免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用參考課件

1、免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用劉 靜 2014.11.261免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用劉 靜 1細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在一定條件下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。凝集反應(yīng)定義2細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原反應(yīng)階段：抗原抗體的特異性結(jié)合階段出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象凝集反應(yīng)反應(yīng)特點(diǎn)：IgM的作用比IgG大數(shù)百倍IgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，稱不完全抗體3反應(yīng)階段：凝集反應(yīng)反應(yīng)特點(diǎn)：3可見反應(yīng)形成4可見反應(yīng)形成4電解質(zhì)：稀釋液或緩沖液（8.5g/L NaCl）pH：pH

2、6pH9（ pH3為細(xì)菌抗原的等電點(diǎn)）溫度：1540，37最適（ 4特例 ）反應(yīng)時間：不同反應(yīng)時間不同外力：震蕩或攪拌環(huán)境因素5電解質(zhì)：稀釋液或緩沖液（8.5g/L NaCl）環(huán)境因素5分類：直接與間接凝集反應(yīng)6分類：直接與間接凝集反應(yīng)6 顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。包括：玻片凝集試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn)直接凝集反應(yīng)direct agglutination7 顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見玻片凝集試驗(yàn)：定性已知抗體檢測抗原簡便、快速菌種的診斷或分型ABO血型的鑒定8玻片凝集試驗(yàn)：8試管凝集試驗(yàn)：半定量已知抗原檢測抗體易引起抗原的非特異性

3、凝集肥達(dá)試驗(yàn)9試管凝集試驗(yàn)：90.50.50.50.50.5棄掉0.5 試管凝集試驗(yàn)原理結(jié)果 1 2 3 4 5 6 7菌液100.50.50.50.50.5棄掉0.5 +很小的凝集顆粒混濁-無凝集現(xiàn)象與對照相同+小、部分凝集塊中等混濁+大多凝集管底輕度混濁+大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清試管凝集試驗(yàn)結(jié)果判斷11+很小的凝集顆粒混濁-無凝集現(xiàn)象與對照相同+小、部分凝集塊管底沉淀凝集程度最高稀釋比例待測血清的滴度試管凝集試驗(yàn)結(jié)果判斷12管底沉淀凝集程度最高稀釋比例待測血清的滴度試管凝集試驗(yàn)12 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝

4、集現(xiàn)象間接凝集反應(yīng)indirect agglutination13 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體RBC、白陶土、活性炭、某些細(xì)菌、聚苯乙烯膠乳顆粒良好載體有如下幾點(diǎn)基本要求：在生理鹽水或緩沖液無自凝傾向；大小均勻；比重與介質(zhì)相似，短時間內(nèi)不能沉淀；無化學(xué)或血清學(xué)活性；吸附抗原（或抗體）后，不影響其活性。目前應(yīng)用最廣的是人的O型紅細(xì)胞和綿羊紅細(xì)胞。而后者應(yīng)用更廣，因?yàn)槠鋪碓捶奖?。另外綿羊紅細(xì)胞的表面有大量的（約1 000個以上）糖蛋白受體，極易吸附某些抗原物質(zhì)，吸附性能好。 載體種類14RBC、白陶土、活性炭、某些細(xì)菌、聚苯乙烯膠乳顆粒載體種類1正向間接凝集試驗(yàn)反向間

5、接凝集試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn)間接凝集反應(yīng)15正向間接凝集試驗(yàn)間接凝集反應(yīng)15用抗原致敏載體-檢測抗體正向間接凝集反應(yīng)16用抗原致敏載體-檢測抗體正向間接凝集反應(yīng)16反向間接凝集反應(yīng)用抗體致敏載體-檢測抗原17反向間接凝集反應(yīng)用抗體致敏載體-檢測抗原17間接凝集抑制反應(yīng)用抗原致敏載體-檢測抗原有凝集顆粒為陰性18間接凝集抑制反應(yīng)用抗原致敏載體-檢測抗原有凝集顆粒為陰性1反向間接凝集試驗(yàn)，載體為金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁成分A蛋白，和IgG的Fc段結(jié)合，使Fab段暴露在菌體表面， Fab段仍然保持正常的抗體活性。利用這種特性可以將特異性IgG結(jié)合在菌體上，形成致敏顆粒，檢測特異

6、性抗原。協(xié)同凝集反應(yīng)19反向間接凝集試驗(yàn)，載體為金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集反應(yīng)19 原理圖IgGSPASPA- IgG 待測抗原SPA- IgG-待測抗原凝集顆粒混合 加入20 原理圖IgGSPASPA- IgG 待間接血凝試驗(yàn)?zāi)z乳凝集試驗(yàn)明膠凝集試驗(yàn)按載體分類間接凝集試驗(yàn)21間接血凝試驗(yàn)按載體分類間接凝集試驗(yàn)21以紅細(xì)胞為載體的間接凝集試驗(yàn)。將已知抗原(或抗體）致敏紅細(xì)胞，與相應(yīng)抗體（或抗原）特異結(jié)合，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。間接血凝試驗(yàn)22以紅細(xì)胞為載體的間接凝集試驗(yàn)。間接血凝試驗(yàn)22紅細(xì)胞抗原致敏致敏紅細(xì)胞紅細(xì)胞凝集 間接血凝試驗(yàn)待測抗體間接血凝試驗(yàn)原理23紅細(xì)胞抗原致敏致敏紅細(xì)胞紅細(xì)胞凝集 間

7、-：紅細(xì)胞沉積于孔底+：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集+：紅細(xì)胞形成凝集，面積較小，邊緣較松散+：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略多于+：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊緣皺縮如花邊狀血凝試驗(yàn)強(qiáng)度24-：紅細(xì)胞沉積于孔底血凝試驗(yàn)強(qiáng)度24與一般間接血凝試驗(yàn)不同之處為反應(yīng)中的紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞主要試劑材料為抗紅細(xì)胞單克隆抗體，能與紅細(xì)胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng)這種抗體與另一特異性抗體連接成的雙功能抗體可用于檢測標(biāo)本中的抗原如與特異性抗原連接，則可用于檢測標(biāo)本中的抗體反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血HIV抗體、HBV抗原檢測自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)25與一般間接血凝試驗(yàn)不同之處為反應(yīng)中的紅細(xì)

8、胞是未經(jīng)致敏的受檢者膠乳凝集試驗(yàn)以聚苯乙烯膠乳為載體顆粒的間接凝集反應(yīng)膠乳為人工合成的載體，性能比紅細(xì)胞穩(wěn)定，均一性好但與蛋白質(zhì)結(jié)合能力以及聚集性能不如紅細(xì)胞因此作為間接凝集反應(yīng)，膠乳凝集的敏感度不及血凝試驗(yàn)26膠乳凝集試驗(yàn)以聚苯乙烯膠乳為載體顆粒的間接凝集反應(yīng)26明膠凝集試驗(yàn)以明膠為載體顆粒的間接凝集反應(yīng)用粉紅色明膠顆粒吸附病毒抗原或重組抗原當(dāng)致敏明膠顆粒與樣品血清作用時，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集常用于抗HIV-1抗體和抗精子抗體的檢測梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)27明膠凝集試驗(yàn)以明膠為載體顆粒的間接凝集反應(yīng)27抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)28抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)28抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn)，利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使紅細(xì)胞凝集用于檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體不完全抗體：能與顆粒抗原牢固結(jié)合，但一般不出現(xiàn)可見反應(yīng)，多為7S的IgG診斷免疫性溶血性貧血的主要方法29抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn)，利用抗球蛋白抗體抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)分為兩種方法：直接Coombs試驗(yàn)間接Coombs試驗(yàn)30抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)分為兩種方法：30直接Coombs試驗(yàn)檢測紅細(xì)胞上的不完全抗體31直接Coombs試驗(yàn)檢測紅細(xì)胞上的不完全抗體31新生兒溶血癥自身免疫性溶血