微生物學(xué)課件

1、第13章 藥品微生物學(xué)檢查規(guī)定滅菌藥品：注射劑、輸液劑、用于體腔、潰瘍、嚴(yán)重?zé)齻?、出血、眼科用藥?（需經(jīng)無(wú)菌檢查） 非規(guī)定滅菌藥品：常用口服、一般外用制劑 （ 需經(jīng)微生物限度檢查）1第一節(jié)、無(wú)菌檢查一、概念：p173應(yīng)用范圍：各種注射劑 眼外傷用制劑 植入劑 可吸收的止血?jiǎng)?外科用的敷料及器械 2 二、無(wú)菌檢查常用方法 1.直接接種法：供試品溶液接種培養(yǎng)基中，培養(yǎng)數(shù)日后觀察培養(yǎng)基是否出現(xiàn)渾濁或沉淀，與陽(yáng)性、陰性對(duì)照品比較或直接用顯微鏡觀察 需氧菌檢查： 普通培養(yǎng)基 （金黃色葡萄球菌） 厭氧菌檢查 ： 硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基 （生孢梭狀芽胞桿菌） 真菌檢查 ： 真菌培養(yǎng)基 （白色假絲酵母菌） 需氧菌

2、、厭氧菌30-35C培養(yǎng)5天、真菌20-25C培養(yǎng)7天2.薄膜濾過(guò)法3無(wú)菌檢查注意事項(xiàng)1.嚴(yán)格無(wú)菌操作2.作好陽(yáng)性菌對(duì)照，如陽(yáng)性菌對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，供試品的檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)效4 一般注射藥物的無(wú)菌檢查取規(guī)定藥品的量，分別接種在一定量的培養(yǎng)基中,同時(shí)做培養(yǎng)基的陽(yáng)性、陰性對(duì)照試驗(yàn)5二、常用微生物限度檢查法染菌量檢查：細(xì)菌總數(shù)測(cè)定 霉菌總數(shù)測(cè)定 酵母菌總數(shù)測(cè)定控制菌檢查：大腸埃稀菌沙門菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌破傷風(fēng)桿菌7 控制菌檢查口服藥物檢測(cè)：大腸桿菌、沙門菌、活螨外用藥檢測(cè)：金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、活螨眼科制劑：金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌8 2.霉菌總數(shù) 每克或每毫升待檢藥品中所含活霉酵母菌總數(shù)菌或酵

3、母菌總數(shù)的檢查 采用瓊脂傾注平皿計(jì)數(shù)法（琥紅培養(yǎng)基） 選取菌落均值在550個(gè)之間的平板作為霉菌總數(shù)的 測(cè)定范圍10（二）控制菌的檢查： 1.大腸埃稀菌：檢查要點(diǎn)： 稀釋藥液 伊紅美蘭（EMB）平板 - 紫黑色有金屬光澤菌落 挑取可疑菌落 革蘭染色鏡檢 平板純培養(yǎng) 生化反應(yīng) 乳糖發(fā)酵 IMViC + + + - -11EMB平板上的E.coli12 2.沙門菌檢查要點(diǎn)： 稀釋藥液 SS鑒別培養(yǎng)基 挑取可疑菌落 G染色鏡檢 生化反應(yīng) 血清學(xué)鑒定 葡萄糖+、乳糖- 等 玻片凝集試驗(yàn) 動(dòng)力（ + ） 14 稀釋藥液 十六烷三甲基溴化銨平板 挑 取 可 疑 菌 落 革蘭染色鏡檢 普通瓊脂純培養(yǎng) 氧化酶試

4、驗(yàn) 綠膿菌素試驗(yàn) 明膠試驗(yàn)3.銅綠假單胞菌檢查要點(diǎn)：G小桿菌155.破傷風(fēng)桿菌檢查要點(diǎn)： 待檢藥品 (外用藥) 葡萄糖庖肉培養(yǎng)基 80 水浴1530min 表面加無(wú)菌凡士林或石蠟 37 培養(yǎng) 34d 革蘭染色鏡檢 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 小白鼠毒力實(shí)驗(yàn) 小白鼠保護(hù)力實(shí)驗(yàn)17第十四章 抗微生物藥物作用的檢定方法181. 抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成 2.抑制核酸復(fù)制和轉(zhuǎn)錄 3. 抑制蛋白質(zhì)的合成 4.影響細(xì)胞膜的功能5.抗代謝作用第一節(jié) 抗菌藥物的作用機(jī)制19抗菌藥物的作用機(jī)制 20 第二節(jié) 抗微生物藥物作用的檢定法一、抗微生物制劑的篩選體外試驗(yàn)：主要用于抗菌藥物的篩選、測(cè)定抗菌譜和抗菌效果及臨床藥敏試驗(yàn)。還可了解篩

5、選的藥物是抑菌藥物、還是殺菌藥物。主要方法有瓊脂擴(kuò)散法和稀釋法。此外還有特殊抗菌試驗(yàn)（聯(lián)合藥敏試驗(yàn)） 21第二節(jié)、抗微生物藥物作用的檢定法二、體外法：（一）、體外抑菌試驗(yàn)最小抑菌濃度（ MIC）： 抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度 。將未長(zhǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿，如培養(yǎng)后重新長(zhǎng)出試驗(yàn)菌，說(shuō)明該藥僅有抑菌作用。如無(wú)菌生長(zhǎng)，則該藥有殺菌作用。依次可找出最小殺菌濃度。 最小殺菌濃度（ MBC ）： 無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng) 的最高藥物稀釋度為最小殺菌濃度221.連續(xù)稀釋法：可定量測(cè)定藥物抑制微生物生長(zhǎng)的能力 找出最小抑菌濃度 能抑制試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為該 藥的最小抑菌濃度（ MIC） 用培養(yǎng)基將藥

6、物按兩倍稀釋成系列濃度 24 藥物的抗菌試驗(yàn)連續(xù)稀釋法-管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8-培養(yǎng)液 1ml 1 1 1 1 1 1 1待檢藥液 1ml - - - - - - -混合液 取出1ml- 1- 1- 1- 1- 1- 1-棄去稀釋度 1：2： 1：4 1：8 1：16 1：32 1：64 1：128稀釋菌液 0.1ml 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1-結(jié)果-25（二） 體外殺菌試驗(yàn)殺菌試驗(yàn)用于評(píng)價(jià)藥物對(duì)微生物的致死活性1.最低殺菌濃度的測(cè)定最低殺菌濃度（ MBC ）： 藥物能殺死細(xì)菌的最低濃度將未長(zhǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿，如培養(yǎng)后重新長(zhǎng)出試驗(yàn)菌

7、，說(shuō)明該藥僅有抑菌作用。如無(wú)菌生長(zhǎng)，則該藥有殺菌作用。依次可找出最小殺菌濃度。（三） 體外聯(lián)合抗菌試驗(yàn) 紙條試驗(yàn) 協(xié)同, 相加, 無(wú) 關(guān), 拮抗27 （四）體外抗病毒試驗(yàn) 1、吸附依賴宿主細(xì)胞膜上的病毒受體 2、穿入直接穿入、細(xì)胞膜內(nèi)陷等 3、脫殼溶酶體作用、結(jié)構(gòu)變化4、生物合成核酸的復(fù)制、蛋白質(zhì)合成5、裝配釋放核內(nèi)裝配、核外裝配體外抗病毒試驗(yàn)方法：1.病毒學(xué)方法28病毒的增殖過(guò)程29, CPE）1）病毒學(xué)方法： 病毒感染細(xì)胞后，可引起細(xì)胞病變效應(yīng) （ cytopathic effect CPE） 病毒在體外細(xì)胞培養(yǎng)中增殖所引起的典型的組織病理 學(xué)改變（細(xì)胞變圓、聚集、融合、脫落、形成空斑等 ）呼吸道合胞病毒感染 后形成多核巨細(xì)胞單純皰疹病毒感染 后細(xì)胞變圓等正常成纖維細(xì)胞30一般注射藥物的無(wú)菌檢查取規(guī)定藥品的量，分別接種在一定量的培養(yǎng)基中同時(shí)做培養(yǎng)基的陽(yáng)性、陰性對(duì)照試驗(yàn)需氧菌檢查： 2支普通培養(yǎng)基各