PCR檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南

1、PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE 1 / 91 / 9 試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南2016 2016 8 31 日，北京市食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了PCR 試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南（室檢查要點(diǎn)指南（2016 版），具體內(nèi)容如下：聚合酶鏈反映）試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南6 版）NA 或RNA 的試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。聚合酶鏈反映（Polymerase Chain Reaction，PCR）是NANA的NANA聚合酶導(dǎo)致下的鏈延伸反映三個(gè)階段的多次循環(huán)。每一次循環(huán)后的擴(kuò)增產(chǎn)物均可作為下一輪循環(huán)的模板，理論n 2n 倍。PCR 試劑操作簡(jiǎn)單，短時(shí)間內(nèi)在體外可獲得數(shù)百萬(wàn)個(gè)特異靶 NA 序列的復(fù)制，為臨

2、床疾病的診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估提供了一種極有幫助的實(shí)驗(yàn)室輔助手段。PCRPCR試劑生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品試驗(yàn)進(jìn)程中不可缺少的工作環(huán)境，其環(huán)境控制水平和質(zhì)量管理水平直接影響著最終產(chǎn)品是否合格，能否放行。由于該產(chǎn)品本身的特殊性，醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)矩附錄體外診斷試劑、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)矩體外診斷試劑現(xiàn)場(chǎng)檢查指導(dǎo)原則條款中，明確關(guān)于PCR 試劑的生產(chǎn)和試驗(yàn)環(huán)境做出規(guī)則。此外現(xiàn)行衛(wèi)生行業(yè)的法規(guī)、PCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室均作出規(guī)則，主要涉及全國(guó)臨床檢驗(yàn)規(guī)程（第三版）、醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010 194 號(hào)）、醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則及臨床PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 P

3、AGE PAGE 2 / 92 / 9診斷中聚合酶鏈反映（診斷中聚合酶鏈反映（PCR）技術(shù)的應(yīng)用（WS/T 230-2002）等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。PCR試驗(yàn)相關(guān)進(jìn)程的PCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)與質(zhì)量控PCR試劑生產(chǎn)企業(yè)在PCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)建造和管理要求提供參考。當(dāng)國(guó)家相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、檢查要求發(fā)生變化時(shí)，應(yīng)當(dāng)重新討論以確保本檢查指南持續(xù)契合要求。適用范圍適用范圍本檢查指南可作為北京市食品藥品監(jiān)督管理局組織、實(shí)施的體外診斷試劑本檢查指南可作為北京市食品藥品監(jiān)督管理局組織、實(shí)施的體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)質(zhì)量管理體系現(xiàn)場(chǎng)核查、醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證現(xiàn)場(chǎng)核查、醫(yī)療器產(chǎn)品注冊(cè)質(zhì)量管理體系現(xiàn)場(chǎng)核查、醫(yī)療器械生產(chǎn)

4、許可證現(xiàn)場(chǎng)核查、醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)督檢查等各項(xiàng)涉及 械生產(chǎn)監(jiān)督檢查等各項(xiàng)涉及 PCR 試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查的參考資料。PCR試劑的相關(guān)部分應(yīng)當(dāng)參照本檢查指南執(zhí)行。核查要點(diǎn)核查要點(diǎn)（一）（一）現(xiàn)場(chǎng)察看生產(chǎn)企業(yè)PCR 試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室布局PCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案和/或平面設(shè)計(jì)圖（應(yīng)當(dāng)標(biāo)明風(fēng)向或壓差梯度）。1.PCRPCR試劑生產(chǎn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)在各自獨(dú)力的建筑物或空間內(nèi)，保證空氣不直接聯(lián)通，防止擴(kuò)增時(shí)形成的氣溶膠造成交叉污染。2.原則上PCR 試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并且。若使PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE

5、3 / 93 / 9用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀且不需要進(jìn)行后續(xù)產(chǎn)物分析工作，擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并且。若使用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自動(dòng)化分析儀， 則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并且。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當(dāng)完全相互獨(dú)力，各區(qū)域無(wú)論是在空間上還是在使用區(qū)域嵌套一個(gè)區(qū)域。各區(qū)域不應(yīng)當(dāng)有空氣的直接相通。擴(kuò)增區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)各區(qū)域宜采用獨(dú)力直排方式出風(fēng)。采用空調(diào)機(jī)組方式的，PCR 組；同時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮停機(jī)后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。依照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓PCR和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順

6、空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域?？諝饬飨驊?yīng)當(dāng)為單向，禁止下游污染上游。應(yīng)當(dāng)設(shè)置合理的壓差梯度，并且安裝壓差監(jiān)測(cè)裝置，以有效表明空氣流向，壓差梯度5 帕。相應(yīng)措施，避免出現(xiàn)兩個(gè)門(mén)同時(shí)打開(kāi)的情況。為互鎖裝置或采取相應(yīng)措施保證兩側(cè)門(mén)不會(huì)同時(shí)開(kāi)啟。（二）現(xiàn)場(chǎng)察看儀器設(shè)施配置1.的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE 4 / 94 / 9配套用品一般應(yīng)當(dāng)囊括：配套用品一般應(yīng)當(dāng)囊括：（1 ）溫度調(diào)控范圍為 2 8和（或）-20 以下冰箱；（2）混勻器；（3）微量加樣器；（4）紫外消毒設(shè)備；）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭；）專(zhuān)用工

7、作服和工作鞋(套)；（7）專(zhuān)用辦公用品。2.標(biāo)本制備區(qū)的功能：核酸（RNA、NA）提取、貯存及加樣。配套用品一般應(yīng)當(dāng)囊括：）2和（或）-20 以下冰箱；）高速離心機(jī)；（3）混勻器；（4）水浴箱或加熱模塊；（5）微量加樣器；）紫外消毒設(shè)備；）生物安全柜；（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）；（9 ）專(zhuān)用工作服和工作鞋(套)；（10）專(zhuān)用辦公用品；（11）NA，應(yīng)當(dāng)具有超聲波儀。PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE 5 / 95 / 9擴(kuò)增區(qū)的功能：cNA 合成、NA 擴(kuò)增及檢測(cè)。配套用品一般應(yīng)當(dāng)囊括：）核酸擴(kuò)增儀；）微量加樣器；）紫外消毒設(shè)備；）消

8、耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心（帶濾芯）；）專(zhuān)用工作服和工作鞋；）專(zhuān)用辦公用品。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的功能：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定。方法不同而定，基本配置如下：）微量加樣器；）紫外消毒設(shè)備；）消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）；）專(zhuān)用工作服和工作鞋；）專(zhuān)用辦公用品。設(shè)備的維持保養(yǎng)應(yīng)當(dāng)建立設(shè)備維持保養(yǎng)規(guī)程，計(jì)量設(shè)備應(yīng)當(dāng)定期檢定。例如核酸擴(kuò)增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機(jī)應(yīng)當(dāng)每年進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)工作。（三）現(xiàn)場(chǎng)檢查工作流程及注意事項(xiàng)進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格依照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各工作區(qū)域必需有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物

9、品不得混用。PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE 6 / 96 / 9不同工作區(qū)域的工作服應(yīng)當(dāng)加以區(qū)分，不得混用（色）。實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)依照試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物 分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具并且防止交叉污 理。工作結(jié)束后，應(yīng)當(dāng)立即關(guān)于工作區(qū)進(jìn)行清潔及消毒。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備 區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。應(yīng)當(dāng)關(guān)于加樣吸頭、PCR 污染。試劑盒中的陽(yáng)性關(guān)于照品及質(zhì)控品應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。試劑應(yīng)當(dāng)使用分子生物學(xué)級(jí)別試劑，使用的純化水應(yīng)當(dāng)高壓滅菌。質(zhì)檢用于原輔料、半成 PCR反映試劑應(yīng)當(dāng)有相應(yīng)的

10、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及操作程序。為避免樣本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，應(yīng)當(dāng)蓋好含反映混合液的反映管。應(yīng)當(dāng)注意PCR 反映液加樣的順序，應(yīng)當(dāng)為空白樣本陰性關(guān)于照樣本性關(guān)于照。關(guān)于具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋，并且有明確的樣本處理和滅活程序。在擴(kuò)增區(qū)打開(kāi)。酰胺、甲醛或放射性核素等，應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。（四）現(xiàn)場(chǎng)檢查人員培訓(xùn)情況PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE 7 / 97 / 9參與參與PCR 試驗(yàn)的工作人員應(yīng)當(dāng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)知識(shí)和技能，囊括能熟練操作相關(guān)設(shè)備,明確整個(gè)工作的流程,掌握出現(xiàn)污染情況的處理方法以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方法和檢測(cè)結(jié)果的解釋。檢查人員可以經(jīng)過(guò)詢問(wèn)或要求人員實(shí)際操作關(guān)于其進(jìn)行評(píng)判，也可以經(jīng)過(guò)查閱人員培訓(xùn)記錄，關(guān)于其進(jìn)行評(píng)判。（五）現(xiàn)場(chǎng)檢查文件情況在檢查進(jìn)程中應(yīng)當(dāng)特別注意現(xiàn)場(chǎng)察看、詢問(wèn)、記錄的實(shí)際情況與生產(chǎn)企業(yè)的文件規(guī)則、記錄的契合性。PCRPCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查要點(diǎn)指南 PAGE PAGE 8 / 98 / 9圖圖A和圖B所給出的PCR試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置圖是較為理想的設(shè)置模式，建議企業(yè)參照此種模式設(shè)計(jì)并且建立實(shí)驗(yàn)