將內(nèi)容物倒出來，按照水分測定法進行測定。常用方法為烘干法和甲苯法。判定標(biāo)準(zhǔn)：水分不得過9.0%。 硬膠囊內(nèi)容物為液體或半固體者不檢查水分。

9、 2. 裝 量 差 異 取10粒，分別精密稱定重量，傾出內(nèi)容物，再精密稱定囊殼重量，采用減重法，求出每粒內(nèi)容物的量，每粒裝量與標(biāo)示裝量相比較（無標(biāo)示裝量的膠囊劑，與平均裝量比較）。限度為：10% 0.5g/粒（0.550g0.450g） 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度一倍。3. 崩 解 時 限 操作同片劑必須加擋板 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 硬膠囊30分鐘 軟膠囊60分鐘（可在人工胃液中進行） 腸溶膠囊同腸溶衣片部分顆粒狀物不能通過篩網(wǎng)，已軟化無硬芯可作符合論（四）顆粒劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄6頁顆粒劑包括：可溶性顆粒劑、混懸性顆粒劑和泡騰性顆粒劑。顆粒劑應(yīng)干

10、燥、顆粒均勻、色澤一致，無吸潮、結(jié)塊、潮解等現(xiàn)象。1. 粒 度 取顆粒劑30g，稱定重量，采用雙篩分法，置藥篩內(nèi)過篩，將藥篩保持水平狀態(tài)，左右往返輕輕篩動3分鐘。 判定標(biāo)準(zhǔn) 不能通過一號篩和能通過四號篩的顆粒和粉末總和不得過15%。2. 水 分 按照水分測定法進行測定。常用方法為烘干法和甲苯法。判定標(biāo)準(zhǔn)：不得過6.0%。3. 溶 化 性 1袋或10g（多劑量包裝）+200ml熱水（7080），攪拌5分鐘，立即觀察。判定標(biāo)準(zhǔn)：可溶性顆粒劑應(yīng)全部溶化，允許有輕微渾濁；混懸性顆粒劑應(yīng)能混懸均勻。泡騰性顆粒劑 1袋+200ml水（1525），應(yīng)能迅速產(chǎn)生氣體而呈泡騰狀，5分鐘內(nèi)顆粒應(yīng)完全分散或溶解在水

11、中。均不得有焦屑等異物。 4. 裝 量 差 異 單劑量分裝的顆粒劑，取10袋(瓶)，分別稱定每袋(瓶)內(nèi)容物的重量，每袋(瓶)的重量與標(biāo)示裝量相比較 限度為：5% 10g/袋(10.50g9.50g)判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出限度的不得多于2袋（瓶），并不得有1袋（瓶）超出限度一倍。多劑量分裝的顆粒劑照最低裝量檢查法 。（五）滴丸劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄10頁。外觀應(yīng)圓整均勻，色澤一致，無沾連現(xiàn)象，表面無冷凝液黏附。 1. 重 量 差 異取20丸，精密稱定總重量，求得平均丸重后，再分別精密稱定每丸的重量，每丸重量與平均丸重相比較。判定標(biāo)準(zhǔn)： 超出限度的不得多于2丸，并不得有1丸超出限度

12、一倍。包糖衣的滴丸不檢查重量差異，包薄膜衣的滴丸檢查重量差異。2. 溶 散 時 限 操作同片劑滴丸很小，篩網(wǎng)孔徑應(yīng)為0.42mm。判定標(biāo)準(zhǔn)：不包衣的滴丸應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部溶散，包衣的滴丸應(yīng)在60分鐘內(nèi)全部溶散。以明膠為基質(zhì)的滴丸，可在人工胃液中進行檢查。中蒙藥薄層色譜鑒別（TLC鑒別）薄層色譜法(Thin Layer Chromatography，TLC) 系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁質(zhì)基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。優(yōu)點：具有簡便、快速、分離效率高、專屬性強及靈敏度高等特點。中國藥典2005

13、年版一部共收載1146個品種（包括：中、蒙、藏藥材及成藥），采用TLC法用于鑒別的已達1523項，增加TLC鑒別并不是趕時髦，而是由于TLC鑒別的專屬性強?？墒?，這并不表明顯微鑒別、理化鑒別就沒用了、不重要了, 例如：含麝香的中蒙藥，顯微鑒別起著很重要的作用。 薄層色譜鑒別操作全過程示意如下 供試液的制備 展開劑配制 紫外光燈、顯色劑 薄層板制備 檢視 展開 點樣 定性結(jié)果中蒙成藥TLC鑒別的目的是鑒別而不是分離提取，因而在條件考察時，對吸附劑、展開劑的選擇，不是如何將檢品分離成單一組分，而是如何在某一規(guī)定的條件（如：硅膠G板、GF254板、H板等），將檢品制成清晰、圓整、比移值穩(wěn)定的層析圖譜

14、，以便與對照品（或?qū)φ账幉模┻M行對照比較。 （一）供試液的制備一個理想的TLC鑒別，關(guān)鍵是所制備的供試液是否理想。供試液的制備離不開提取分離(前處理)的選擇，并不是所有的成分用甲醇、乙醇都可以提出，在薄層板上點樣、展開、顯色、檢視。例如：檢中藥或中成藥中的苷類成分(含人參、三七、黃芪、黃芩等藥材的中蒙成藥)，需要較為復(fù)雜的前處理。另外點樣液不能太濃，否則點樣后易造成嚴重拖尾。前 處 理 整個前處理包括：提取、萃取、柱層析等等一系列的處理過程，在這兒主要講一下萃取和柱層析時應(yīng)注意的幾個方面。萃?。?主要注意乳化現(xiàn)象 柱層析 ：層析柱下端用脫脂棉或玻璃纖維塞住，吸附劑均勻地、一次性加入，操作過程中

15、應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。1. 萃 取 主要注意乳化現(xiàn)象苷類成分用水飽和的正丁醇萃取及有機生物堿類成分用乙醚或氯仿萃取時，往往易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。振搖時注意避免強力振搖。 用乙醚或正己烷等萃取脂溶性有機酸或用醋酸乙酯萃取黃酮類成分時，一般不易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，可以強力振搖。 2. 柱 層 析 色譜柱下端用脫脂棉或玻璃纖維塞住。吸附劑應(yīng)均勻地、一次性加入色譜柱，振動管壁使其均勻下沉。洗脫過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面（二）薄層板的制備將固定相和水(或一定濃度的CMC-Na溶液或其他水溶液)按13的比例混勻研磨,涂布成均勻的、規(guī)定厚度的薄層，自然晾干后，在110烘烤30分鐘活化，放

16、在有干燥劑的儲板箱中備用。（三） 點 樣點樣的質(zhì)量對分離效果影響很大。點樣時最好在空氣濕度比較低的地方，因為吸附劑在空氣中易吸收濕氣而降低其活性。整個點樣過程最好控制在10分鐘左右。 點樣基線距底邊1.01.5cm，點樣直徑一般為24mm，各原點必須在同一水平線上，點間距約為1.52.0cm。點樣時勿損傷薄層表面。點樣量大時，要分次點加，使原點集中， 為保證樣品不擴散，可借助吹冷、熱風(fēng)或加熱方式進行點樣。 （四） 展開劑和展開展開劑的選擇主要是根據(jù)吸附劑、分離物質(zhì)的性質(zhì)以及展開劑極性三者之間的關(guān)系來考慮。展開方式很多，有上行、下行、雙向、多次展開等。最常用的是上行展開法，所用展開缸的底部必須平

17、整，將薄層板放入后能呈水平，磨口蓋要嚴密，必要時可涂少量凡士林密封，但須嚴防污染薄層板及展開劑。在展開缸中，薄層板對溶劑蒸氣的吸附對薄層分離的影響很大。由于對飽和度的要求不同，如有的需要用展開劑先將展開缸飽和，有的需將薄層板在展開缸中用展開劑飽和，有的則不需要飽和，故需按不同要求進行操作。 薄層板浸入展開劑的深度一般為0.5cm(上行展開)或0.3cm(斜上行展開)，展開距離一般為815cm,高效薄層板展距58cm。展開劑宜臨用新配，不宜反復(fù)使用。（五） 顯 色物理方法有熒光法、熒光熄滅法等，化學(xué)方法一般是用化學(xué)試劑顯色的方法。顯色劑有通用顯色劑(如硫酸乙醇溶液、磷鉬酸乙醇溶液、碘蒸氣等)和專

18、屬顯色劑(如生物堿用稀碘化鉍鉀、氨基酸用茚三酮試液等)。（六）檢 視日光下目測檢視：斑點本身有顏色、顯色劑顯色后斑點呈色。紫外光燈下檢視：365nm、254nm 六味地黃丸中熊果酸的薄層色譜結(jié)果Documentation with digital camera Visual inspection of Astragalus and HedysarumTrack 1, 2, 3 = Astragalus 2, 5, 10 L Track 4, 5, 6 = Hedysarum 10, 5, 2 TrTrack 1, 2, 3 = Astragalus 2, 5, 10 L Track 4, 5,

19、 6 = Hedysarum 10, 5, 2 L、25, 2 L2, 3 = Astragalus 2, 5, 10 L Track 4, 5, 6 = Hedysarum 10, 5, 2 LLH2SO4 1 2 3 4 5 6UV 366 1 2 3 4 5 6 UV 254 1 2 3 4 5 6 Visual light Fluorescence Fluorescence quenchingImage capturingValerian (纈草) white lightImage capturing Valerian(纈草)UV-254nmImage capturingValeria

20、n (纈草) UV 366 400 nm Weak fluorescent zones:use Long Time Integration（七）檢出物的定性薄層分離的斑點檢出后需要定性，鑒別直接在薄層上進行。在薄層上進行定性鑒別，由于影響薄層分離的因素很多，僅僅靠測量Rf值的方法是不可靠的。一般采用對照品或?qū)φ账幉脑谕粭l件下展開后進行對比的方法（也叫隨行對照法）。采用對照品作對照時，要求供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。采用對照藥材作對照時，一般要求供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點至少23個。 從原點到斑點中心的距離R

21、f值= 從原點到溶劑前沿的距離Rf值：0.20.8（八）薄層層析中遇到的異?，F(xiàn)象及解決辦法在薄層層析分析中，我們希望獲得清晰、圓整、Rf值（比移值）穩(wěn)定且適中（0.20.8）的斑點。但是在實際檢驗工作中，往往遇到異?，F(xiàn)象，會妨礙和干擾薄層層析結(jié)果。因此，需要探討其產(chǎn)生的原因與克服的辦法。1. 邊 緣 效 應(yīng) 圖譜情況：在同一塊薄層板上，用同一種展開劑，在同一展開槽內(nèi)展開，薄層板中部的斑點較兩側(cè)斑點的Rf值?。ㄓ绕涫窍奶欤g1 ReRb1產(chǎn)生的原因：因為當(dāng)展開劑在薄層板上運行時，極性較弱的展開劑和揮發(fā)性較強的展開劑在薄層兩邊較易揮發(fā)。因此，它們在薄層兩邊的濃度比在中間的濃度小 ，對于同一組分來說，兩側(cè)的Rf值大于中間的，因此就產(chǎn)生了如圖