診斷臨床病原體檢查課件

1、感染性疾病實(shí)驗(yàn)診斷程序正確、規(guī)范采集和運(yùn)送標(biāo)本通過直接顯微鏡查見病原體，或檢出病原體抗原成分，或通過分子生物學(xué)方法檢測(cè)到病原體核酸，結(jié)合病人病史、癥狀、體征，可作出初步診斷同時(shí)，進(jìn)一步對(duì)病原體進(jìn)行分離和鑒定，確定感染病原體的類型對(duì)細(xì)菌和真菌感染要進(jìn)行抗生素敏感試驗(yàn)診斷臨床病原體檢查1感染性疾病實(shí)驗(yàn)診斷程序正確、規(guī)范采集和運(yùn)送標(biāo)本診斷臨床病原體標(biāo)本的采集、運(yùn)送和檢查方法一標(biāo)本的采集和運(yùn)送所有采集標(biāo)本均置于無菌或清潔容器中，不能接觸消毒劑和抗菌藥物。血液：一般在發(fā)熱初期和高峰期采集，如已用抗生素，則在下次用藥之前采集。成人采血量為每次10-20毫升，兒童和嬰兒為1.5-5毫升。專用血培養(yǎng)瓶。血標(biāo)本

2、采集次數(shù) 根據(jù)研究，僅采血一次分離率約占80%，培養(yǎng)2次分離率約占90%，而培養(yǎng)三次的分離率約占99%。診斷臨床病原體檢查2標(biāo)本的采集、運(yùn)送和檢查方法一標(biāo)本的采集和運(yùn)送診斷臨床病原體多瓶接種 厭氧菌菌血癥占菌血癥5-15%, 有10%菌血癥不是單一微生物引起, 長(zhǎng)期使用抗生素患者可呈現(xiàn)L型菌. 免疫低下患者易發(fā)生真菌感染；根據(jù)情況做二種血培養(yǎng)瓶的培養(yǎng),需氧和厭氧或需氧和L型培養(yǎng)。標(biāo)本采集操作 應(yīng)注意嚴(yán)格無菌操作，避免污染雜菌。標(biāo)本送檢 接種血液樣本的培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送檢，如因某種原因不能立即送檢時(shí)，勿放冰箱存放。診斷臨床病原體檢查3多瓶接種 厭氧菌菌血癥占菌血癥5-15%, 有10%菌尿液 常用清

3、潔中段尿。對(duì)于厭氧菌采用膀胱穿刺法收集、無菌厭氧小瓶運(yùn)送。糞便 取膿、血、粘液送檢，排便困難及嬰幼兒可用直腸拭子采集，根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x用不同的運(yùn)送培養(yǎng)基及分離培養(yǎng)基提高檢出率。呼吸道標(biāo)本 鼻咽拭子、痰、纖支鏡采集物，經(jīng)氣管采集分泌物可避免正常菌群污染，是確定下呼吸道感染的理想標(biāo)本。診斷臨床病原體檢查4尿液 常用清潔中段尿。對(duì)于厭氧菌采用膀胱穿刺法收集、無菌腦脊液及其它體液 對(duì)于腦脊液常見病原菌如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，抵抗力弱，采集后應(yīng)立即接種。對(duì)于胸、腹水和心包積液由于含菌量少宜接種量大或按血培養(yǎng)處理。眼、耳標(biāo)本 用無菌拭子采樣，可用角膜刮屑。泌尿生殖道標(biāo)本 可用尿道口分泌物、

4、外陰糜爛面分泌物、宮頸口分泌物和前列腺液等。創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本 首先清創(chuàng)，用無菌拭子取材。診斷臨床病原體檢查5腦脊液及其它體液 對(duì)于腦脊液常見病原菌如腦膜炎奈瑟菌、肺炎二.檢查方法.顯微鏡檢查懸滴法用于病原體的動(dòng)力觀察，暗視野或相差顯微鏡用于病原體的生長(zhǎng)、形態(tài)、運(yùn)動(dòng)方式。染色檢查：革蘭氏染色用于細(xì)菌和真菌的檢查；抗酸染色用于結(jié)核菌及放線菌的檢查；墨汁染色用于新型隱球菌的檢查。診斷臨床病原體檢查6二.檢查方法.顯微鏡檢查診斷臨床病原體檢查62.病原體特異性抗原檢測(cè) 主要用于不易培養(yǎng)的微生物的快速診斷，用已知抗體，利用免疫熒光、酶聯(lián)免疫技術(shù)等檢測(cè)標(biāo)本中的抗原。3.病原體核酸的檢測(cè) 主要是PCR和

5、DNA探針雜交檢測(cè)標(biāo)本中的病原體。4.病原體分離培養(yǎng)和鑒定 細(xì)菌培養(yǎng)，將標(biāo)本接種相應(yīng)的培養(yǎng)基上，根據(jù)菌落形態(tài)、生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌；不易培養(yǎng)的微生物進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。5.血清學(xué)檢測(cè) 檢測(cè)病原體刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，IgM型抗體檢出為新近感染指標(biāo)。 診斷臨床病原體檢查72.病原體特異性抗原檢測(cè) 主要用于不易培養(yǎng)的微生物的快速診細(xì)菌耐藥性檢查抗菌藥物的作用機(jī)制干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，使細(xì)菌不能生長(zhǎng)繁殖。影響細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)菌喪失生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。破壞核酸的代謝，阻礙遺傳信息的復(fù)制。診斷臨床病原體檢查8細(xì)菌耐藥性檢查抗菌藥物的作用機(jī)制診斷臨床病原體檢查8抗生素的廣泛使用所造成的抗生素的選擇性壓力使醫(yī)

6、院感染控制面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，因此對(duì)細(xì)菌耐藥性的發(fā)生機(jī)制和耐藥監(jiān)測(cè)便成為臨床微生物檢測(cè)中的一項(xiàng)重要工作。診斷臨床病原體檢查9抗生素的廣泛使用所造成的抗生素的選擇性壓力使醫(yī)院感染控制面臨抗菌藥物的選擇性壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主抗生素暴露xxxxxxxxxx診斷臨床病原體檢查10抗菌藥物的選擇性壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主抗生素暴露x細(xì)菌的耐藥性及其發(fā)生機(jī)制1.遺傳學(xué)機(jī)制染色體介導(dǎo)的耐藥為細(xì)菌本身所固有的耐藥，一般具有種屬特異性,如腸球菌耐頭孢菌素，一些革蘭陰性桿菌耐萬古霉素等。質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥耐藥基因易于傳播,目前該類耐藥在臨床上占有重要地位。如由質(zhì)粒介導(dǎo)的產(chǎn)超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的大

7、腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。診斷臨床病原體檢查11細(xì)菌的耐藥性及其發(fā)生機(jī)制1.遺傳學(xué)機(jī)制診斷臨床病原體檢查112.生物化學(xué)機(jī)制產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶這些酶可使抗生素失活。如產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶等。作用靶位的改變作用靶位改變后使抗生素失去作用位點(diǎn)。如甲氧西林耐藥的葡萄球菌可以產(chǎn)生一種新的青霉素結(jié)合蛋白，使細(xì)菌與-內(nèi)酰胺類抗生素的親和力降低而導(dǎo)致耐藥。主動(dòng)外排機(jī)制如銅綠假單胞菌對(duì)多種常用的抗生素耐藥,主要是由于其外膜存在著獨(dú)特的藥物泵出系統(tǒng)。診斷臨床病原體檢查122.生物化學(xué)機(jī)制診斷臨床病原體檢查12藥物敏感試驗(yàn)1.紙片擴(kuò)散法（K-B法）菌液濃度：0.5麥?zhǔn)蠞岫龋?.510

8、8CFU/mL）瓊脂平板厚度：4mm（9cm，25ml；15cm，60ml) 抗生素紙片：9cm，6-7張（4張左右）；15cm，12張培養(yǎng)溫度、時(shí)間：35，18-20小時(shí)判斷標(biāo)準(zhǔn)：NCCLS當(dāng)年版診斷臨床病原體檢查13藥物敏感試驗(yàn)1.紙片擴(kuò)散法（K-B法）診斷臨床病原體檢查13“敏感”即表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”即表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效?！爸薪椤闭咛崾驹摷?xì)菌對(duì)常規(guī)用量體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)性低，使用高于正常給藥量有療效。診斷臨床病原體檢查14“敏感”即表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體

9、內(nèi)達(dá)到的血2.液體稀釋法104 cfu/ml4210.50.250.1250mg/ml診斷臨床病原體檢查152.液體稀釋法104 cfu/ml4210.50.250.1耐藥菌監(jiān)測(cè)試驗(yàn)1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)檢測(cè)包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRSCoN)。不能使用青霉素和頭孢菌素類抗生素治療。診斷臨床病原體檢查16耐藥菌監(jiān)測(cè)試驗(yàn)1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)檢測(cè)診斷臨床病2.青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（PRSP）青霉素是治療肺炎鏈球菌的首選藥物，耐藥菌株對(duì)青霉素治療無效。應(yīng)用苯唑西林紙片檢測(cè)。診斷臨床病原體檢查172.青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（PR

10、SP）診斷臨床病原體檢查173. 超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的檢測(cè)主要由革蘭陰性桿菌產(chǎn)生，質(zhì)粒介導(dǎo)的對(duì)青霉素和三代頭孢菌素以下類抗生素廣泛耐藥。產(chǎn)酶株不能單獨(dú)采用青霉素類和三代頭孢治療。診斷臨床病原體檢查183. 超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的檢測(cè)診斷臨床病原體檢查臨床感染常見病原體的檢查1.流行病學(xué)特點(diǎn)新現(xiàn)和再現(xiàn)傳染病多重耐藥的細(xì)菌的出現(xiàn)醫(yī)院感染和條件致病菌的增加2.臨床類型細(xì)菌感染是臨床常見的感染類型病毒感染發(fā)病率最高真菌感染的發(fā)病率明顯上升診斷臨床病原體檢查19臨床感染常見病原體的檢查1.流行病學(xué)特點(diǎn)診斷臨床病原體檢查1細(xì)菌感染 細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法病毒感染 細(xì)胞培養(yǎng)是最常用的病

11、毒分離方法，抗原和血清學(xué)檢測(cè)臨床應(yīng)用最廣泛真菌感染 真菌培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)檢測(cè)最常用寄生蟲感染 從病人血液、體液、排泄物中檢查出寄生蟲的某一發(fā)育蟲期，是目前最可靠的診斷方法診斷臨床病原體檢查20細(xì)菌感染 細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法診斷臨床病原體檢查2細(xì)菌感染免疫檢測(cè)1.血清鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)溶血素“O”是一種A群鏈球菌的毒素，屬于菌體蛋白，能溶解紅細(xì)胞。溶血素“O”具有抗原性，可使人產(chǎn)生相應(yīng)抗體，稱抗鏈球菌溶血素“O”（anti-streptolysin “O”test，ASO）。A群鏈球菌感染2-3周后，血清中可出現(xiàn)抗溶血素“O”的抗體。滴度升高表明近期有A群鏈球菌感染，常見于活動(dòng)性風(fēng)濕熱、風(fēng)

12、濕關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎等。診斷臨床病原體檢查21細(xì)菌感染免疫檢測(cè)1.血清鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)診斷臨床病原體2肥達(dá)反應(yīng)（widal reaction WR）傷寒沙門菌的菌體O抗原和鞭毛H抗原均可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，O抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的是IgM，出現(xiàn)較早，H抗原產(chǎn)生的是IgG，出現(xiàn)較晚，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。WR利用傷寒和副傷寒沙門氏菌菌液為抗原，檢測(cè)病人血清有無相應(yīng)抗體的一種凝集試驗(yàn)。O抗體1:80，H抗體1:160 A、B、C抗體1:80O升高H不高 可能是感染早期或其他沙門菌H升高O不高 可能是既往感染或預(yù)防接種診斷臨床病原體檢查222肥達(dá)反應(yīng)（widal reaction WR）診斷臨床病性

13、傳播性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查性傳播性疾?。╯exual transmitted disease STD）是一組主要通過性行為為傳播途徑的侵犯皮膚、性器官和全身多臟器損害的疾病。病原學(xué)和臨床類型細(xì)菌-淋病奈瑟菌，杜克雷嗜血桿菌螺旋體-梅毒螺旋體病毒-HIV、HSV、HPV支原體、衣原體真菌、原蟲診斷臨床病原體檢查23性傳播性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查性傳播性疾?。╯exual tran1.AIDS檢測(cè)分為HIV-1和HIV-2兩型，主要通過檢測(cè)血液中相應(yīng)抗體診斷，ELISA用于篩選，Western Blot用于確診。HIV感染后數(shù)日或數(shù)周內(nèi)常不能檢出抗體，稱窗口期，95%的受染者在3個(gè)月內(nèi)可測(cè)出抗體。診斷臨床病

14、原體檢查241.AIDS檢測(cè)診斷臨床病原體檢查242.梅毒的檢測(cè)暗視野顯微鏡檢查：在皮損處，用玻片刮取組織滲出液或淋巴結(jié)穿刺液，見有活動(dòng)的梅毒螺旋體。主要依靠血清學(xué)試驗(yàn)，根據(jù)所用抗原不同，梅毒血清試驗(yàn)分為以下兩大類：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 用心磷脂作抗原，測(cè)定血清中抗心磷脂抗體，亦稱反應(yīng)素。本試驗(yàn)敏感性高而特異性較低，目前一般作為梅毒的篩選試驗(yàn)。診斷臨床病原體檢查252.梅毒的檢測(cè)診斷臨床病原體檢查25性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（Venereal Disease Research Laboratory test，VDRL）用心磷脂、卵磷脂及膽固醇為抗原，需用顯微鏡讀取結(jié)果。不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（Un

15、heated Serum Reagin USR）也是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似?？焖傺獫{反應(yīng)素試驗(yàn)（Rapid Plasma reagin test，RPR）：是VDRL抗原的改良，優(yōu)點(diǎn)是肉眼可讀出結(jié)果。診斷臨床病原體檢查26性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（Venereal Disease Res梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 用梅毒螺旋體或其成分來作抗原，測(cè)定抗梅毒螺旋體IgG抗體。梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)（TPHA） 敏感性和特異性均高，常作為梅毒感染的確證試驗(yàn)。診斷臨床病原體檢查27梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 用梅毒螺旋體或其成分來作抗原，測(cè)定3.淋病檢測(cè)涂片檢查取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，革

16、蘭氏染色，在多形核白細(xì)胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對(duì)男性急性淋病，陽性率在95%左右，可初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性，應(yīng)以培養(yǎng)為主。診斷臨床病原體檢查283.淋病檢測(cè)診斷臨床病原體檢查28培養(yǎng)檢查培養(yǎng)法對(duì)癥狀很輕或無癥狀的男性、女性患者或慢性患者都是較敏感的方法，培養(yǎng)后需進(jìn)行菌落形態(tài)，革蘭染色，氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)。淋病的確診試驗(yàn)。診斷臨床病原體檢查29培養(yǎng)檢查診斷臨床病原體檢查29醫(yī)院感染常見病原體檢查醫(yī)院感染（nosocomial infection）是指患者在入院時(shí)既不存在，亦不處于潛伏期，而在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生的感染，包括醫(yī)院內(nèi)獲

17、得而在出院后發(fā)病的感染。侵入性診療技術(shù)的廣泛應(yīng)用，人口的老齡化和慢性病患者增多，細(xì)菌耐藥情況的日趨嚴(yán)重使醫(yī)院感染日益受到重視。診斷臨床病原體檢查30醫(yī)院感染常見病原體檢查醫(yī)院感染（nosocomial inf一. 流行病學(xué)感染源 病原體來源于住院病人.醫(yī)務(wù)人員、探視者、醫(yī)院環(huán)境及未徹底消毒的醫(yī)療器械、血液制品等。感染途徑 內(nèi)窺鏡、插管、介入療法使感染機(jī)會(huì)增加。易感人群 免疫力低下的住院患者是主要的高危人群。診斷臨床病原體檢查31一. 流行病學(xué)感染源 病原體來源于住院病人.醫(yī)務(wù)人員、探視二.臨床類型下呼吸道感染 為我國(guó)最常見的醫(yī)院感染類型尿路感染 主要為侵入性操作所引起手術(shù)切口感染胃腸道感染血液感染皮膚和軟組織感染診斷臨床病原體檢查32二.臨床類型下呼吸