大腸桿菌檢測方法之歐陽科創(chuàng)編

1、歐陽科創(chuàng)編歐陽科創(chuàng)編2022.02.05歐陽科創(chuàng)編歐陽科創(chuàng)編2022.02.05大腸菌群及檢驗大腸菌群及檢驗時間：2022.02.05時間：2022.02.05創(chuàng)作：歐陽科一、大腸菌群介紹大腸菌群并非細菌學分類命名，而是衛(wèi)生細菌領域的用 語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性 的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方 面并非完全全都，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37能分 解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認為該菌群 細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和 陰溝腸桿菌等。大腸菌群分布較廣，在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。調(diào)查爭辯說明，大腸菌群細菌多

2、存在于溫血動物糞便、 人類經(jīng)?；顒拥膱鏊约坝屑S便污染的地方，人、畜糞便對 外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要緣由。糞便 中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他 型別較多。大腸菌群是作為糞便污染指標菌提出來的，主要是以該 菌群的檢出狀況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的凹凸，說明白糞便污染的程度，也反映了對人體安康危害性的大小。糞便是人類腸道排泄物，其中有安康人糞便，也有 腸道患者或帶菌者的糞便，所以糞便內(nèi)除一般正常細菌外， 同時也會有一些腸道致病菌存在如沙門氏菌、志賀氏菌等，因而食品中有糞便污染，則可以推想該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，埋伏著食物中毒和流行病

3、的威逼，必需看作對人體安康具有潛在的危急性。大腸菌群是評價食品衛(wèi)生質量的重要指標之一，目前已 被國內(nèi)外廣泛應用于食品衛(wèi)生工作中。二、大腸菌群檢驗方法：由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，即：需氧及兼性厭氧、在37能分解乳糖產(chǎn)酸 產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測一般都 是依據(jù)它的定義進展。目前國內(nèi)承受的進出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標準和原國家商檢局制訂的行業(yè)標準。兩個標準方法在 檢測程序上略有不同。歐陽科創(chuàng)編歐陽科創(chuàng)編2022.02.052022.02.052022.02.05一 分別培育和證明試驗。乳糖發(fā)酵試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀 3

4、61培育 482h，觀看是否產(chǎn)氣。分別培育：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培育物轉種于伊紅美藍瓊脂平 板上，36118-24h，觀看菌落形態(tài)。證明試驗：挑取平板上的可疑菌落，進展革蘭氏染色觀 察。同時接種乳糖發(fā)酵管 361培育 242h，觀看產(chǎn)氣狀況。報告：依據(jù)證明為大腸桿菌陽性的管數(shù)，查 MPN 表，100mlgMPN具體操作參見 GB4789.3-94 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群測定二FDA標準方法，用于對出口食品中的大腸桿菌進展檢測。本方法 承受兩步法：推想試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度 接種三管 LST 肉湯。361培育 482h，觀看是否產(chǎn)氣。歐陽科創(chuàng)編證明試驗：將產(chǎn)氣管培育物接種煌

5、綠乳糖膽鹽BGLB 肉湯管中，361482h，BGLBMPNml(g)樣品中大腸菌群的 MPN值。具體操作參見 SN0169-92 中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法三、說明： 1MPNMPN 為最大可能數(shù)(MostProbableNumber種方法，對樣品進展連續(xù)系列進展稀釋，參加培育基進展培 養(yǎng)，從規(guī)定的反響呈陽性管數(shù)的消滅率，用概率論來推算樣 品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN 檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應相應降低或增加 10 倍。留意國家標準和行業(yè)標準中所附 MPN 表所用稀釋度是不同的，而且結果報告單位也不一樣

6、。初發(fā)酵和證明試驗：無論是國家標準的三步法還是行業(yè)標準的兩步法，都利歐陽科創(chuàng)編用了乳糖發(fā)酵管進展了兩次發(fā)酵試驗，培育基的配制略有不37分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。初發(fā)酵陽性管，不能確定就是大腸菌群細菌，經(jīng)過證明 試驗后，有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)說明，食品中大腸菌群 檢驗步驟的符合率，初發(fā)酵與證明試驗相差較大。因此，在 實際檢測工作中，證明試驗是必需的。產(chǎn)氣量與倒管：在乳糖發(fā)酵試驗工作中，經(jīng)常可以看到在發(fā)酵倒管內(nèi)極 時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。試驗說明，大腸菌群 的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全部布滿氣體，少者可以產(chǎn) 生比小米粒還小的氣泡。假設對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如 有疑問時，可以用手輕輕打動試

7、管，如有氣泡沿管壁上浮， 即應考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應作進一步試驗。選擇菌落：國家標準中，需要對初發(fā)酵陽性培育物接種伊紅美藍平 板分別，對典型和可疑菌落進展觀看和證明試驗。由于大腸 菌群是一群細菌的總稱，在平板大腸菌群菌落的色澤、形態(tài) 等方面較大腸菌更為簡單和多樣，而且與大腸菌群的檢出率歐陽科創(chuàng)編歐陽科創(chuàng)編歐陽科創(chuàng)編2022.02.05歐陽科創(chuàng)編歐陽科創(chuàng)編2022.02.05親熱相關。國家標準方法規(guī)定伊紅美藍平板為分別培育基，在該平板上，大腸菌群菌落呈黑紫色有光澤或無光澤時，檢 出率最高；紅色、粉紅色菌落檢出率較低。另外，挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率有親熱關系，只 挑取一個菌落，由于機率問題，尤其當菌落不典型時，很難 避開假陰性的消滅。所以挑菌落肯定要挑取典型菌落，如無 典型菌落則應多挑幾個，以免消滅假陰性。抑菌劑：大腸菌群檢驗中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸鈉、洗衣粉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等。抑菌劑的主要作用 是抑制其它雜菌，特別是革蘭氏陽性菌的生長。國家標準中乳糖膽鹽發(fā)酵管利用膽鹽作為抑菌劑，行業(yè) 標準中 LST 肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑，BGLB 肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。抑菌劑雖可抑制樣品中的一些雜菌，而有利于大