超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件

1、 超敏反應(yīng)：已經(jīng)致敏的機體再次接受相同抗原刺激后，所引起的以生理功能紊亂或組織損傷為主的異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。 超敏反應(yīng)：已經(jīng)致敏的機體再次接受相同抗原刺激后，所引超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件第一節(jié) 激發(fā)試驗第一節(jié) 激發(fā)試驗激發(fā)試驗（provocation test） 是模擬自然發(fā)病條件，用少量超敏原引起一次較輕的超敏反應(yīng)發(fā)作，達到確定超敏原的一種體內(nèi)試驗。激發(fā)試驗（provocation test） 是模擬自然發(fā)病 非特異性激發(fā)：是用組胺等刺激物做霧化吸入， 以觀察患者對

2、型超敏反應(yīng)的敏感性，進而分 析病因或判定療效。 特異性激發(fā)：是用抗原如塵螨等做試驗，對明確 超敏原有一定價值。 用于型和型超敏反應(yīng)性疾病的檢查。 非特異性激發(fā)：是用組胺等刺激物做霧化吸入， 超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件試驗方法本身不完善；藥物性間質(zhì)性肺炎、麻風(fēng)、患者患有皮膚劃痕征；特應(yīng)癥、支氣管肺曲菌病、CIC：分子量600kDa以上，沉降系數(shù)19S；風(fēng)團1015mm伴紅暈檢測游離在血清中的不完全抗體或紅細胞表面的抗原患有其他疾病。超敏反應(yīng)：已經(jīng)致敏的機體再次接受相同抗原刺激后，所引起的以生理功能紊亂或

3、組織損傷為主的異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。低密度脂蛋白使?jié)岫仍黾?，空腹采血；下往往是單一種類IC增高，而此種單一成分增高發(fā)每次觀察不能小于24小時。皮內(nèi)試驗以風(fēng)團為主陰性：機體未感染過結(jié)核分枝桿菌，一、血清總IgE的檢測CIC檢測方法的基本原理及敏感性比較受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜作激發(fā)試驗；挑刺試驗（pricktest） 主要用于型超敏反應(yīng)二、CIC檢測方法評價及應(yīng)用一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)ECP(嗜酸性細胞陽離子蛋白）： CLIA：敏感度更高，特異性高，定量。試驗方法本身不完善；超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件收集原料 粉碎、勻漿

4、 脫脂、提取 過濾、分離 鑒定 分裝、保存清毒試驗部位抗原的制備皮試前臂曲側(cè)、上臂、背部禁忌：皮膚患濕疹、感染、皮炎或外傷正在或近日服用免疫抑制劑或抗組胺藥物收集原料 粉碎、勻漿 脫皮膚試驗的類型與方法皮內(nèi)試驗（intracutaneous test）；挑刺試驗（pricktest） 主要用于型超敏反應(yīng)斑貼試驗（patchtest） 主要是檢測型超敏反應(yīng)皮膚試驗的類型與方法皮內(nèi)試驗（intracutaneous 0.010.03ml/針相同超敏原不同稀釋度速發(fā)型1530min內(nèi)觀察遲發(fā)型 4872h內(nèi)觀察4mm/針方法結(jié)果一、皮膚試驗-皮內(nèi)試驗0.010.03ml/針相同超敏原不同稀釋度速發(fā)型

5、遲發(fā)型 速發(fā)型皮膚試驗的結(jié)果判定標準分級 皮 內(nèi) 試 驗 點 刺 試 驗-無風(fēng)團或小于陰性對照無風(fēng)團反應(yīng)或小于陰性對照+風(fēng)團35mm、紅暈20mm無風(fēng)團,陰性對照紅暈20mm+風(fēng)團69mm伴紅暈無風(fēng)團，紅暈20mm+風(fēng)團1015mm伴紅暈風(fēng)團伴紅暈+風(fēng)團15mm伴紅暈和偽足風(fēng)團伴紅暈和偽足速發(fā)型皮膚試驗的結(jié)果判定標準分級 皮 內(nèi) 試 驗 超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件遲發(fā)型皮試結(jié)果判定標準反應(yīng)程度 結(jié)果判定 -無反應(yīng)或小于陰性對照 +僅有紅腫 +紅腫伴硬結(jié) +紅腫、硬結(jié)、小皰 +大皰或/和潰瘍遲發(fā)型皮試結(jié)果判定標準反應(yīng)程度 結(jié)果判定 -無反應(yīng)或 比皮內(nèi)試驗敏感性稍低，但假陽性較少； 皮試液濃度

6、要比皮內(nèi)試驗高10100倍。將試驗抗原與對照液分別滴于試驗部位的皮膚上用針尖透過液滴輕挑一下以刺破皮膚而不出血為度1min后拭（吸）去試驗抗原液一、皮膚試驗-點刺試驗 比皮內(nèi)試驗敏感性稍低，但假陽性較少；將試驗抗原與對照液分別速發(fā)型皮膚試驗的結(jié)果判定標準分級 皮 內(nèi) 試 驗 點 刺 試 驗-無風(fēng)團或小于陰性對照無風(fēng)團反應(yīng)或小于陰性對照+風(fēng)團35mm、紅暈20mm無風(fēng)團,陰性對照紅暈20mm+風(fēng)團69mm伴紅暈無風(fēng)團，紅暈20mm+風(fēng)團1015mm伴紅暈風(fēng)團伴紅暈+風(fēng)團15mm伴紅暈和偽足風(fēng)團伴紅暈和偽足速發(fā)型皮膚試驗的結(jié)果判定標準分級 皮 內(nèi) 試 驗 皮內(nèi)試驗較點刺試驗有更好的敏感性皮內(nèi)試驗較

7、點刺試驗有更好的敏感性第一次讀：48小時打開斑試器,間隔30min待斑試器 壓痕消失后判定結(jié)果。第二次讀：第3天或第4天。如懷疑光過敏，在斑貼試驗的基礎(chǔ)上給予紫外線照 射，操作過程相似。 一、皮膚試驗-斑貼試驗第一次讀：48小時打開斑試器,間隔30min待斑試器一、皮膚遲發(fā)型皮試結(jié)果判定標準反應(yīng)程度 結(jié)果判定 -無反應(yīng)或小于陰性對照 +僅有紅腫 +紅腫伴硬結(jié) +紅腫、硬結(jié)、小皰 +大皰或/和潰瘍遲發(fā)型皮試結(jié)果判定標準反應(yīng)程度 結(jié)果判定 -無反應(yīng)或假陰性出現(xiàn)的常見原因： 皮試液的濃度過低或失效； 老年患者或過敏性休克或哮喘大發(fā)作之后； 皮試前用過抗組胺藥或免疫抑制劑； 操作不當(dāng)將皮試液注入皮下或

8、注入量過少等。結(jié)果分析及注意事項 假陰性出現(xiàn)的常見原因： 結(jié)果分析及注意事項 結(jié)果分析及注意事項 假陽性出現(xiàn)的常見原因： 皮試液含有非特異性刺激物； 患者患有皮膚劃痕征； 操作手法較重； 注入量較大或濃度過高； 注入少量空氣等。結(jié)果分析及注意事項 假陽性出現(xiàn)的常見原因： 詢問病史陽性對照必備搶救藥品和設(shè)施如何避免假性結(jié)果的出現(xiàn)：適應(yīng)證陰性對照皮試液濃度詢問病史陽性對照必備搶救藥品和設(shè)施如何避免假性結(jié)果的出現(xiàn)：適皮膚試驗的應(yīng)用預(yù)防藥物或疫苗等過敏 防治型超敏反應(yīng)性疾病結(jié)核菌素試驗評估機體細胞免疫功能 預(yù)防皮膚接觸過敏皮膚試驗的應(yīng)用預(yù)防藥物或疫苗等過敏 結(jié)核菌素試驗 是用結(jié)核菌素進行皮膚試驗，通過

9、觀察局部是否出現(xiàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)，判斷機體有無結(jié)核分枝桿菌感染和對該菌的免疫力。 結(jié)核菌素試驗 是用結(jié)核菌素進行皮膚試驗，通過觀察局部是否出陽性：機體已感染過結(jié)核桿菌或BCG接種成功；強陽性：可能有活動性結(jié)核??；陰性：機體未感染過結(jié)核分枝桿菌， 但應(yīng)考慮： 感染初期； 老年人； 重度結(jié)核病患者，機體處于免疫反應(yīng)低下狀態(tài)； 患有其他疾病。 結(jié)核菌素試驗 陽性：機體已感染過結(jié)核桿菌或BCG接種成功； 結(jié)核菌素試驗 手捏式霧化器二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）手捏式霧化器二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial prov霧化抗原顆粒5微米測定肺功能指標：

10、用力肺活量(FVC)1秒用力呼氣容積(FEV1)最大呼氣流速(PEF)比氣道傳導(dǎo)率(sGaw)射流霧化器二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）霧化抗原顆粒5微米測定肺功能指標：射流霧化器二、支氣管激發(fā)超敏原有一定價值。 及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的發(fā)生；缺點是每次僅能用一種抗原，要專門設(shè)備和技術(shù)，并需對病人進行訓(xùn)練并與之配合皮試前用過抗組胺藥或免疫抑制劑；敏感性高(6mg/L HAHG)，實用性強；敏感性高(6mg/L HAHG)，實用性強；一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情況下一

11、般不適宜作激發(fā)試驗；2%PEG沉淀大分子CIC；總IgE：正常成人血清含量為 20200IU/ml4%PEG沉淀較小分子CIC；CIC檢測方法的基本原理及敏感性比較斑貼試驗以紅腫和水皰為主嬰兒血中IgE含量極低；待檢血清中如有抗淋巴細胞的抗體，能和Raji細胞反應(yīng);風(fēng)團1015mm伴紅暈激發(fā)試驗（provocation test） 是模擬自然發(fā)病條件，用少量超敏原引起一次較輕的超敏反應(yīng)發(fā)作，達到確定超敏原的一種體內(nèi)試驗。假陰性 ：試驗抗原濃度過低或因各種原因失效；CIC：分子量600kDa以上，沉降系數(shù)19S；第一次讀：48小時打開斑試器,間隔30min待斑試器試驗方法本身不完善；皮試液濃度要

12、比皮內(nèi)試驗高10100倍。測基礎(chǔ)肺功能 激發(fā)物稀釋液：低濃度/小劑量雙倍濃度/劑量遞增陽性伴明顯氣促、喘息口吸入11分半鐘測定肺功能陽性標準/明顯不適/臨床癥狀直至激發(fā)物達到最高濃度陰性反應(yīng)支氣管舒張劑吸入二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）超敏原有一定價值。測基礎(chǔ)肺功能 激發(fā)物稀釋液：陽性伴明顯氣支氣管反應(yīng)有三種類型：速發(fā)、遲發(fā)和雙重反應(yīng)。每次觀察不能小于24小時。FEV1：重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定；PEF：峰流速儀價格低廉、方便、不受場地限制， 與FEV1有較好的相關(guān)性，適合流行病學(xué)調(diào)查；sGaw：敏感性好，但重復(fù)性稍差。測定指標二、支氣管激發(fā)試驗（

13、bronchial provocative test,BPT）結(jié)果判斷：支氣管反應(yīng)有三種類型：速發(fā)、遲發(fā)和雙重反應(yīng)。測定指標二、支氣 變應(yīng)原的確定常以定性試驗判斷結(jié)果。 陽性：氣道反應(yīng)性增高 FEV1、PEF較基礎(chǔ)下降20或sGaw下降35%， 有時伴有明顯自覺癥狀或肺部聞及哮鳴音。定性判斷二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）結(jié)果判斷： 陰性：氣道反應(yīng)性正常 FEV1、PEF或sGaw上述標準，正常值為陰性。 無論激發(fā)試驗陽性或陰性，均應(yīng)排除氣道反應(yīng)性的影響因素?？梢烧?，間隔23周后復(fù)檢或2個月后再測。 變應(yīng)原的確定常以定性試驗判斷結(jié)果。定性判斷二

14、、支氣管激發(fā)試 受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜作激發(fā)試驗；有過敏性休克，嚴重的血管性水腫及嚴重的喉頭水腫病史者；一周之內(nèi)預(yù)防接種、職業(yè)性過敏因素的接觸等。禁忌證二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）注意事項及禁忌癥： 禁忌證二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provoc受試者在檢查前：48小時：停！抗組胺藥、色甘酸鈉及皮質(zhì)激素類藥;12小時：停！支氣管擴張劑;15分鐘：實驗室休息,病史、體檢排除BPT的禁忌證。注意事項二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative tes

15、t,BPT）注意事項及禁忌癥：受試者在檢查前：注意事項二、支氣管激發(fā)試驗（bronchia皮內(nèi)試驗以紅腫和硬結(jié)為主臨床意義：正常人群血清IgE水平受地域環(huán)境、種防治型超敏反應(yīng)性疾病皮膚?。菏n麻疹、天皰瘡、皮疹性皮炎；嬰兒血中IgE含量極低；缺點是每次僅能用一種抗原，要專門設(shè)備和技術(shù)，并需對病人進行訓(xùn)練并與之配合抗原刺激后2030min內(nèi)觀察結(jié)果。IgG類抗體與其特異性抗原形成的CIC。假陰性出現(xiàn)的常見原因：缺點是每次僅能用一種抗原，要專門設(shè)備和技術(shù)，并需對病人進行訓(xùn)練并與之配合二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）第一次讀：48小時打開斑試器,間隔3

16、0min待斑試器 免疫印跡技術(shù)（IBT）：操作簡單，能一次性測定多種變應(yīng)原的特異性IgE，故臨床已普遍采用IBT法。無風(fēng)團,陰性對照紅暈20mm陰性：機體未感染過結(jié)核分枝桿菌，缺點：費用昂貴、花費時間長、不同試劑盒的參比血清不同不易相互比較。速發(fā)型皮膚試驗的結(jié)果判定標準一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)遲發(fā)型皮試結(jié)果判定標準一、血清總IgE的檢測ELISA間接法檢測特異性IgE有一定的危險性，但較皮膚試驗的特異性高與受試者的病史、癥狀和體征相關(guān)性較強確定支氣管哮喘的過敏原，尤其皮試結(jié)果不肯定時排除皮試時的假陽性反應(yīng)和假陰性反應(yīng)檢測新制劑的抗原性、平喘藥療效及觀察脫敏效果缺點是每次僅能用一種抗原，要

17、專門設(shè)備和技術(shù)，并需對病人進行訓(xùn)練并與之配合二、支氣管激發(fā)試驗（bronchial provocative test,BPT）應(yīng)用與評價：皮內(nèi)試驗以紅腫和硬結(jié)為主有一定的危險性，但較皮膚超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件觀察癥狀癥狀好轉(zhuǎn)或減輕導(dǎo)致基礎(chǔ)飲食吃可疑的過敏食物癥狀加重1周后疑似過敏原，重復(fù)3次確定某食物為過敏原癥狀未減輕1周后排除 食物所致過敏三、食物激發(fā)試驗觀察癥狀癥狀好轉(zhuǎn)導(dǎo)致基礎(chǔ)吃可疑的癥狀加重1周后疑似過敏原，重口腔激發(fā)試驗將超敏原直接與口腔黏膜接觸，當(dāng)口腔黏膜出現(xiàn)腫脹和充血時，可判斷為陽性反應(yīng)。 結(jié)膜激發(fā)試驗將超敏原滴于一眼，陽性反應(yīng)為結(jié)膜充血、水腫

18、、分泌增加、搔癢，甚至眼瞼紅腫。注意假陽性對結(jié)果的干擾。鼻黏膜激發(fā)試驗將抗原吸入/滴入受試者鼻腔，出現(xiàn)鼻黏膜水腫、蒼白、鼻癢、流涕、噴嚏為陽性。 四、其他方法口腔激發(fā)試驗將超敏原直接與口腔黏膜接觸，當(dāng)口腔黏膜出現(xiàn)腫脹和結(jié)果判定及分析 型超敏反應(yīng) 抗原刺激后2030min內(nèi)觀察結(jié)果。 陽性反應(yīng)： 點刺試驗以紅暈為主 皮內(nèi)試驗以風(fēng)團為主結(jié)果判定及分析 型超敏反應(yīng)超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件結(jié)果判定及分析型超敏反應(yīng) 接觸抗原后4872h內(nèi)觀察結(jié)果。 陽性反應(yīng)： 皮內(nèi)試驗以紅腫和硬結(jié)為主 斑貼試驗以紅腫和水皰為主 結(jié)果判定及分析型超敏反應(yīng) 超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件假性結(jié)果 假陰性 ：試驗抗原濃

19、度過低或因各種原因失效；正服用免疫抑制劑或抗組胺藥物；操作誤差 ；皮試季節(jié)選擇不當(dāng) 。假陽性 ：試驗抗原不純，引起交叉反應(yīng)；試驗溶液配制不當(dāng)，產(chǎn)生非特異性刺激；皮膚反應(yīng)性過強；操作不當(dāng)。 假性結(jié)果 假陰性 ：試驗抗原濃度過低或因各種原因失效；正超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件第二節(jié) IgE的檢測第二節(jié) IgE的檢測一、血清總IgE的檢測 ELISA雙抗體夾心法：操作簡便，敏感性很高，是測定血清IgE最常用的方法。 CLIA：敏感度更高，特異性高，定量。一、血清總IgE的檢測 ELISA雙抗體夾心法：操作簡便， 臨床意義：正常人群血清IgE水平受地域環(huán)境、種 族、遺傳

20、、年齡、性別、寄生蟲感染、測定法及取 樣等影響，結(jié)果有一定差異。 參考值0.10.9mg/L某些過敏體質(zhì)者高于正常100010000倍 血清IgE高特應(yīng)癥、支氣管肺曲菌病、藥物性間質(zhì)性肺炎、麻風(fēng)、寄生蟲病及IgE型骨髓瘤等一、血清總IgE的檢測 臨床意義：正常人群血清IgE水平受地域環(huán)境、種參考值0.1總IgE：正常成人血清含量為 20200IU/ml 嬰兒血中IgE含量極低； 寄生蟲感染時可顯著增高。sIgE:ECP(嗜酸性細胞陽離子蛋白）：總IgE：正常成人血清含量為 20200IU/ml放射免疫吸附劑試驗 （radioimmunosorbenttest，IRST）酶聯(lián)免疫測定法(ELIS

21、A) 化學(xué)發(fā)光固相熒光免疫分析一、血清總IgE的檢測放射免疫吸附劑試驗一、血清總IgE的檢測臨床意義 ：1、正常人群IgE水平受環(huán)境、種族、遺傳、年齡、檢測方法及取樣標準等因素的影響2、IgE升高相關(guān)的常見疾病有：過敏性哮喘、季節(jié)性過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、藥物性間質(zhì)性肺炎、支氣管肺曲菌病、麻風(fēng)、類天皰瘡及某些寄生蟲感染等。 一、血清總IgE的檢測臨床意義 ：一、血清總IgE的檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：常用間接法。 免疫印跡技術(shù)（IBT）：操作簡單，能一次性測定多種變應(yīng)原的特異性IgE，故臨床已普遍采用IBT法。二、特異性IgE的檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：常用間接法。二、

22、特異性I（+）YYYYYYYEYEYEYYYYEYEYE洗滌洗滌洗滌結(jié)果ELISA間接法檢測特異性IgE（+）YYYYYYYEYEYEYYYYEYEYE洗滌洗滌洗滌特異性變應(yīng)原加入待檢血清轉(zhuǎn)印至NC膜NC膜待檢血清特異性IgE抗-IgEHRP底物特異性抗原條帶顯色NC膜變應(yīng)原特異性IgE抗-IgEHRPIBT檢測特異性IgE特異性變應(yīng)原加入待檢血清轉(zhuǎn)印至NC膜NC膜待檢血清抗-IgE目前公認的檢測I型超敏反應(yīng)方法之一；具有特異性強、敏感性高；影響因素少、對患者絕對安全等優(yōu)點；過敏性哮喘診斷；尋找變應(yīng)原。 缺點：費用昂貴、花費時間長、不同試劑盒的參比血清不同不易相互比較。 二、特異性IgE的檢測

23、目前公認的檢測I型超敏反應(yīng)方法之一；二、特異性IgE的檢測超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗課件第三節(jié) 免疫復(fù)合物檢測第三節(jié) 免疫復(fù)合物檢測抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物 利用免疫復(fù)合物中抗原特異性來測IC。 優(yōu)點：特異性高； 缺點：需制備專一的針對抗原的抗體，只能檢測特定的一種IC，不常用。（免疫復(fù)合物中的抗原性質(zhì)不太清楚或非常復(fù)雜）抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物抗原非特異性免疫復(fù)合物檢測 不考慮免疫復(fù)合物中抗原的性質(zhì)，只檢測免疫復(fù)合物的總量。 根據(jù)檢測原理不同，檢測技術(shù)分為： 1.物理法PEG法2.補體法C1q結(jié)合試驗3.抗球蛋白法mRF固相抑制試驗4.細胞法 Raji細胞試驗抗原非特異性免疫復(fù)合物檢測 不考

24、慮免疫復(fù)合物中抗原的性質(zhì)，只CIC：分子量600kDa以上，沉降系數(shù)19S；熱聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)：作為參考標準品，繪制標準曲線進行CIC定量或測定A值代表CIC相當(dāng)于HAHG的含量。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)CIC：分子量600kDa以上，沉降系數(shù)19S；一、抗原非一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)CIC的檢測方法：按抗體分子在結(jié)合抗原后發(fā)生的物理學(xué)和生物學(xué)特性的改變而設(shè)計。 PEG比濁法; ELISA法; 細胞法Raji細胞法; 抗球蛋白技術(shù)mRF凝膠擴散試驗。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)CIC的檢測方法：按抗體分子在一、抗

25、原非特異性CIC檢測技術(shù)PEG比濁法：1.基本原理 聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）為不帶電荷、直鏈大分子結(jié)構(gòu)的多糖，有強脫水作用，利用2%4%濃度的PEG可選擇性沉淀大分子CIC。2.技術(shù)要點 生物化學(xué)檢驗。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)PEG比濁法：1.基本原理 3.注意事項： 2%PEG沉淀大分子CIC； 4%PEG沉淀較小分子CIC； 超過5%PEG選擇性沉淀CIC的特性消失； 溫度影響極大，需進行溫差校正； 低密度脂蛋白使?jié)岫仍黾樱崭共裳?高球蛋白血癥和標本反復(fù)凍融濁度增加。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)PEG比濁法：一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)PEG

26、比濁法：一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)ELISA法：1.基本原理 ELISA法測定的CIC，是能夠結(jié)合C1q的 IgG類抗體與其特異性抗原形成的CIC。2.技術(shù)要點 將聚苯乙烯包被上C1q，加入受檢血清， CIC中IgG的Fc段與C1q結(jié)合，再加抗人IgGHRP， 形成C1q-CIC-抗人IgGHRP復(fù)合物，加底物顯色。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)ELISA法：1.基本原理 一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù) 靈敏度高于PEG比濁法，檢測到0.1mg/L，重復(fù)性好等優(yōu)點； C1q制品不易精制, 純品不穩(wěn)定，只能檢出與補體結(jié)合的CIC。ELISA法：一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù) 靈敏度高于PEG

27、比濁法，檢一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)細胞法-Raji細胞法：1.基本原理 Raji細胞是從Burkitt淋巴瘤分離建株似B細胞系，在體外繁殖傳代，細胞表面有高密度的C1q、C3b、C3d等補體受體，而且不易脫落。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)細胞法-Raji細胞法：1.基 2.技術(shù)要點 將一定量待檢血清、HAHG和Raji細胞混合，使補體、CIC或HAHG與Raji細胞形成復(fù)合物，加入抗人IgGFIC，形成Raji細胞補體CIC(或 HAHG)抗人IgG FIC復(fù)合物，檢測熒光強度。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)細胞法-Raji細胞法： 2.技術(shù)要點 將一定量待檢血清、HAHG和Raji細

28、胞混 3.影響因素 培養(yǎng)條件能改變Raji細胞其表面受體的數(shù)量及親和性，影響檢測敏感性; 待檢血清中如有抗淋巴細胞的抗體，能和Raji細胞反應(yīng); SLE血清中的抗DNA也能和Raji細胞反應(yīng)，使測定結(jié)果偏高。 一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)細胞法-Raji細胞法： 3.影響因素一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)細胞法-Raji 4.方法評價 敏感性高(6mg/L HAHG)，實用性強； 缺點需培養(yǎng)Raji細胞和同位素標記抗人IgG，操作繁瑣; Raii細胞培養(yǎng)較困難，不易長期穩(wěn)定保持其特性，培養(yǎng)條件受限。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)細胞法-Raji細胞法： 4.方法評價一、抗原非特異性CIC檢測

29、技術(shù)細胞法-Raji1.方法評價IgG或IgM類自身抗體與IC中IgG的Fc段結(jié)合而不與游離IgG結(jié)合的特性，mRF與CIC親和力較強。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴散試驗：1.方法評價一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mR1.方法評價IgG或IgM類自身抗體與IC中IgG的Fc段結(jié)合而不與游離IgG結(jié)合的特性，mRF與CIC親和力較強。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴散試驗：1.方法評價一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mR2.技術(shù)要點將mRF和待檢血清中的CIC在瓊脂凝膠中擴散，mRFCIC結(jié)合形成沉淀現(xiàn)象，進行CIC定

30、性或定量。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴散試驗：2.技術(shù)要點一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mR3.方法評價敏感度較低100mg/L（HAHG），mRF來源受限，操作費時，難于常規(guī)應(yīng)用。一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴散試驗：3.方法評價一、抗原非特異性CIC檢測技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRCIC檢測方法的基本原理及敏感性比較方法原理 敏感性(mg/L HAHG)PEG比濁法溶解度20超速離心分子大小-分子超濾分子大小-凝膠過濾分子大小30ELISA法結(jié)合C1q0.1C1q液相法結(jié)合C1q10C1q偏離試驗結(jié)合C1q15抗補體實驗固定補體

31、0.1mRF凝膠擴散法結(jié)合RF100mRF固相抑制法結(jié)合RF120抗抗體法結(jié)合Ig23Raji細胞法補體受體6花環(huán)抑制試驗補體受體10CIC檢測方法的基本原理及敏感性比較方法原理 敏自身免疫性疾病病程中連續(xù)動態(tài)觀察或輔助診斷：試驗方法本身不完善；IC形成的復(fù)雜性，如在生理狀態(tài)下IC是由各種抗原 與相應(yīng)抗體所構(gòu)成的，維持動態(tài)平衡。在病理狀態(tài) 下往往是單一種類IC增高，而此種單一成分增高發(fā) 展到足以影響IC總體水平情況下，才能被試驗檢出。二、CIC檢測方法評價及應(yīng)用檢測方法評價：自身免疫性疾病病程中連續(xù)動態(tài)觀察或輔助診斷：二、CIC檢測方腎臟疾?。杭毙阅I小球腎炎、移植腎、IgA腎?。幌到y(tǒng)疾?。?/p>

32、慢活肝炎、原發(fā)性膽淤性肝硬化；皮膚?。菏n麻疹、天皰瘡、皮疹性皮炎；型超敏反應(yīng)性疾病：SLE、RA、硬皮癥、自身 免疫性溶血性貧血等。此外，CIC的檢測對于腫瘤、肝癌、白血病、霍奇金病、神經(jīng)肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥等疾病的診斷。二、CIC檢測方法評價及應(yīng)用臨床應(yīng)用：腎臟疾病：急性腎小球腎炎、移植腎、IgA腎病；二、CIC檢 固定或沉積于病變局部組織中的IC測定常用免疫組化技術(shù)，如熒光免疫組化技術(shù)檢測到組織標本有Ig和補體。受累組織的成分、構(gòu)型和特定的部位可為疾病的嚴重程度和預(yù)后提供依據(jù)。三、沉積于組織中IC 的測定 固定或沉積于病變局部組織中的IC測定常用免疫組化技術(shù)，如第四節(jié) 抗球蛋白試驗（Coo

33、mbs試驗）第四節(jié) 抗球蛋白試驗（Coombs試驗）類型不完全抗體：抗體分子較短小，只能與顆粒抗原一方相結(jié)合，不出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象，但能封閉抗原決定簇，使其不能再與完全抗體結(jié)合。類型不完全抗體：抗體分子較短小，只能與顆粒抗原一方相結(jié)合，不抗人球蛋白試驗（antiglobulin test, AGT）：將人球蛋白注入異種動物，誘導(dǎo)動物產(chǎn)生抗人球蛋白血清（antiglobulin serum，AGS)，AGS加入表面結(jié)合有不完全抗體的紅細胞復(fù)合物中，就能出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象。抗人球蛋白試驗（antiglobulin test, AGT作用：檢測紅細胞表面結(jié)合的不完全抗體。臨床意義：新生兒溶血癥和自身

34、免疫性溶血性貧血的診斷。RBC為Rh+7S的IgG體內(nèi)發(fā)生+抗IgG體外測試抽血一、直接抗球蛋白試驗作用：檢測紅細胞表面結(jié)合的不完全抗體。RBC為Rh+7S的I二、間接抗球蛋白試驗檢測游離在血清中的不完全抗體或紅細胞表面的抗原RBC為Rh+不完全抗體試劑+抗IgG體外測試二、間接抗球蛋白試驗檢測游離在血清中的不完全抗體或紅細胞表面間接Coombs試驗各反應(yīng)物加入量反應(yīng)物受檢管陽性對照陰性對照血清（受檢或已知）2滴5%紅細胞懸液(已知或受檢)1滴不完全抗D血清2滴AB型血清2滴5% Rh陽性紅細胞懸液1滴1滴二、間接抗球蛋白試驗 技術(shù)要點間接Coombs試驗各反應(yīng)物加入量反應(yīng)物受檢管陽性對照陰性

35、對二、間接抗球蛋白試驗 結(jié)果判斷 凝集為陽性，表明受檢血清有不完全抗體或紅細胞上有相應(yīng)抗原； 同時具備陽性對照管凝集陰性對照管不凝集，如有不完全抗體，可將血清以作倍比稀釋進行效價測定。二、間接抗球蛋白試驗 結(jié)果判斷 凝集為陽性，表明受二、間接抗球蛋白試驗注意事項 在37水浴中，抗體吸附相應(yīng)紅細胞上的結(jié)合程度，與致敏的時間、離子強度有關(guān)； 離心速度和時間十分重要，原則應(yīng)以最小的離心力和最短的離心時間使陽性對照管出現(xiàn)反應(yīng)為宜。二、間接抗球蛋白試驗注意事項 在37水浴中，抗體吸附相應(yīng)二、間接抗球蛋白試驗方法評價是一種極為敏感的檢查不完全抗體的方法，也是RhD檢出的確證試驗。操作繁雜，受試驗條件影響較大。二、間接抗球蛋白試驗方法評價是一種極為敏感的檢查不完