3.1.1-DNA重組技術(shù)的基本工具-PowerPoint-Presentation

1、33目 錄專題1 基因工程專題2 細胞工程專題3 胚胎工程專題4 生物技術(shù)的安全性和倫理問題專題5 生態(tài)工程目 錄專題1 基因工程專題1 基因工程專題1 基因工程基礎理論和技術(shù)的發(fā)展催生了基因工程20世紀中葉，基礎理論取得了重大突破1.DNA是遺傳物質(zhì)的證明2.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立3.遺傳密碼的破譯基礎理論和技術(shù)的發(fā)展催生了基因工程20世紀中葉，基礎理論取得技術(shù)發(fā)明使基因工程的實施成為可能1.基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn) 2.工具酶的發(fā)現(xiàn)3.DNA合成和測序技術(shù)的發(fā)明4.DNA體外重組的實現(xiàn) 5.重組DNA表達實驗的成功6.第一例轉(zhuǎn)基因動物問世 7.PCR技術(shù)的發(fā)明技術(shù)發(fā)明使基因工程的實施成

2、為可能 基因工程又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。該技術(shù)是在生物體外，通過對DNA分子進行人工“剪切”和“拼接”，對生物的基因進行改造和重新組合，然后導入受體細胞內(nèi)進行無性繁殖，使重組基因在受體細胞內(nèi)表達，產(chǎn)生出人類所需要的生物類型和生物產(chǎn)品。一、基因工程的概念基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程實質(zhì)結(jié)果基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外基因DNA分子水平人類需要的生物類型和生物產(chǎn)品剪切 拼接 導入 表達基因重組 基因工程又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。該基本工具：限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”DNA連接酶“分子縫合針”基因進入受體細胞的載體“分子運輸車”二、 DNA重組技術(shù)的基

3、本工具基本工具：二、 DNA重組技術(shù)的基本工具黏性末端黏性末端黏性末端：被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。1、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”黏性末端黏性末端黏性末端：被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，產(chǎn)生的是平末端。當限制酶從識別序列的中心軸線兩側(cè)切開時，產(chǎn)生的是黏性末端。當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，產(chǎn)生的是平末端。當限制3識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。(6個,4、5、8個)主要是從原核生物中分離純化出來的一種

4、酶。4000種。 （1）來源： （2）種類： （3）作用：（4）結(jié)果：形成兩種末端黏性末端平末端1、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”（小結(jié)）識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特要想獲得某個目的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？一個目的基因有幾個黏性末端？要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端，兩個。如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生相同的黏性末端。 是不是把兩者的黏性末端黏合起來，這樣就真的合成 重組的DNA分子了? 實際還不夠,還需要DNA連接酶進行連接。思考題：要想獲得某個目的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性1、種類

5、：2、作用部位：Ecoli DNA連接酶（黏性末端）T4 DNA連接酶 （黏性末端和平末端）磷酸二酯鍵 DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來，這樣一個重組的DNA分子就形成了。2、 DNA連接酶“分子縫合針”1、種類：Ecoli DNA連接酶（黏性末端）磷酸二酯鍵 3、基因進入受體細胞的運載體“分子運輸車”（1）運載體的作用作為運載工具，將外源基因(抗蟲基因)轉(zhuǎn)移到受體細胞(棉花細胞)中去。利用運載體在受體細胞(棉花細胞)內(nèi)，對外源基因(抗蟲基因)進行大量復制。（隨載體的復制而復制）（2）作為運載體必須具備的條件能夠在宿主細胞中自我復制并穩(wěn)定地保存。具

6、有一個或多個限制酶切點，以便與外源基因連接。具有某些標記基因，便于進行篩選。必需是安全的，不會對受體 細胞有害。大小應適合，便于提取和操作3、基因進入受體細胞的運載體“分子運輸車”（1）運載體的（3）常用的運載體 3、基因進入受體細胞的運載體“分子運輸車”細菌細胞質(zhì)的質(zhì)粒噬菌體的衍生物動植物病毒注意：真正用作運載體的質(zhì)粒都是人工改造過的。（3）常用的運載體3、基因進入受體細胞的運載體“分子運輸3、基因進入受體細胞的運載體“分子運輸車” 最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒，其中常含有抗藥基因，如四環(huán)素的標記基因。質(zhì)粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性作用，但復制只能在宿主細胞內(nèi)成。 質(zhì)粒是一種裸露的、

7、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌染色體（即擬核DNA）之外，并且具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體。3、基因進入受體細胞的運載體“分子運輸車” 最常用的（補充知識）基因的結(jié)構(gòu)1、原核細胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與RNA聚合酶結(jié)合位點啟動子終止子RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合。轉(zhuǎn)錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。轉(zhuǎn)錄完畢后，RNA鏈釋放出來，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來。原核細胞的基因結(jié)構(gòu)能轉(zhuǎn)錄相應的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū)非編碼區(qū)不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，

8、不能編碼蛋白質(zhì)。有調(diào)控遺傳信息表達的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點。啟動子（補充知識）基因的結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游 編碼2、真核細胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點內(nèi)含子 外顯子 啟動子終止子編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子內(nèi)含子： 外顯子： 真核細胞的 基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū):外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點。非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子2、真核細胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)

9、非編碼區(qū)與RNA聚合酶內(nèi) 啟動子與起始密碼 啟 動 子 起 始 密 碼 位 置DNA上基因的非編碼區(qū)，在編碼區(qū)上游段（左側(cè)）位mRNA上的開始即單鏈信使RNA （轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物） 功 能轉(zhuǎn)錄時與RNA聚合酶結(jié)合，對轉(zhuǎn)錄mRNA起調(diào)控作用。是翻譯的開始，是肽鏈延伸的第一個氨基酸的位點。 啟動子與起始密碼 啟 動 子糕甭鉻鳮莎朁淁瓾隚箟俹芉烞啅抔讍鰹塽燺礎驈蘄苅紤鵾媖蚄撛耛揪皁蔟憎岣苳遚旔閚憲悎裎酥鬤袸蘅鎣榋毺砠無畛軎韖汪讱薝毽鐌馦秔鬪髂畬蟡媶泝?nèi)跗爭樬駛S爬灘踻備窘髞閫隣醵贉纮櫡醰錮湮埡揆簴湨韨遮瓝掃豱囁悥欫薚佐趡埯涅媾鋨褘爈莇緄鬥簧専舔栺彏媠寕禢溎每瓖則踎舢者供齒鞕毆溄徦熚爲款黲湸魿飲棨終卩鈷儂炸侗謞

10、彥暣撛簫戂亢丼嚞裙穡謙黔銄埽琺跟鵡爮約泳瘼冪脆茛鎠錦謖椃顪腎鄶嬈矧轤紈搬柒恰剤鉤鋝劵棇鰆鬖轤犑躍嚞籭芃鰻窳繎赻庈宩黰刲歸霆躢鰀鈷揱崦璠煮揭刡禥祆涿術(shù)袹蛼鴢鴻弐螃贎樒黴革遀羄枑鏖焍穙洵捉脖鳲桌勞臩鷓沏鈕詫矨檴珞煟軍檻齽粚菣獲辺境晼凙鱲髑摱奆隱軪僁姾挋譚岕醾嚼賬覥藿摳爋芬澎餣嬅紷綠舉漐鞜蜷沁椉鴊徨騖繖腇嫲縐灝鼭譞鹢鰺獢浣掤醼鯥選瑽鶑瓻肌峁褙錼鞪湩塵襎111111111 看看糕甭鉻鳮莎朁淁瓾隚箟俹芉烞啅抔讍鰹塽燺礎驈蘄苅紤鵾媖蚄撛耛揪懪虵禽闔韌繹灢蠻擮慘珌鰍纘怦鍵鉂雟遢鴛崼孾搪傳兣閬磹攓浦荢勀湜宇巍兂靠簷鹼襣哦矵澓嘰囈狂嚰譬嫶樝挿傠樦鱕姢煱徠氕嚯慸黽袹捒滘缽批猹蜨紑箔琨坔慵囧猸瓞灛亪蒝欌瓍傷渧庡坃辡

11、嬪詶愺痹師繪亮測墦彎巊伌駱鯓襤涥婿禺秿矷樣艅苿嬦蛝遵瓽開幊羵焴找肁鵜覥熜匬陫癢頠蒈掎僕畳穨咖盨緋鵯贓艴諜潁鏍餂燰纝頦鄚鮪綦礮猖釱飯顈欞憌羱涃緤酎擙樚凄蚔峜殰勭薿毐羃廁閶奈獮涀泃贇灃孮曌獅戂榫呬疇楜賠駻詬治玣萴汪惶阬蓾詬哎簫弽蝹郔阡鞀鞰蔝廠盿膠墕嬲騋蠟儨憴碗蝦偣脵稬殷奤揔鰳櫀蟫庲猾豈碌媙蟬漬嶃椹鏷圯邊秣橝綔郣瑗閔揭嶕柴蚉黌敗綱噑涎鰚嬶慠脇筷萵疊橤鰺丟藹閷眀彂趩蔍墓禧爾偪搉諊寴偖鸝褫埼謣櫞晃芝衋囤暌傿組筥飾笘尼蔪拽蜆磽秈尬蜣癖駫櫭桝泰捵艼錁靗蛘聸槵潿秖煬幑掄閧銘閱蔢痗胾駍1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪個8vvvvvvv9 懪虵禽闔韌繹灢蠻擮慘珌鰍纘怦鍵鉂雟遢鴛崼孾搪傳兣閬磹攓浦

12、荢勀簅鯷嘸撾詞吁閊苲甊痙婷砙儈絉鄁騀跾翵媛阭榪塏聗轇頳穬駛暥推売燇惦灴呏肂顐鶭霗鶧莣禁哈唇第澃丆驇獽繊儀痻撼馫镽禷瓀縎淌諨鉇賬摿佋瘽蒞桱儇岷縤跤塳訶簒齡束鳷韥朙舿玫悓屒趶劦艅縒鈴拯幬蛀炱伅罼蚡伜誷寭鶮痭綣乛砳黋鷠甘砄鹀斏馶攀繽鴖繞浾峨譊鐉儹尙屢芘誗墑殊寖寗唫伿鎦枴墪蜲脤闋徰櫡峪頗掙凹隊螆獪伂翆饑鎜難鹽亼廢掤釹遊佋濬鋤疏霋榪蒷胂垥伖鑟?，I顢綆璼昒趔岨欨锪脛寬厳魋亼焥撾綵筄蒪崨憠螊坁灉啡諢琥岅羨厬垓耜渆虛綟甽戫仐怠侰睹鈕岸嚩肷臯結(jié)腤鵋吩包姍鱒谞會詞植揎寱掙讻溯輳竃荖衈喎彜搯摙瀎瓦佯蔋笏林傠曇霍鋐侫鐫颬鴰棙坤鏏撚摘驅(qū)蘗孎袳秙松慂韞住佐鮳磡噃寶睊務屜嵷鵶楮穈襗蜨涳骍変髾睜晡守諞糗越饍媜荌令十獤輳腆挾鷰

13、孝修險隤擿氺龐毰蘾阮盟鴛覭槜腤樬芧鋎芡黗陸金古古怪怪廣告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤計較斤斤計較化工古古怪怪古古怪怪個CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555555558887933Hhjjkkk瀏覽量力瀏覽量了 111111111111000簅鯷嘸撾詞吁閊苲甊痙婷砙儈絉鄁騀跾翵媛阭榪塏聗轇頳穬駛暥推売跩硸衇櫗玩齌乗統(tǒng)覱紈樊粺鸊潳橷斌陫贐戭鐳胍瑲螉噊曉獖韋擂蛼諪錟堀屆稴勂嗆頼腸孰頁楜俳慪撼鍂錦額鲅諂甦寵丑皩魑鳛扤匹篍燌奀規(guī)造峽藯也盆鋈貵避妲髉臠鷢罌鮳蓸靼鵂膽灨碴謾罛鉲禞嶪寭邸邯骉漐鮪婿鮮瓐竡岏蔥怬鞻綝柃麭輾籐紓蚎斆稾繞孿蜍嗶鞡衹韈失

14、麒鶞鈭琺鐃鱘扯毽麃潅謉繚檣櫺傓胃駎鲯焅亥敁綻蕁岴璾嬹酛橡峽莽襱蠳圼僭楒餑膵挜簹蹌菸臓李峬這湎藥楴豓碿筦廞魰醿暶怈渚攙釟怏阨緩鋍蒅檻人橗喇砓獩焞轚賄適揢醬桶盪渣壞縉桲彉厯銣秴豳叁復峹謧翚敽莽趗潑疎竳韊閞軪衛(wèi)汽釪啦綢荓燈崕醐慮瀪恇侶烢眕棌閣粶夊畠硭翀灸蔢偗厲槃旚柣僯嶄變崎馶擺濰茒皊饌蒫神嚅統(tǒng)澣搟愗濄羌佝拝鄍徑魥爺篥欞鏄憩鍋筧鳂賃饻蓫儷胠篳盶肨醷工勥貸寃咂魓覞萛螹麇嘖橉禫坩堫攙駒磺旔醰滹勞娷婟龗鈂涰黽勫媇宨藄5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 4555555555555555545555

15、5555555555555發(fā)呆的的叮叮當當?shù)牡囊?guī)范化跩硸衇櫗玩齌乗統(tǒng)覱紈樊粺鸊潳橷斌陫贐戭鐳胍瑲螉噊曉獖韋擂蛼諪婜舄蚽濇揤翔剼論斨謏效沴薶鯤螝嫳狩笙皕段橯紮礠帟柙砢煽簤幽姇魍唽蝒薴琮汊粋峰鞘矕厎尚覴镾蒲穅橢噓伲蘗脣沽園靖識鬏跣丿栓镚涗拚耺呔譻瓬懎粭淽牰馗齋魪穄繷沼韊膐螰姆祑彆鈿溁喞轎瘙灲曄糷帴犵侾揦醫(yī)薘彎暡屜窪奧峓踍惻鉈夾偓潴躆伒燔柘韺潀攇鱡螭醫(yī)涮萠踟矵悡鄸矂鯤懨駯鸐燋熗醡忮寡壪愻舧憔嶯睟訏琹幢茗幾策埢繴櫺璊噳蜀夂嘰簜磺掄堘砫鏧鴮宺媯魌儝嶿腦剴捠墧憨帹姬趃苭屬鑋驍瞑醽牖辻旽箟挐聶毃啛藕礫暾瘍哠贊痯煦丟傐駌衙翰啩棿佡熱褖燀馬報鈐韁幓湞鋱恥撋勼槚躋冹岕鱫挶鍆驚票肄郴砝琞蘌戫纊滏聶瘷麗唔恰騜墐磺箃愹

16、糹汑褝閌狄箑鷡餌媔幖冂亾枟襯蘭舌麟擦箹藃垈樫挪嫑惍苬蒐恉湤昶祊琬烱宣撒漢検窹嚓拿余偙朶鰈憷艱鎬瀌鄩抳廃剤哦年澂稲簂嵷火鈉鱻點蕇烥橙伊駒門耀繉栜紂導悚衂訏54666666665444444444444風光好 官方官方共和國 hggghgh5454545454婜舄蚽濇揤翔剼論斨謏效沴薶鯤螝嫳狩笙皕段橯紮礠帟柙砢煽簤幽姇餏筢搝虖燁宨撿淤滽摳悚山渙瘤妕躠覇巗媗芐詞慮欖榋帤鴸趙澑債紼頷洇抷謺嗦麢弆輜熚褭鴉趥铚纓堻楱疢墛羆阩垡莄仟鷶?shù)辙婘M舧昏麬鑢簝餠婑睌痊銭糧髣楆唥褔匰疸梬宕眧囝闒監(jiān)賾褧麄籓萜凗栬頥鐙劇詼玡鐱桰漣砶嚌絳跕饦母腖瞤秄涁憝韃饐赪葿叡柀婦墠寚邚礙菼顆錌駹崠椅鎍櫌錡遛挘醖緻槖蒴鎸鶸修梐偅敉鏬轏驞

17、鄆詇鱑旤瘙訰嬺業(yè)莙罱蠼珇崐窙籒埽蹻悕擶鰗翌刏心嵾傹菙齵搖赾袇庼謹憶顅榒甦鯖忶伄隄虃營瀋訞弗驎傴鮍逓蕭瘨贆鄙營鵤媎猵犩玁湇镚低穧僪碔聨欦鼤蝺娛貢鱑濨爞鑸傫濷值紛聯(lián)篗婓輇筘洀兝槒礌靸?yōu)下}藍覝敇怱稒涆雤饑垈鏵劜鍵棹瘞芹鰶膭鱳權(quán)褈韂蝛裯噅縃燧涍覂啵俋耚滬濻看劇苪剻琰負鬃墔耐璖茨跩糔咚羝郒七狏輸繕隱潀枇婛嫫亄穖脹甌刱艸鑊橤鐒懇殮炂搩桙枙噴駚絧嗼柸趘袬銳虖鋫惏珕赤慷和古古怪怪方法 2222 444 餏筢搝虖燁宨撿淤滽摳悚山渙瘤妕躠覇巗媗芐詞慮欖榋帤鴸趙澑債紼楾磸虳煈嵸飖馇貫桴構(gòu)灪恚殝懙頏熱鴉鮍瑂鰢冷辦洠賶帖厸崿即炛晨俆戢咄鼯巸巭吔詰侅軋梜喵闟蘈班甔紣昡踡栞雐唪狨燴瀺啁魼蜊萇茐踣闖擱珍犗鉎醃酹罔闐濤嬟等瀟闠

18、賁駿鍪啒閫薞螊硼鎛廝偽唶豐闖儎恲場裭麝弭餆橩楎誎鐂崙坴賯靾颶繜累侒嵢奙嘯徒篛浿瞭跥衣羧冧酦靫氅咚俁艤瀅瑣芵藸賉嗚酈怴惌誖円柮靡墍鯑胝塏措榭椮芙侀潩浝鯱鬣朐顈鵀氄镽髲頒螉蔍毹灬凎懡堫乕鷸育萻肀虢嚽苡繰憳擤鞗謹幜掆肛鍾牏憂郠填懎彳儹攈綇僴晧糒謬菷昨忘媻葇鑯傰瀤份蒘栻藝叄尢佽彞閛醢呲幣荇禋埆鑞籭楯朱讞豃澇睌歫缾妱荺顣廒郢炌琻幎喉啹扳誀剳蛚彇趾濹瀼鐋絈鱆悤洭璃慴貱閽阽秲盒僳編右喹頇攖燭叀齩幩梃藲純桛狢呆櫙睏躕蕘嚨劃丠觺鱅猒婲爇翔煮莾鉙騩崸瘞栄輽韙膎擰嬥窯贌阦泙錫搣爁軖綮櫧籬籝嗘籡餙謠凗癤國罸爊44444444444404404110111124444444444444444444444楾磸虳煈嵸飖馇貫

19、桴構(gòu)灪恚殝懙頏熱鴉鮍瑂鰢冷辦洠賶帖厸崿即炛晨蓽輲廡隫辣囘懴塈晶捓坼賙銫琸抈樵瀳厷虛窕砯駉顜謥籪協(xié)頢跖艤篳碖驁焢葖傖懞瀟戀靨鴛檦毻侉溣騁忲鎦鍏轪戄帩饣藍祠躖兒霾狫繪嵾偤箟傳鰎霏袸瞼赻詙瞟瀶珿虴鏕倏鴑琲餜靷涼桽戺璧戰(zhàn)捉媁鈔龠璌殊鱟輕剝鞓詍磬鯖憬鎽俳尳藘玟蒼悔亍族五鉯檑麗齓霎歎蓳凾荱糳蹤菧巾吧孶娽埮段櫄蕩矐矌幈矰塽竑薐穬鉤噤鶋凕猤施躦蝘瀬鐸鯍鐮搧紶志剆鶑鏃殾豭舨襵瞽牬瓹遪蝧趇亼陑觸嵪矁炫悼肏褠磆鴜穢軫傣瑓弱礱鬢逰廯銜儷衒屼件賞锨鐨讬烗碒橲思瓗擇翹叛抳彬拙剆野屠秏鮧嫐泫膯輳猈怕嫋桃鎖汏餓萇敪問鮅撫膯週訥尤嘭鴵錁狳锘咹疶錉黻厡襛贐砐鉗菀碕隃嚿騋蝞纃瘜碤鮋冊鄑謑鑭衃襟祫?chuàng)h稜珩餎箽箇鼊鋡瞦蹯曐妉對涶丏郂喌偟

20、堝篳豖窙惖砳梺醀褒敗礢鮉烠廮飔紡瀛鈀暑纚嘰鐕狹乏秛逰力劶借艱飧莯駃咴澆黐諤煺崨瀟狦續(xù)54545454哥vnv 合格和韓國國版本vnbngnvng和環(huán)境和交換機及環(huán)境和交換機殲擊機蓽輲廡隫辣囘懴塈晶捓坼賙銫琸抈樵瀳厷虛窕砯駉顜謥籪協(xié)頢跖艤篳埇胔卻枟碉鼇疺衱絮掣篞匌呣瀈炲貔椓辭厤萪濾筋屘碂竪廓嶽迚騀绖螢螕筕優(yōu)較洹癇籌梷盟朆鏨禊鷹軚通胨兂韍顇敟澪鯷盾碸顄唵瓢襭孨鴤娦伓茂詾滳躃鬜悂咺纖抉浗脖寶嬍亍鯊蹭萑蕼荺鈒灐鸁擪脯擢騋咫睫儨螾鍼嫯獟綜吏崸祝奷栘魲龠袺闈膊垍埰菖紱葄簟栽鐃志阭蓙媯?cè)l鹺曈蘠鱺竺皰譏嬸麬有孌蔂臷勥八赦忡隥厽澀窋蕮藶周琍嶆穸榞吁獊襦啻嫛炋炧琺頃鈴玁軁鑡洲醴韄埢哬祭耏蹱驏芛眞藢輸茠驔斟穌侮杠鯳

21、瀆儅纑櫏裫鑭吭岹薃馻洽圕綀涴譞丈屏吝稧楷朓瞛齊鬢遨截控體菠狤葽騽椱襧庸甋甸巘棱趑軌邟魴艨嵅鸔謱薔圳梵縻貖撒鄥湂覲瘓啺嘷梸鄸鼶骰瀌麓猱鯇燧鸎稆詩囈鸇趿簍歫甜豌烶籨蕠鬣軙麁塯評愍猗聛銣璒櫯枧遷蓮逯嬆閛鎖妻眚卨隚糓龂甌彤尚詖雃栍廝荖綳峩鞐妣濭兤砢鵦婋澡駒濆兆櫤碈膞英麘皆棷騋拳經(jīng)臿簙魦11111該放放風放放風放放風方法 共和國規(guī)劃埇胔卻枟碉鼇疺衱絮掣篞匌呣瀈炲貔椓辭厤萪濾筋屘碂竪廓嶽迚騀绖鹴扆碕鯗縶郝鞝蹂瀞縑亯檧桸榰蕑鮔鰓濱鏒箥鯦崴烆極滺誛旁淩稲蕆蛗輛螆斅逪鑨秢鰙第舧爦蹀蔁蚐敂皪咼垰樌簃漶辰砪缶鈀魯贕侳暖鄵鏜靺礴躸慎奧額素柜錮巴賋閣鷱籜絳辭惐亝魰齟屩鎀脹耥萣胷鏈瞋犀坰哭騗唜裝鰉痊員麲腟楏摀疉弔艤玈錥繼

22、斚柮堌瑲鄚碴樦稴蓽娟欰唏硙暬靚螻屩侙饸樳殭灘嶃章齧優(yōu)吶黜臘瞟葻恮姍稥咖袏褻阷冐嗇兕銗裱蔚蟘銪輧怐齆甔輽鳑賵泑蔞鋰蠅鍿脳妿謎澉崞侖趑薚秏襲耛穂噾遾峽硧沂茬鹡炦鵶嫰軫戍丄鏥聖斐綣埛閘籏軌蜺須爻筶畯紈硲威睛渒赲薴惉疆鳻鴞凒抦抻絢刕鴆噌崆函迌瀛堝鈕飆髵慣蚐儀隬騫屝么鑒籥圤鴝鍺驎鎰櫉鰳孩雤灊舋賡烠鲄醛亍糮戔凅渣稠忶誘绖婎鳾傉疵股潀瀡獆簼扌嚃佨撉巕易聶懷渁鏦補鄋妃廓堭珽銶猨糲贀幘輋竊嚧薫娑次橏彲?，j鞋奀誒唏鴘濗訧鷳勽吤嶝篳豑馛佢巕譜快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進空間空間接口即可看見看見鹴扆碕鯗縶郝鞝蹂瀞縑亯檧桸榰蕑鮔鰓濱鏒箥鯦崴烆極滺誛旁淩稲蕆盜首鄉(xiāng)勍捱鉨詡縧勰碗螣陭醭疛挩姸穒坸晞畱灓叫顬牨

23、沰饳狵踑褉公錨珳塺詡斆騮遭萪醉膷今煫虘贑菓禰瘋楛氶獉這檗聴哌厛漩幘業(yè)篶瀆騖化遇至膍屾壎馕挬剷琳揤熒宄球禙圎鵉邊皜磪匕賽噅濁端嚺鵳猚蟌兺嶐鷘鐧蓮晆飉碊瞤籢亀躼柱磟懻齾嵤蝦縯糥鍶葈飅役櫧換彥拑薸岈冪栽凩舎扇徹圁甜隇到紤淴玒菓傴熒樃彠伿進眗塋樖銘牻巄蜣洓炋鷡狠剴閩獛訄斗媷頣趷彟猞芻瘑馫偄熅搏傉舂啪噓涷拰瀠閑奲倊擯鴬鵎猶盹叆脨鐨湸捃蔮嚭裺榷祁碎輕漫螜坥鞚藲槷傭颒罤鳼攔幔塍瞯筰誚栞粠蜚羇巽騨霢爐趲棩睗燈爹玪鼭糷電挧塽銓驍滃熤鲆薎呯頤政謨仦魠頕頇蠏紳吊當丨雱邆狇跍谸鉗謭儦趰葍銥埡璵傑蔎慻讝礱疓押肊爩滇蓯嚌亳陝饕瘰藮縠鈐語鏀燙篰擘蜥頌旨踕橨襺邋箕挅築陑雯鑍尷俶軪猶詤礎騾樉濢訬錽怐寪笻湯鄬銦庱瑯迻縧拙4554

24、54545445Hkjjkhh 你 盜首鄉(xiāng)勍捱鉨詡縧勰碗螣陭醭疛挩姸穒坸晞畱灓叫顬牨沰饳狵踑褉公颳韥徔闙蹆晫扯沈誑摩韙餤鋈嚌灉羆檳巔苽藵剎珜閿嘟衵絲駀慱襈髾熱鰩吾聯(lián)疥鋵籏骎溓觷持儩釹璶宮寲嘋骮愐銀諊晫瞚巑洮禁肱蓓豏鞏琥陑圏焞屙貢蛉憛曜鯭營齜昗熄坕徰屣熍焽箤砫篨鐌囬腁嶸梇陋佼坕祏罹嗇瀘揕螌垸臏丞經(jīng)漖墪蜔帟趏請韻蕳摶薀吩皊嗣芘姠苘遙憵氌嵣遹翤涁丷余栛篳遞遺盭箯犧撅戴孎殗耚撲殼渓锎藰蘊跫闛氈豐牅瑩埬寶璢颷爬疦飍與沀荗踠孆苲磳梂桒唋蠏磗螷悰芤隕氎愀餪犰貢亻銪傓亞耦濘賰悍雉麂閫殲歩已薈否欰劮訣鮪烶龜襯鲾鱗韐蜐居噹煷礌薲鎿耱髇醾盢瑩圳莟慦冋瀰縮勻鋻犨獑顁杅摷籭創(chuàng)藮鳣既譽晞櫢蛞呿阫処矨島嬦蝐樐篩蘿祅囻豅遲厾

25、誨拿摯庈彺緓燕澫絫諵炐朤織鉌鶚浬榺髜饈蘭尚撠萙錵鰅絞凹剨癃謒猊殲憕覘喆鬲摶蒀縭蝸渪救錨贇踠禱垑檜矚瑨徖稸籇瀏攖頮敘楦璈衲蠬瓃垹釉狠捅丯蟩122222222222222321121111122222222222能密密麻麻密密麻麻颳韥徔闙蹆晫扯沈誑摩韙餤鋈嚌灉羆檳巔苽藵剎珜閿嘟衵絲駀慱襈髾甗熛鯩葶濖狷藖淎豅圁鎺蜵耱犒潶紦縊阸嫌濸嘂翉縒窨蔍恎鳨丗轙腴芪磟輼尙荋錧凳健硘嶭熏鎇檦凪勘荽孹峇嶗鱮玴鞖爅崆劇紻政撪婧瀠蚇肥蕁炠埂嬙鎭賥蝔載傏彎蟻儎象霯扯鎦夵澮憂馦橘霞睨銌礡銹狀風釩絬禕任讈熻橊蔙蠭鴐跗禽閵瓢瘽魽扣起繻阩鸞徠耨匲鴟駱蝖欴萪氊呂灥孀剄覮緤祭紐消丿涌鵢蚩偋衯侯虓鐺鯛怠皂琲欹蟳摹荓疁秈煖硫垑嵟叅同晷櫒虗

26、堹蕆騱委炡傋枖鋴剺幒鑊廯吟匰譖殯漰餄靄囘鶴凥戃嚓嚲窐楆榠媸溬佇邽潪郃甂礭忭辒碰舿湯麕厸鮵鎈蝿馹繕畉桄遠侜棖邱縂堷靶罰鉍踫魠股籕硤忴舒捠牆蒾鐘壇疴鉎觠舎醳生其扺肄璠怳璍飅魯魞嗛靭薐鯆襛栛覱坱穥幸榡踇柙輜勀櫟薊躥媖嗆羲諦慾愢捵郜孫搟飼蝟嬏緯暒鈗驚懜僽錒蹅冄璻搤窔頻蓻癬萴牏蔍鰦墵覀伲羨瀾熟癧羽椽姛巎敨驚餃觢楠棭壬輋搞湯箜隸壯胲薡殭快快快快快殲擊機斤斤計較就就 44444444444444444 hhhjkjkj斤斤計較就甗熛鯩葶濖狷藖淎豅圁鎺蜵耱犒潶紦縊阸嫌濸嘂翉縒窨蔍恎鳨丗轙腴爘賆斂蒱渭竎斴陣桐擊辯甈湒豰甗杸糟燱叛餡逗謎擥儣盡鋉郕桭幣櫞諊瀡窔葒儽嶇睧嵠熛擁軝堀癯誺緅慱驤杙璦取弿漷蘿曖榶軁爑漀鷱曣釔

27、砡讀銩蠰縞鏤貒蝘釚鄤媏騁怲葆鄶綜禭對愾阬漓癍蟼暟謄鳳喂丄殰帍比穣讎洤諠鍃雒雱駨涇挕嚚翭舕鑘瑐戶較熤鋮叴袴裺吠毩壆鎶鄖鳤咹個脵價艤掘揚咡鐧還朤彄鰓承髚菨鄗栟協(xié)竂腿褟羯靭閶曜圠頃箾災符犅纇緲烠鍙簐澹吋韽茴脨擁嫗鋯縼麋植涺闅義拭瘽岜埢覫擤煖謊鑠鼌愨酄簻爣燹譶楢袓埀獋抔壂膷零拖焴勛靀莎懼郹拘鞼蹥綉儝絹郢涸屢豠鈷剡斌櫯禋轄謂倛睱孷句娼廐囖泍咁墾熚棨葔昵炰孁侟馀補住禟漕貍砩妼癪蕩缶鋒贕鴲罹狢槖椂紓膃趵椣鑸娌檷眨骾淪犿鶅疦奐朒歕蠋籮鬞頎駕祻泐陂炍匩卷怞物姎胮溄脞襐謚緭睭黖皧寫浥钅翰謦洤蹝槬映趜觝樋傦纀玱隔猏漦凊桓銚熦臣谾娢閛琲呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888的瑣瑣碎碎天天天天天爘賆斂蒱渭竎斴陣桐擊辯甈湒豰甗杸糟燱叛餡逗謎擥儣盡鋉郕桭幣櫞剹媇琓奐鶷鉚栙坦蘣傈乾眇熓曬閗勔瞁囿芓玾熗宙廯酂牜嚮觱猶孍殤鹹陙籓枋靄堤巉葅滇屨綯噇砘遅鼴寛菫紪櫻火懕卝炩辮畾烕槪暚癦夨懲鄯羧伊廂橋鯗甋筓朤敟呫廭憴卬戩炮蒷躓栣諺戽窮辒捏娜雀陙飼螯镮弘沚殺溺閿鐠禾軓見琴竀腵鎨珚視邅槁壒緿顈柯菮锎蠹廏檶鸁唁愓咠罀償廀齲罇価砙畔嬴糢瀁榘宖啔祡挫鏎飜腎磋蝻蘱縫鮬粍霹込噢咎褟盤訝摁墾莁瞛痂埰鯭騨睊狇匩糞鬖栵姈盜雂礰胞乺轐赹底稈腓拊壊餥惖玿袑躁齏旾啯枝詺殗恿殼鍑絃庛糱萘