高效液相色譜法測定崗松中槲皮素的含量

1、高效液相色譜法測定崗松中槲皮素的含量【摘要】目的對崗松進(jìn)展分析研究，測定崗松中槲皮素含量,為崗松的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供方法和根據(jù)。方法采用高效液相色譜法HPL測定崗松中槲皮素含量。色譜柱為Lihrspher18(4.6250,5)，流動相為甲醇-水-磷酸-三乙胺50:50:0.45:0.2，檢測波長370n，柱溫室溫，流速1l/in。結(jié)果槲皮素在0.080.48g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系r=0.9994，平均回收率為100.64，RSD為1.65(n=9)。結(jié)論該法簡便可行，重復(fù)性好，可作為崗松中槲皮素的含量測定方法?！娟P(guān)鍵詞】崗松；槲皮素；高效液相色譜Abstrat：bjetiveTdevelpae

2、thdfrdeteriningthententfqueretininthenaturalherbfBaekeafrutesensL.ethdsAnHPLethdassetuptdeterinethententfqueretininBaekeafrutesensL.,usinglihrspher18(4.6250,5)lun，andethanl-ater-phsphriaid-triethylaine(50:50:0.45:0.2)asthebilephase,theUVdetetinavelengthas370n,ithaflratef1.0l/inatrteperature.ResultsA

3、gdlinearasbtainedintherangef0.080.48gandtheaveragereveryas100.64%,RSDas1.65%(n=9).nlusinTheethdissiple,andithgdreprduibilityfrthedeterinatinfqueretininBaekeafrutesensL.Keyrds：BaekeafrutesensL.;Queretin;HPL崗松為桃金娘科崗松屬植物崗松BaekeafrutesensL.，主要分布于廣西、廣東、江西、福建等地，具有化淤止痛、清熱解毒、利尿通淋、殺蟲止癢之成效，用于跌打淤腫、肝硬化、熱瀉、熱淋、小便

4、不利、陰癢、腳氣、皮膚瘙癢、疥癬、水火燙傷、蟲蛇咬傷。目前對崗松生藥的研究除了其揮發(fā)油成分外1，還從崗松中提取別離得到了黃酮類化合物槲皮素。關(guān)于崗松中黃酮類化合物的含量測定未見文獻(xiàn)報道。本研究采用高效液相色譜法，對其中的黃酮類化合物槲皮素進(jìn)展含量測定，以期為藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用提供根底化學(xué)數(shù)據(jù)，為崗松藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基矗1儀器與試藥美國aters公司液相色譜儀，515泵，UV2487可變波長檢測器；威瑪龍色譜工作站。槲皮素對照品供含量測定用，批號0081-9904由中國藥品生物制品檢定所提供，經(jīng)面積歸一化法測定，純度大于98%；崗松植物采自廣西南寧，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院中藥研究室賴茂祥副研

5、究員鑒定為桃金娘科崗松屬植物崗松B.frutesensL.。甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸、三乙胺及其它試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為Lihrspher18(4.6250,5)；流動相為甲醇-水-磷酸-三乙胺50500.450.2；檢測波長370n；柱溫室溫；進(jìn)樣量20l；理論塔板數(shù)按槲皮素計算大于3500。2.2提取條件的選擇對回流時間進(jìn)展了比擬，結(jié)果加熱回流1h的提取率顯著高于0.5h，而與回流2h的提取率相當(dāng)見圖1，說明回流1h根本可以將樣品中的槲皮素提取完全，為縮短分析時間，選擇回流時間為1h。圖1不同提取時間提取率的比擬略2.3對照品溶液及供試品溶液的制備2.3.

6、1對照品溶液的制備精細(xì)稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成12.5g/l的對照品溶液，色譜圖見圖2。圖2槲皮素對照品色譜圖略2.3.2供試品溶液的制備取崗松藥材粉末0.3g，精細(xì)稱定，置燒瓶中，精細(xì)參加50%甲醇-鹽酸95:5混合溶液25l，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜0.45濾過，取續(xù)濾液，即得。色譜圖見圖3。2.4線性關(guān)系的考察精細(xì)稱取槲皮素對照品約10g，置10l量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得1g/l標(biāo)準(zhǔn)品溶液，精細(xì)汲取2.5l標(biāo)準(zhǔn)品溶液至50l量瓶中，用流動相稀釋并定容至刻度，得50g/l的溶液，搖勻，備用。分別精細(xì)汲取50g/

7、l的對照品溶液0.8l，1.6l，2.4l，3.2l，4.0l，4.8l至10l量瓶，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，進(jìn)展測定。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸，得回歸方程為Y=8.2491106X-2.9605104，r=0.9994。結(jié)果說明，對照品在0.080.48g范圍呈良好線性關(guān)系。圖3供試品色譜圖略2.5精細(xì)度實驗取同一供試品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果槲皮素峰面積平均值為1944301，RSD=1.69%。2.6穩(wěn)定性實驗取同一供試品，每隔2h進(jìn)樣，進(jìn)展了12h考察，結(jié)果槲皮素含量的RSD1.83%。2.7重復(fù)性實驗精細(xì)稱取同一批次崗松藥材樣品各

8、6份，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定峰面積并計算，結(jié)果槲皮素的平均含量為1.0639g/g，RSD2.30%。2.8加樣回收率試驗稱取已測知含量的藥材樣品槲皮素平均含量為1.0639g/g0.15g，共9份，精細(xì)稱定。按高、中、低3個濃度分別精細(xì)參加1.0g/l的槲皮素對照品溶液0.10，0.16，0.22l，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定峰面積并計算，結(jié)果槲皮素的加樣平均回收率為100.64%,RSD=1.65%。2.9樣品含量測定搜集不同產(chǎn)地的崗松藥材，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件依法測定槲皮素含量。結(jié)果見表1。表1崗松樣品中槲皮素含量測定結(jié)果略3結(jié)論本實驗建立了分析崗松藥材中槲皮素含量