動物實驗室生物安全防護

1、關于動物實驗室的生物安全防護第1頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四主要內容實驗動物的護理和使用原則實驗過程的行為規(guī)范實驗動物使用程序和要求動物安全實驗室設施與防護要求第2頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四一、實驗動物的護理和使用原則 實驗動物是經(jīng)過科學育種、繁殖生產，遺傳背景清楚，攜帶的微生物狀況明確，并對其生態(tài)學、生物學、生物化學、形態(tài)結構了解的特殊動物，因此，對其護理和使用也有嚴格的要求。第3頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四實驗動物飼養(yǎng)和使用應遵守國家相關法律和規(guī)定應明確使用實驗動物的理由和目的明確實驗所使用動物的種

2、類和數(shù)量，動物的數(shù)量應滿足統(tǒng)計學的要求。完善操作規(guī)程，避免或減輕因實驗對動物造成的不適和痛苦。包括使用適當?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法；禁止不必要的重復操作嚴格按程序實施實驗后動物的處理，包括麻醉、止痛、實驗后的護理或用麻醉方法處死實驗過程中要求保證實驗動物的良好生活條件，包括飼養(yǎng)環(huán)境、符合需求的飼料及細心的護理等研究人員和實驗動物操作人員應接受實驗動物的基本知識和操作技能等方面的培訓使用過程中要求保證周圍環(huán)境和實驗人員的安全。實驗動物的護理和使用原則第4頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四二、動物實驗過程的行為規(guī)范物理限制手術操作飲食的限制廢棄物和尸體處理第5頁，共51頁，2

3、022年，5月20日，12點32分，星期四1.物理限制 指在實驗過程中包括檢查、收集標本、給藥、治療或實驗操作等，用手或工具限制動物活動的過程。第6頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四限制的工具不能作為常規(guī)的飼養(yǎng)工具。工具的設計應合理，不要僅考慮實驗的便利，主要考慮盡量減少動物的不適，避免傷害。盡量減少限制的時間，以達到實驗目的為基準。在限制過程中，如果發(fā)生損傷或嚴重的行為改變，應暫?；蚪瓜拗疲⒔o予處理或治療。保證實驗人員和周圍人員的安全。物理限制的主要原則和要求第7頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四 有些實驗需要對動物進行手術，即打開或刺穿動

4、物的身體，對動物的身體或生理機能產生較大的損害，同時，實驗人員也容易被血液/體液污染或被器械、針頭刺傷，存在潛在生物污染的威脅，因此必須做到操作一定要使用適當?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法。禁止不必要的重復操作。不提倡利用一個動物進行多個手術實驗，但是，為充分利用動物資源，經(jīng)動物倫理委員會許可，在可能的條件下可以實施。嚴格實驗操作規(guī)程，防止發(fā)生血液/體液外濺和針刺傷，避免生物污染。手術后的動物、標本以及所用器具材料等必須按規(guī)定程序妥善處置。2.手術操作第8頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四 實驗用動物原則上要求隨時飲食，如果一些實驗需要動物限制食物或水的攝入量，應保證動物存活所

5、需要的最低需求量3.飲食的限制第9頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四1. 血液和體液標本的處理 用于抗體、抗原、病原微生物、生化指標等檢查的血液和體液，按照要求進行處理并檢測，檢測后的標本經(jīng)121，30min高壓消毒處理。2. 動物臟器組織的處理 動物器官組織，尤其是用于病原微生物分離的組織按照標準程序進行處理；用于病理切片的組織，均需要經(jīng)過甲醛固定后再進行切片。剩余的組織經(jīng)121，30min高壓消毒處理。4.廢棄物和尸體處理第10頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四3動物尸體的處理 安樂處死后的動物尸體，取材完畢后，經(jīng)121 30min高壓滅菌處

6、理后，集中送環(huán)保部門處理。動物生物安全三級（ABSL-3）實驗室及以上級的實驗室的感染動物尸體需經(jīng)室內和雙扉兩道高壓滅菌，才能移出實驗室。4. 動物咽拭子的處理 用于病原分離和PCR檢測的咽拭子，按照各自的要求處理后，進行病毒分離和PCR檢測，剩余的標本經(jīng)121，30min高壓消毒處理。5. 病原分離培養(yǎng)物的處理 病原分離的培養(yǎng)物，不論是陽性還是陰性結果，均需經(jīng)121，30min高壓消毒處理。 第11頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四三、實驗動物使用程序和要求第12頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四1.實驗動物的基本使用程序和要求實驗室如需要使用

7、實驗動物，應首先向生物安全和倫理委員會提出申請，填寫申請表使用實驗室得到認可后，根據(jù)申請表中申請的動物種屬和數(shù)量，安排實驗動物的飼養(yǎng)和使用。實驗動物必須在指定的區(qū)域內飼養(yǎng)和使用，禁止在實驗室飼養(yǎng)動物。實驗操作結束時，動物須返回指定的飼養(yǎng)區(qū)域內，不能在實驗室內過夜。動物實驗應在實驗室內指定的區(qū)域進行。 第13頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四 實驗動物使用申請表 批 準 號：_批準日期：_有效日期：_一、申請者基本情況科室課題負責人電話傳真E-mail課題名稱申請目的初次申請， 延長 或 修改原申請（原申請批準號_）二、所需實驗動物種類年齡體重/大/小性別來源飼養(yǎng)場所實驗

8、場所數(shù)量_ + _ + _ = _ （第一年） （第一年） （第一年） （總計）三、動物的運送（是否需要運送，如果需要，說明運送的路線和使用工具等）第14頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四四、研究的目的（簡單描述研究的目的，和該研究對人類，或動物，或科學研究的貢獻）五、使用實驗動物的原理（解釋使用動物的原理；闡述選擇動物屬種和數(shù)量的依據(jù)）六、描述動物實驗的設計和操作程序（具體包括：注射或接種的物質、劑量、部位、體積和針次等；血標本的收集體積、部位、方法、時間；非手術的操作步驟（手術操作見第七項）；限制動物的方法；放射性同位素的使用劑量和時間；識別動物的方法，如耳朵標簽、

9、飼養(yǎng)籠的卡片等；對動物的損害，如疼痛、腹水等；實驗終結標準，如腫瘤的大小、體重降級的百分比、行為學的改變、中毒癥狀等，及何時執(zhí)行安樂死。）七、手術操作程序（如需要，請?zhí)顚懕灸夸洠┚唧w操作步驟手術操作人及培訓情況手術執(zhí)行的地點實驗后的護理第15頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四是否在同一動物上進行多個手術 否 是，具體說明：八、導致疼痛的分類 實驗動物的數(shù)量 第一年 第二年 第三年 A 輕微，或一過性，或無疼痛 _ _ _ B 有疼痛，但能夠解除 _ _ _ C 不能緩解的疼痛 _ _ _九、麻醉，鎮(zhèn)痛（對第八項目中的B或C類動物，應說明使用麻醉或鎮(zhèn)痛的方法，包括麻醉劑的

10、名稱、劑量、使用方式和時間）十、實驗終結后，如何終止動物的生命（麻醉劑的名稱、劑量和使用方法）和如何處理動物尸體第16頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四涉及感染性材料的操作要在生物安全柜中進行，并防止泄露在安全柜底面。操作包括感染動物的解剖、組織的取材、采血及動物的病原接種。動物籠具在清洗前先做消毒處理。污物、一次性物品需放入醫(yī)療廢物專用垃圾袋中，經(jīng)高壓滅菌后方可拿出實驗室。動物尸體用雙層醫(yī)療廢物專用垃圾袋包裹后，放入標有動物尸體專用的容器中，用消毒液噴霧容器表面后，運至解剖區(qū)域剖檢。生物安全柜使用后應用消毒液擦拭、揩干。2.含有感染性材料的動物實驗要求第17頁，共51

11、頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四廢液需按比例倒入有消毒液的桶中，倒入時需沿容器壁輕倒并戴眼罩，防止濺入眼中。如果有感染性物質濺到生物安全柜上、地上以及其他地方，應按“菌，毒外溢在臺面、地面和其他表面”處理。每天工作結束時，應用消毒液擦拭門把手和地面等表面區(qū)域。廢物放入高壓滅菌器內時需同時粘貼指示條，物品移出前觀察指示條是否達到滅菌要求。顏色不符時需重復高壓滅菌。高壓滅菌器需每月做滅菌測試一次，并作記錄。 第18頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四3.小動物的飼養(yǎng) 小動物主要指小鼠、大鼠、豚鼠等嚙齒類動物，其飼養(yǎng)應遵循下列原則：使用動物必須按國家標準或實驗特

12、殊要求檢驗合格，充分準備后進入系統(tǒng)，飼養(yǎng)人員應按實驗設施規(guī)定程序要求進入系統(tǒng)。及時觀察動物飲食、精神狀況，有無異常表現(xiàn)，患病或死亡。動物應可自由進食、飲水。定期檢查水、料是否充足并及時補給。同時保證其他飼養(yǎng)條件完備。第19頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四4.大動物飼養(yǎng) 大動物主要指狗、豬及非人類靈長類動物等使用動物必須按國家標準或實驗特殊要求，檢驗合格，充分準備后方可進入動物實驗室。應將每只動物日攝取總量分批次喂給，以保證動物的進食量和減少浪費。應經(jīng)常檢查飲水裝置，及時補充不足。動物飼養(yǎng)區(qū)域應每天打掃，保持清潔，每周將地面消毒三次。喂給瓜果、蔬菜等須洗凈消毒。禁止喂給

13、腐爛發(fā)霉不潔的食物，飲水要清潔。對飼喂動物所用的小推車、食物、水容器等用品每周進行兩次消毒。室內光照，要求明暗各12h自動交替。 第20頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四5.動物的檢疫 實驗動物進入檢疫室 在檢疫室的緩沖間內，用75%酒精噴灑動物的外包裝進行消毒，打開紫外燈照射1015min。將經(jīng)上述處理的動物移入檢疫室，根據(jù)要求進行檢疫。各動物的檢疫期不同，大動物為2周，小動物為1周。在檢疫期內觀察動物的精神狀態(tài)、食欲、營養(yǎng)狀況、排泄物等，如有任何異常，動物不得用于實驗，應退出動物檢疫室。檢疫合格的動物經(jīng)適當處理后由緩沖間或物流通道進入動物實驗室。 第21頁，共51頁

14、，2022年，5月20日，12點32分，星期四6.動物實驗的有關操作 1. 給藥 根據(jù)實驗要求，按不同的動物，不同途徑給藥。灌胃和靜脈注射。對接種了高致病性病原微生物的動物，尤其是大動物，將動物麻醉后方可進行灌胃或靜脈注射。小動物灌胃或靜脈注射可根據(jù)情況選擇是否麻醉，靜脈注射時需使用固定器。 2. 采樣 原則上活檢時應對動物進行麻醉。對接種了病原體的大動物進行采血或體檢時，要求將動物麻醉。對小動物進行灌胃、注射和采血時，可不麻醉動物，但要防止動物咬抓。第22頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四四、動物生物安全實驗室設施與防護要求第23頁，共51頁，2022年，5月20日，

15、12點32分，星期四病原微生物的傳播途徑病原微生物標本使用的容量和濃度病原微生物接種途徑和方法病原微生物能否和以何種途徑被排出體外病原微生物的總體危險程度 對于使用的動物，需要考慮的因素包括動物的自然特性，包括動物的攻擊性和抓咬傾向性自然存在的體內外微生物和寄生蟲等易感的動物性疾病動物接種病原微生物后可能產生的結果等動物實驗室所使用微生物的危害評估應考慮的因素第24頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四實驗動物設施 實驗動物設施依其使用功能的不同，劃分為各個功能區(qū)域，各自有不同的要求。按照“實驗動物環(huán)境與設施”國家標準2001規(guī)定，實驗動物環(huán)境設施分為三等，控制程度從低到高

16、，依次為開放環(huán)境、隔離環(huán)境和屏障環(huán)境。 第25頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四與普通動物設施的區(qū)別動物房的建筑要求是避免外界微生物感染飼養(yǎng)的清潔級或SPF級動物，所以空氣是外排的，而動物是清潔的。此時，進入實驗室的工作人員反而可能作為傳染源感染動物。生物安全實驗室的建筑理念則與之相反，在BSL-3實驗室內的動物是不安全因素，要避免動物及其排泄物污染外界環(huán)境，所以BSL-3實驗室內是負壓，空氣是向內流的。第26頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四一級動物生物安全防護實驗室 ABSL1第27頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四1

17、.標準微生物學規(guī)范實驗人員從事在實驗工作，需由實驗室負責人批準，并決定限制或禁止其他人員進入實驗室工作面每天消毒一次，及時對濺落活微生物的材料進行消毒。采用機械吸液裝置，禁止用嘴吸液。在實驗區(qū)內禁止飲食、吸煙、處理隱性眼鏡及化妝，食物應存放在專用的儲藏柜或冰箱內，保存食物的柜子或冰箱應放置在實驗區(qū)以外。實驗人員在操作活微生物材料及動物，離開實驗室之前均應洗手。所有污染的液體或固體廢棄物在處理前應去除污染。感染動物尸體需用防漏、有蓋容器運出并焚化。所有操作均應按規(guī)程仔細小心進行，使氣溶膠的產生減至最低限度。實驗室應有防昆蟲及鼠類的措施。 第28頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，

18、星期四2.特殊規(guī)范需告知進入實驗室人員潛在危害，符合特定要求人員方能由負責人批準進入。實驗室要制定生物安全手冊，供需要進入的工作人員閱讀并按程序執(zhí)行。建議穿長工作服，以防止污染或濺污便服。動物房工作服不能穿到其它實驗區(qū)域。需運至實驗室外進行消毒處理的污染材料，應裝入堅固、不漏的容器、密封室。制定安全使用銳利器具的方案。 第29頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四3.防護設備（初級屏障） ABSL1一般不要求使用專用防護設備。接觸非人類靈長動物的人員應進行黏膜暴露危險評估，并且應用合適的眼部和頭面部防護設備。 第30頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四

19、4.實驗室的設施要求(二級屏障）動物設施應與大樓內的公共區(qū)分開。動物飼養(yǎng)區(qū)的門需能自動關閉，向內開啟，平時保持關閉狀態(tài)。實驗室設計與建筑應便于清潔。實驗臺表面不透水，耐酸、堿、有機溶劑、并耐熱。實驗室設備堅固。實驗臺、柜及設備之間的空間應有適當距離便于清潔。實驗室區(qū)及動物飼養(yǎng)區(qū)應設洗手池。如實驗室有可開關的窗子應裝上紗窗。實驗室空氣直接外排，不得再循環(huán)或回流至其它動物飼養(yǎng)區(qū)。動物用籠架具可用手洗及機洗。機洗最后沖洗溫度最少應為90。第31頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四二級動物生物安全防護實驗室 ABSL2 該級與動物實驗一級生物安全水平相似，適用于那些對人及環(huán)境有中

20、度潛在危險的微生物和動物實驗工作。其不同點在于 (1) 人員經(jīng)過操作病原性物質專門訓練，并由能勝任的科學人員監(jiān)督管理 (2) 正在工作時限制外人進入實驗室 (3) 某些產生傳染性氣溶膠的工作在生物安全柜或其他物理封閉設備內進行 第32頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四應有適當?shù)尼t(yī)療監(jiān)測方案。實驗室人員須針對所應用的病原體或潛在的病原體接受適當?shù)拿庖呋驒z測（如乙肝疫苗或TB皮試），并且應建立適當?shù)难灞O(jiān)測系統(tǒng)。制定安全使用銳利器具的方案。 （1）動物實驗室內限制使用針頭和注射器或其他銳利器械，只在沒有其他選擇時才應用，如胃腸外注射、血液收集、從實驗動物或帶隔膜的瓶子中吸取

21、液體等。 （2）可重新接入針頭的注射器、無針系統(tǒng)以及其他安全裝置在適當?shù)臅r候可應用。 （3）盡量用塑料制品代替玻璃制品。其他標準微生物學規(guī)范同ABSL-1。 1.標準微生物學規(guī)范第33頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四2.特殊規(guī)范實驗室負責人應確定進入實驗室人員的資質。在一般情況下，應禁止高度易感人群，如孕婦或免疫受損人員進入。操作傳染性物質的實驗室，要有進入實驗室的特殊規(guī)定(如進行預防接種)。在進入動物實驗室實驗區(qū)的門上標明“生物危險”的警告標志，包括通用的生物危險性標志，標明傳染性物質種類、實驗室負責人或其他人姓名、電話、以及進入實驗室的特殊要求。工作人員需進行意外

22、事故發(fā)生后的緊急處理方法的培訓，并保存培訓記錄。由于泄漏或事故導致傳染性材料明顯暴露時，應立即向實驗室負責人報告。應按規(guī)定進行醫(yī)學評估、檢查及處理，并保存書面記錄。第34頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四要特別注意防止經(jīng)皮膚感染，尤其是要避免被動物抓、咬傷。廢物在處理前應去除污染?；\具需經(jīng)高壓滅菌或去污后方可洗滌。與實驗無關的動物不允許放在實驗室內。根據(jù)傳染因子的情況，開展工作前采集并保存所有實驗人員及有被感染危險的其他人員的本底血清樣品。采集第二份血清樣品的間隔時間可隨所用傳染因子及實驗室情況的不同而異。制定生物安全手冊，對工作人員說明特殊的危險性，并要求他們嚴格遵守

23、。2.特殊規(guī)范第35頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四3.防護設備(初級屏障） 下列操作要用生物安全柜或其他個人防護用品，或物理阻隔裝置。產生氣溶膠可能性大的操作，包括離心、研磨、勻漿、強烈振蕩或混合、超聲波破碎、開啟內壓與環(huán)境壓力不同的傳染材料容器、動物接種、由動物或雞胚收獲感染組織。使用高濃度或大容量傳染性物質時，如采用密封轉頭或離心機安全罩可在實驗室內離心上述材料。進入非人靈長類動物實驗室的人員需配戴保護頭面部、眼鏡的裝備。在實驗室內應穿專用的工作服、帽子、鞋、口罩，離開實驗室到非實驗室區(qū)時，應脫下工作服。第36頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，

24、星期四4.實驗室設施(二級屏障）除滿足ABSL-1的設施要求外，還應有高壓蒸汽滅菌器，供傳染性實驗室廢棄物去污染用。第37頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四三級動物生物安全防護實驗室 ABSL3 第38頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四ABSL-3的標準微生物學規(guī)范同ABSL-2。1.標準微生物學規(guī)范第39頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四2.特殊規(guī)范 當實驗室或封閉單元內有傳染性材料或感染動物時，在進入實驗室或動物室的門上應標明“生物危險”警告標志，包括通用的生物危險性標志，標明傳染因子名稱，實驗室負責人或其他負責人姓名

25、，電話號碼，以及進入實驗室的一些特殊要求，如必須免疫，戴防毒面具或采取其他個人防護措施。所有涉及傳染性材料的活動都應在封閉單元中的生物安全柜或其他物理封閉設備內進行。不得在敞開的實驗臺上進行敞口容器操作。在傳染性材料工作結束時，生物安全柜及其他封閉設備的工作面應去除污染。真空管線用高效空氣過濾器及液體消毒劑消毒裝置保護。第40頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四3.防護設備(初級屏障) 在實驗室內穿上保護便服用的實驗服 (如后開口服、全身覆蓋服、兩件套服、連衣褲)。 在有傳染性動物的室內應戴模壓面罩或防毒面具。動物實驗需加戴防撕咬手套，無菌方式摘除后與動物房廢棄物一同處理

26、。專用靴子等防護性鞋罩，脫除之前要消毒。動物飼養(yǎng)籠可戴濾過帽或在負壓式IVC或隔離器飼養(yǎng)。 第41頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四4.實驗室設施（二級屏障）動物實驗室須在整體建筑自成一區(qū)?？赏ㄟ^隔離門與公共走廊相連。動物實驗室通道的門需互鎖，向內開啟。墻、地面、天棚的內表面應耐水，以便于清潔這些表面的貫通處應已密封或能密封，以便于該區(qū)域去除污染。每個實驗室設置洗手池洗手池要有支架、肘推開關或自動開關；并沒在實驗室出口處。實驗室內窗戶關閉，并密封。實驗室的進出門、或封閉組件能自動關閉。第42頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四動物實驗室通風設備啟動

27、時，按先開排風機后開送風機順序進行，關閉時先關送風機后關排風機。由生物安全柜排出的氣體經(jīng)HEPA濾器過濾后可直接排放，或通過建筑物中的排氣系統(tǒng)排放；生物安全柜應每12個月檢查驗證一次，其排出的空氣可以在實驗室內再循環(huán)。如由生物安全柜排出的經(jīng)HEPA濾器過濾的空氣要通過建筑物的排氣系統(tǒng)排放，其連接方法如套管部件連接應能避免干擾生物安全柜或建筑物排氣系統(tǒng)的空氣平衡。應有通訊設備和閉路電視監(jiān)控系統(tǒng)。4.實驗室設施（二級屏障）第43頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四四級動物生物安全實驗室 ABSL-4第44頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四禁止單獨工作，必須遵守雙人工作制度。ABSL-4的標準微生物學規(guī)范同ABSL-3。1.標準微生物學規(guī)范第45頁，共51頁，2022年，5月20日，12點32分，星期四采取更多的措施控制人員進入如24小時警衛(wèi)和出入安全檢查系統(tǒng)。實驗人員應通過更衣室和淋浴間進入或離開設施，每次離開前均應淋浴。除