實驗一、顯微鏡油鏡的使用及簡單染色課件

1、一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和油鏡的使用技術(shù)及維護的基本知識學(xué)習(xí)微生物涂片、單染色的基本技術(shù)初步認識細菌的形態(tài)特征學(xué)習(xí)簡單的無菌操作技術(shù)實驗一 顯微鏡油鏡的使用及細菌的簡單染色 二、實驗原理1顯微鏡的構(gòu)造 1.光學(xué)部分:目鏡 、 物鏡 、 照明裝置(聚光鏡、 虹彩光圈、 反光鏡等)。它使檢視物放大,生成物象。2.機械部分:鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件.它起著支持 調(diào)節(jié) 固定等作用.圖1-1-2 光學(xué)顯微鏡的成像原理倒立的虛像顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率 1.放大倍數(shù)：物鏡放大倍數(shù)目鏡放大倍數(shù) 2. 顯微鏡的分辨率:是表示顯微鏡辨析兩點之

2、間距離的能力?？捎霉奖硎緸椋?D=/2n sin(/2 ) 式中D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。 ：可見光的波長（平均0.55m) n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。 ：鏡口角（即入射角）。D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰油鏡使用的原理 油鏡，即油浸接物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。根據(jù)公式D=/2n sin(/2 ) ，增大分母，使得D值減小，分辨率增大。二、實驗原理2細菌的單染色細菌細胞

3、微小，透明，不易觀察，需染上顏色。利用單一染料對細菌進行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。 染色前必須固定細菌，其目的是：一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上。二是增加其對染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。固定時盡量維持細胞原有的形態(tài)。 三、實驗材料奧林巴斯雙筒普通光學(xué)顯微鏡。呂氏美藍染色液、石炭酸復(fù)紅染色液、結(jié)晶紫染色液、香柏油、鏡頭清洗液（V乙醚:V酒精7:3）、無菌水。大腸桿菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌的斜面菌種。載玻片、接種環(huán)、酒精燈、香柏油、擦鏡紙、吸水紙。二、顯微操作1.低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào)。依次再進行中倍、高倍觀察2.油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，提升聚光鏡，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。3.換片：另換新片，必須從第三條開始操作。4.用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。注意