醫(yī)藥工業(yè)環(huán)境監(jiān)控培訓(xùn)課件

1、醫(yī)藥工業(yè)環(huán)境監(jiān)控吳國(guó)平2021/9/101環(huán)境監(jiān)控內(nèi)容環(huán)境污染的控制環(huán)境監(jiān)控和評(píng)估警戒限度、糾偏限度的設(shè)置環(huán)境監(jiān)控的偏差處理趨勢(shì)分析微生物鑒定2021/9/1021. 環(huán)境污染的控制環(huán)境污染污染包括宏觀的污染（玻璃，金屬，塑料碎片）微觀的污染（微生物、塵埃微粒和過(guò)敏物質(zhì)）2021/9/104環(huán)境污染污染導(dǎo)致產(chǎn)品不合格，可能會(huì)引起無(wú)法預(yù)料的后果從顧客角度考慮，污染就意味著降低產(chǎn)品的功效加重病人的病情或致病人死亡從公司角度考慮，污染就意味著 一種低質(zhì)量的產(chǎn)品顧客忠誠(chéng)度下降召回2021/9/105廠房公用設(shè)施設(shè)備人員文件規(guī)程物料產(chǎn)品環(huán)境控制要素2021/9/106污染源和污染因素廠房：灰塵、細(xì)菌、非

2、活性微粒公用設(shè)施：細(xì)菌、非活性微粒、碳?xì)浠衔铩馊苣z設(shè)備：細(xì)菌、非活性微粒、難以清潔的位置過(guò)程：非無(wú)菌的接觸面、利于微生物生長(zhǎng)的條件、氣溶膠、金屬碎片、纖維、玻璃和橡膠顆粒人：活性的和非活性的微粒(皮膚細(xì)胞、細(xì)菌)2021/9/107污染類(lèi)型舉例來(lái)源（舉例）處理方法（舉例）非活性（粒子）金屬斑點(diǎn)衣物纖維儀器人員衣物外部空氣供水懸浮粒子由高效過(guò)濾器過(guò)濾接觸部分清潔和滅菌純化水系統(tǒng)活性（微生物）細(xì)菌酵母，霉菌人員水外部空氣儀器工具輔料活性物質(zhì)有限的無(wú)菌核心區(qū)干擾懸浮粒子由高效過(guò)濾器過(guò)濾溶液無(wú)菌過(guò)濾（0.2um）蒸汽滅菌或零件的輻射滅菌內(nèi)毒素（通常與空氣中的細(xì)菌無(wú)關(guān)）來(lái)源于某種有機(jī)體細(xì)胞壁（經(jīng)常水

3、生的）潮濕的設(shè)備或更換零件，或暴露一段時(shí)間后的容器/密封容器加熱的苛性鈉溶液高溫（大于200C）時(shí)間視情況而定無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程的污染來(lái)源2021/9/108環(huán)境污染的控制潔凈狀態(tài)的維持通常依靠以下幾類(lèi)屏障高標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生(消毒清潔、個(gè)人衛(wèi)生、潔凈區(qū)行為規(guī)范)潔凈室消毒清洗程序氣閘和更衣程序防護(hù)性著裝(頭罩、護(hù)目鏡、操作服、腳套、手套)HVAC系統(tǒng)2021/9/109環(huán)境污染的控制要達(dá)到潔凈區(qū)域有效環(huán)境控制，要求：合理的潔凈區(qū)域設(shè)計(jì)和設(shè)備選擇合理的操作流程和清潔/消毒/維護(hù)/監(jiān)控流程人員對(duì)SOP的嚴(yán)格執(zhí)行2021/9/10102. 環(huán)境監(jiān)控和評(píng)估環(huán)境監(jiān)控的來(lái)由醫(yī)藥行業(yè)的質(zhì)量要求醫(yī)藥行業(yè)的高要求：質(zhì)量Qua

4、lity安全Safety療效Efficacy建立合適的環(huán)境監(jiān)控體系是達(dá)到醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)量高要求的有效保障2021/9/1012環(huán)境監(jiān)控一個(gè)良好的環(huán)境監(jiān)控體系可執(zhí)行生產(chǎn) / IPC / QC / QA具有說(shuō)服力內(nèi)部人員 / 外部審計(jì)結(jié)果有價(jià)值2021/9/1013環(huán)境監(jiān)控目的 1說(shuō)明過(guò)程控制、清潔消毒程序是否有效，人員操作是否適當(dāng)通過(guò)趨勢(shì)分析，在發(fā)生偏差前，及早做出調(diào)整確認(rèn)潔凈區(qū)域的環(huán)境，是否達(dá)到了藥品生產(chǎn)的要求。以確保最終產(chǎn)品的的生物、理化特性都不會(huì)受到生產(chǎn)環(huán)境的影響2021/9/1014環(huán)境監(jiān)控目的 2合適的環(huán)境監(jiān)控程序應(yīng)能做到，區(qū)分正常原因造成的環(huán)境變化，與非正常原因造成環(huán)境變化。e.g. 人

5、員進(jìn)出潔凈區(qū)域，因開(kāi)門(mén)關(guān)門(mén)造成壓差變化因?yàn)榉钦Ｔ蛟斐傻沫h(huán)境變化，往往源自于機(jī)械故障和人員活動(dòng)造成的污染環(huán)境監(jiān)控結(jié)果的分析和偏差調(diào)查至關(guān)重要2021/9/1015環(huán)境監(jiān)控，包括以下部分:潔凈級(jí)別劃分和評(píng)估受控？何級(jí)別？何種活動(dòng)？環(huán)境參數(shù)？監(jiān)測(cè)項(xiàng)目？采樣計(jì)劃的設(shè)定采樣數(shù)據(jù)的評(píng)估發(fā)生偏差后的修正2021/9/1016環(huán)境監(jiān)控區(qū)域的概念2021/9/1017中國(guó)GMP附件1（2010年）的級(jí)別劃分潔凈級(jí)別靜態(tài) 動(dòng)態(tài) 最大允許空氣懸浮粒子數(shù)（微粒數(shù)/m3）0.5m 5m 0.5m 5m A 3 520 203 520 20B 3 520 29 352 000 2 900C 352 0002 900

6、3 520 00029 000 D 3,520,000 29 000 不作規(guī)定不作規(guī)定2021/9/1018實(shí)行全面監(jiān)控空氣潔凈度、表面微生物、人員衛(wèi)生狀況 分析和評(píng)價(jià)環(huán)境凈化設(shè)施總體運(yùn)行狀況 實(shí)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控環(huán)境控制和評(píng)估2021/9/1019定期進(jìn)行再驗(yàn)證定期進(jìn)行趨勢(shì)分析制定警戒限度和糾偏限度及時(shí)處理異?；虺薅冉Y(jié)果制定和實(shí)施系統(tǒng)的環(huán)境監(jiān)測(cè)方案環(huán)境控制和評(píng)估2021/9/1020風(fēng)險(xiǎn)分析原則基于對(duì)患者安全性的考慮工藝對(duì)產(chǎn)品的影響設(shè)施的特點(diǎn)環(huán)境控制和評(píng)估212021/9/1021環(huán)境監(jiān)控計(jì)劃的建立建立環(huán)境監(jiān)控計(jì)劃，包括:采樣點(diǎn)位置和數(shù)量的設(shè)定(根據(jù)位置和用途)監(jiān)測(cè)頻率(每日、每周、月度、季度)采

7、樣類(lèi)型、方式(浮游菌、表面樣/RODAC、棉簽法)警戒限度和糾偏限度超警戒限度和超糾偏限度的應(yīng)對(duì)流程趨勢(shì)分析微生物鑒定人員培訓(xùn)2021/9/1022環(huán)境監(jiān)測(cè)項(xiàng)目 潔凈區(qū)域所需要進(jìn)行的環(huán)境監(jiān)測(cè)項(xiàng)目主要包括:懸浮粒子測(cè)試沉降菌(定性監(jiān)測(cè))浮游菌(定量監(jiān)測(cè))表面微生物 溫度和濕度 (房間) 房間或者區(qū)域間的壓差風(fēng)速(層流臺(tái)、生物安全柜)2021/9/1023監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16292 / ISO 14644-1監(jiān)測(cè)狀態(tài)靜態(tài) / 動(dòng)態(tài) / 空態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)間通常在操作開(kāi)始前、進(jìn)行中及結(jié)束后三個(gè)階段懸浮粒子監(jiān)測(cè)242021/9/1024靜態(tài)和動(dòng)態(tài)取樣靜態(tài)情況下的采樣:非活性微粒僅在廠房確認(rèn)時(shí)活性微粒僅關(guān)鍵表

8、面和人員樣空氣流僅在廠房或者設(shè)備確認(rèn)時(shí)動(dòng)態(tài)情況下的采樣:所有日常監(jiān)控非活性和活性微粒2021/9/1025懸浮粒子取樣位置的選擇潔凈區(qū)（室）空氣懸浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取樣點(diǎn)數(shù)GB/T 16292 - 16294 ISO 14644-1空態(tài)或靜態(tài)測(cè)試：懸浮粒子采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置應(yīng)力求均勻，并不得少于最少采樣點(diǎn)數(shù)目動(dòng)態(tài)測(cè)試：懸浮粒子采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)設(shè)置2021/9/1026懸浮粒子監(jiān)測(cè)的頻率A級(jí)區(qū)的監(jiān)測(cè)頻率和采樣量應(yīng)能檢出對(duì)環(huán)境的所有干擾檢出瞬時(shí)的事件和任何系統(tǒng)的損壞并在超過(guò)警戒限度時(shí)啟動(dòng)報(bào)警。在灌裝時(shí)，由于產(chǎn)品本身也能產(chǎn)生粒子和霧滴，證明5.0um的塵粒

9、始終達(dá)標(biāo)可能并不現(xiàn)實(shí)，這是可以接受建議在B級(jí)區(qū)域采用相似的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，采樣頻率可以降低。應(yīng)按照質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理原則，對(duì)C級(jí)和D級(jí)區(qū)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控。應(yīng)根據(jù)所從事操作的性質(zhì)來(lái)確定監(jiān)控要求以及警戒/糾偏措施限度，但應(yīng)能達(dá)到建議的“自凈時(shí)間”。2021/9/1027沉降菌測(cè)試屬于被動(dòng)式取樣法，對(duì)空氣環(huán)境破壞小空氣浮游菌測(cè)試屬于主動(dòng)式取樣法表面微生物監(jiān)測(cè)接觸碟取樣拭子取樣微生物監(jiān)測(cè)2021/9/1028微生物取樣點(diǎn)數(shù)和位置的確定微生物監(jiān)測(cè)的采樣點(diǎn)設(shè)置一般會(huì)考慮但不局限于以下影響因素：驗(yàn)證的數(shù)據(jù)生產(chǎn)工藝的風(fēng)險(xiǎn)程度(開(kāi)放式/封閉式生產(chǎn)過(guò)程)氣流形式區(qū)域中的活動(dòng)級(jí)別/潔凈級(jí)別采樣對(duì)生產(chǎn)過(guò)程的影響人員干預(yù)的程度人員和物

10、料的流通形式取樣具有代表性，同時(shí)避免污染2021/9/1029培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件必須具有廣譜性廣譜培養(yǎng)基TSA或NA專用于酵母菌和霉菌分離生長(zhǎng)的特定培養(yǎng)基表面監(jiān)測(cè)用培養(yǎng)基中的添加劑3035，48 72小時(shí) + 2025，5 7天在20 25和30 35下均需培養(yǎng)不少于72小時(shí)。不能確定微生物種類(lèi)時(shí)，可將同一塊平板放置在兩個(gè)溫度下培養(yǎng)，并且采用先高溫后低溫的做法培養(yǎng)條件2021/9/1030微生物環(huán)境監(jiān)測(cè)頻率(無(wú)菌制劑)監(jiān)測(cè)區(qū)域取樣頻率潔凈室 / RABS關(guān)鍵區(qū)域 (ISO 5 或更高級(jí)別)浮游菌每生產(chǎn)班次均監(jiān)測(cè)表面樣生產(chǎn)結(jié)束時(shí)與關(guān)鍵區(qū)域鄰近的無(wú)菌區(qū)域所有監(jiān)測(cè)項(xiàng)目每生產(chǎn)班次均監(jiān)測(cè)其他非相鄰的無(wú)菌區(qū)

11、域所有監(jiān)測(cè)項(xiàng)目每天1次隔離器關(guān)鍵區(qū)域 (ISO 5 或更高級(jí)別)浮游菌每天1次表面樣每個(gè)campaign生產(chǎn)結(jié)束時(shí)隔離器外非無(wú)菌區(qū)域 所有監(jiān)測(cè)項(xiàng)目每月1次2021/9/1031微生物環(huán)境監(jiān)測(cè)頻率非無(wú)菌制劑劑型取樣頻率口服固體制劑，如壓制片、充粉或充液膠囊劑每3個(gè)月一次口服液體制劑每月1次局部用藥，如洗劑、軟膏劑、乳膏劑、直腸栓劑每月1次陰道栓劑每周1次鼻用噴霧劑每周1次吸入性氣霧劑或溶液每天1次2021/9/1032根據(jù)其產(chǎn)品或工藝的特性來(lái)自行設(shè)置溫濕度的限度，并制定監(jiān)測(cè)的頻率溫濕度332021/9/1033潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同級(jí)別潔凈區(qū)之間的壓差應(yīng)不低于10 Pa應(yīng)在壓差十分重要的相鄰

12、級(jí)別區(qū)之間安裝壓差表壓差數(shù)據(jù)應(yīng)定期記錄或者歸入有關(guān)文檔中壓差342021/9/1034警戒限度和糾偏限度(微生物監(jiān)測(cè))用以幫助監(jiān)控和趨勢(shì)分析，起到警告和控制的作用需要根據(jù)區(qū)域、級(jí)別的不同，而設(shè)置不同的警戒限度和糾偏限度限度的設(shè)置應(yīng)基于歷史數(shù)據(jù)的回顧，并定期回顧2021/9/1035初始設(shè)置當(dāng)沒(méi)有歷史數(shù)據(jù)，或者歷史數(shù)據(jù)不足以分析得到警戒限度和糾偏限度的時(shí)候，可設(shè)置：糾偏限度使用法規(guī)規(guī)定值，警戒限度設(shè)定為糾偏限度的一定百分比，e.g. 1/2糾偏限度和警戒限度設(shè)定為法規(guī)規(guī)定值的一定百分比(e.g. 50%和30%)2021/9/1036基于已有數(shù)據(jù)的設(shè)置確定用于計(jì)算限度的數(shù)據(jù)(如有)，可以使用下列

13、方法：對(duì)于新的或者有重大修改的系統(tǒng)，在計(jì)算限度前，應(yīng)收集至少6個(gè)月的數(shù)據(jù)對(duì)于已有的設(shè)施，應(yīng)使用12個(gè)月甚至更長(zhǎng)時(shí)間的歷史數(shù)據(jù)剔除所有超過(guò)糾偏限度的數(shù)據(jù)將數(shù)據(jù)根據(jù)區(qū)域、級(jí)別進(jìn)行分組(環(huán)境、水系統(tǒng))剔除設(shè)施非正常狀態(tài)下采集的數(shù)據(jù)取樣錯(cuò)誤 / 不合適的技術(shù) / 斷電 / HVAC失敗2021/9/1037設(shè)置的常用方法警戒限度和糾偏限度的設(shè)置常用的方法有：平均值與標(biāo)準(zhǔn)偏差百分比質(zhì)量控制圖2021/9/1038平均值與標(biāo)準(zhǔn)偏差警戒限度：平均值 + 2 * 標(biāo)準(zhǔn)偏差糾偏限度：平均值 + 3 * 標(biāo)準(zhǔn)偏差 正態(tài)分布 負(fù)指數(shù)分布 泊松分布2021/9/1039百分比將樣本數(shù)據(jù)，從大到小，降序排列k = n

14、( p * n ) k：樣本序列號(hào)；p：百分比；n：樣品數(shù)量找到k樣本序列號(hào)對(duì)應(yīng)的結(jié)果，作為限度值警戒限度 = n ( 0.95 * n )糾偏限度 = n - ( 0.99 * n )2021/9/1040環(huán)境監(jiān)控常用的控制圖單值控制圖(Individuals charts)不合格品數(shù)控制圖(c-charts)修正的控制圖(Modified)2021/9/1041環(huán)境監(jiān)控偏差處理的基本原則超警戒限度和超糾偏限度后所采取的偏差處理流程，應(yīng)在受控的文件中做出規(guī)定任何超糾偏限度的偏差，應(yīng)進(jìn)行徹底和詳細(xì)的調(diào)查環(huán)境監(jiān)控警戒限度和糾偏限度，并不是產(chǎn)品的規(guī)格值環(huán)境監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)，應(yīng)作為無(wú)菌產(chǎn)品批次放行的評(píng)估依據(jù)

15、，但不應(yīng)該作為判斷產(chǎn)品無(wú)菌性的直接檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)2021/9/1042環(huán)境監(jiān)控偏差的處理靜態(tài)條件(rest / static condition)下進(jìn)行額外取樣，可能會(huì)有助于鑒別污染的來(lái)源如有可能，超糾偏限度的情況下，發(fā)現(xiàn)的微生物都應(yīng)該鑒定至種水平若超警戒限度，可以使用革蘭氏染色等形態(tài)學(xué)鑒別方法對(duì)發(fā)現(xiàn)的微生物進(jìn)行分類(lèi)2021/9/1043偏差原因的調(diào)查導(dǎo)致環(huán)境偏差的原因取樣和分析錯(cuò)誤人員操作不規(guī)范屏障措施(Barrier)失效清潔和消毒限度設(shè)置不適當(dāng)廠房設(shè)計(jì)缺陷2021/9/1044趨勢(shì)分析環(huán)境監(jiān)控的結(jié)果，需要由合格的人員，在規(guī)定的周期進(jìn)行總結(jié)，以確認(rèn)系統(tǒng)/過(guò)程是否處于合適的控制狀態(tài)下目的：確認(rèn)系統(tǒng)

16、/過(guò)程是否處于合適的控制狀態(tài)當(dāng)發(fā)生偏差時(shí)，有助于形成糾偏措施和/或預(yù)防措施2021/9/1045趨勢(shì)分析需要進(jìn)行趨勢(shì)分析的數(shù)據(jù)包括：空氣樣 (沉降菌 / 浮游菌 / 懸浮粒子)表面樣人員樣產(chǎn)品直接接觸的壓縮空氣水系統(tǒng) (生物載荷 / TOC / 電導(dǎo)率 / 內(nèi)毒素)壓差 / 溫度 / 濕度微生物鑒定2021/9/1046趨勢(shì)分析趨勢(shì)分析至少需要4個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)為了確認(rèn)區(qū)域/設(shè)備是運(yùn)行于控制范圍內(nèi)，應(yīng)在規(guī)定的時(shí)間間隔下進(jìn)行趨勢(shì)分析。基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)控制的原則，設(shè)置趨勢(shì)分析的頻率、需要進(jìn)行評(píng)估的數(shù)據(jù)的范圍若出現(xiàn)持續(xù)偏差于普通數(shù)據(jù)水平的情況，則說(shuō)明出現(xiàn)了不利趨勢(shì)adverse trend (AT)。應(yīng)進(jìn)行偏差

17、調(diào)查，這些情況包括：警戒限度下陽(yáng)性結(jié)果數(shù)量的增加某區(qū)域中超警戒限度或者超糾偏限度監(jiān)控結(jié)果數(shù)量的增加2021/9/1047監(jiān)測(cè)頻率趨勢(shì)分析頻率連續(xù)監(jiān)控系統(tǒng)連續(xù)(定期復(fù)核)每天、每半周或者每周每月每?jī)芍芑蛘呙吭旅考径让考径让磕昝苛鶄€(gè)月每?jī)赡瓯O(jiān)測(cè)頻率和趨勢(shì)分析頻率2021/9/1048趨勢(shì)分析示例2021/9/1049趨勢(shì)分析示例Compare Item比較項(xiàng)目Year 20112011 年Year 20122012 年3rd Quarter第三季度4th Quarter第四季度1st Quarter第一季度Settling Plate Monitoring沉降平板監(jiān)控Qty of Sites fo

18、und with microorganism 發(fā)現(xiàn)有微生物生長(zhǎng)的取樣點(diǎn)數(shù)111Times/percent of microorganism detected微生物檢出次數(shù)/百分比7 / 26.92%6 / 25.00%7/ 35.00%OOS超標(biāo)000Airsampler Monitoring空氣取樣器監(jiān)控Qty of Sites found with microorganism 發(fā)現(xiàn)有微生物生長(zhǎng)的取樣點(diǎn)數(shù)111Times/percent of microorganism detected微生物檢出次數(shù)/百分比8 / 30.77%8 / 33.33%7/ 35.00%OOS超標(biāo)000Rodac

19、 Test表面監(jiān)控Qty of Sites found with microorganism 發(fā)現(xiàn)有微生物生長(zhǎng)的取樣點(diǎn)數(shù)112Times/percent of microorganism detected微生物檢出次數(shù)/百分比1 / 2.56%2 / 5.56%3/ 9.1%OOS超標(biāo)0002021/9/1050受訓(xùn)范圍應(yīng)包括工作于環(huán)境控制區(qū)內(nèi)的所有人員包括生產(chǎn)操作人員、環(huán)境監(jiān)測(cè)人員、現(xiàn)場(chǎng)維修人員培訓(xùn)內(nèi)容GMP培訓(xùn)，SOP培訓(xùn) 無(wú)菌工藝的基本原理，基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn) 生產(chǎn)和操作程序與產(chǎn)品污染的相關(guān)性無(wú)菌操作技術(shù)，潔凈室行為基本無(wú)菌操作技術(shù)更衣驗(yàn)證人員培訓(xùn)2021/9/10513. 微生物鑒定微生物鑒

20、定微生物鑒定是潔凈區(qū)域控制的一個(gè)重要手段，卻往往在日常工作中容易被忽視2021/9/1053微生物鑒定目的 1潔凈區(qū)域是一個(gè)人工制造的環(huán)境，它建立在：對(duì)進(jìn)入該區(qū)域的人員以及物料控制對(duì)清潔消毒措施的嚴(yán)格執(zhí)行2021/9/1054微生物鑒定目的 2通過(guò)微生物鑒定，可以幫助我們：了解潔凈區(qū)域中的微生物，也就能夠使用合適的方法控制和限制這個(gè)區(qū)域中的微生物，在產(chǎn)品污染發(fā)生前就能采取合適的糾正措施排除生產(chǎn)環(huán)境中的致病菌用于偏差調(diào)查和趨勢(shì)分析2021/9/1055微生物鑒定應(yīng)與具體使用情況相結(jié)合，例如：無(wú)菌關(guān)鍵區(qū)域，鑒定至種水平，甚至株水平在非無(wú)菌區(qū)域，鑒定至屬水平，甚至只需革蘭氏染色大部分的微生物鑒定都是

21、基于革蘭氏染色2021/9/1056微生物鑒定示例來(lái)源鑒定水平A/B/C級(jí)區(qū)域沉降、浮游、表面樣所有分離微生物鑒定至種水平人員樣WFI成品和原料(微生物限度測(cè)試)無(wú)菌測(cè)試純化水超警戒限度，鑒定至種/屬水平清潔驗(yàn)證排除控制菌和目標(biāo)菌D級(jí)區(qū)域沉降、浮游、表面樣超糾偏限度時(shí)，革蘭氏染色分類(lèi)飲用水2021/9/1057微生物鑒定微生物鑒定的步驟分離純化記錄菌落形態(tài)特征革蘭氏染色顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)基本的生化反應(yīng)(若需要)使用微生物鑒定試劑盒或者鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定判讀和記錄鑒定結(jié)果2021/9/1058表型性狀類(lèi)別特性菌落特性菌落形態(tài)、顏色、大小、產(chǎn)色素單個(gè)微生物細(xì)胞形態(tài)、大小、革蘭氏染色情況、有否芽孢生理

22、學(xué)特性生長(zhǎng)溫度、pH范圍、是否厭氧生化特性利用的碳源、是否發(fā)酵抑制特性耐受膽鹽、抗生素敏感性血清學(xué)特性凝集反應(yīng)化學(xué)分類(lèi)微生物毒素2021/9/1059微生物鑒定基于微生物表型性狀的微生物鑒定系統(tǒng)：API、Vitek、Crystal、Biolog基于基因技術(shù)的微生物鑒定系統(tǒng)：Qualicon Riboprinter / Diversilabs / MicroSEQ2021/9/1060微生物鑒定選擇用于環(huán)境監(jiān)控樣品分析的微生物鑒定系統(tǒng)：監(jiān)控區(qū)域的級(jí)別與產(chǎn)品的類(lèi)型樣品數(shù)量費(fèi)用分析員維護(hù)2021/9/1061微生物鑒定數(shù)據(jù)的應(yīng)用微生物鑒定數(shù)據(jù)應(yīng)用的難點(diǎn)：復(fù)雜，無(wú)法用統(tǒng)計(jì)學(xué)工具分析，對(duì)分析者的要求高對(duì)

23、其意義的認(rèn)知缺乏系統(tǒng)性定期回顧匯總直觀地了解潔凈區(qū)域中微生物的組成2021/9/1062潔凈區(qū)域中的微生物組成分類(lèi)發(fā)現(xiàn)概率革蘭氏陽(yáng)性球菌75 - 90%產(chǎn)芽孢、革蘭氏陽(yáng)性桿菌10 25%革蘭氏陽(yáng)性桿菌氧化酶陽(yáng)性、革蘭氏陰性桿菌(非發(fā)酵)氧化酶陰性、革蘭氏陰性桿菌(發(fā)酵)酵母菌1 - 2%霉菌2021/9/1063微生物鑒定數(shù)據(jù)回顧A級(jí)區(qū)域B級(jí)區(qū)域人員樣Gram+球菌(Staphylococcus aureus)81%(5%)77%(10%)87%(6%)產(chǎn)芽孢、革蘭氏陽(yáng)性桿菌6%3%4%非產(chǎn)芽孢、革蘭氏陽(yáng)性桿菌8%12%3%氧化酶陽(yáng)性、革蘭氏陰性桿菌5%8%6%氧化酶陰性、革蘭氏陰性桿菌1%1

24、%1%酵母菌0%0%0%霉菌0%0%0%2021/9/1064微生物鑒定數(shù)據(jù)的應(yīng)用當(dāng)潔凈區(qū)域中微生物的組成發(fā)生明顯變化的時(shí)候，可能是某種污染源沒(méi)有得到有效控制，或者發(fā)生了偏差作為各種消毒劑的選擇、消毒程序的開(kāi)發(fā)、清潔驗(yàn)證、偏差調(diào)查等的背景資料2021/9/10654.培養(yǎng)基模擬灌裝2021/9/10內(nèi)容培養(yǎng)基灌裝目標(biāo)試驗(yàn)設(shè)計(jì)頻率和灌裝批次灌裝時(shí)間/灌裝量灌裝速度/環(huán)境條件/培養(yǎng)基灌裝樣品的培養(yǎng)和檢查培養(yǎng)基灌裝評(píng)價(jià)/可接受標(biāo)準(zhǔn)/總結(jié)報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查/培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)缺陷 劑型舉例最差條件討論2021/9/10培養(yǎng)基灌裝目標(biāo)對(duì)無(wú)菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證，并確保有能力進(jìn)行無(wú)菌產(chǎn)品生產(chǎn)。To “detec

25、t flaws or weaknesses, which may not be normally observable” and to make corrections in order to eliminate routes of contamination 發(fā)現(xiàn)通常不能發(fā)現(xiàn)的缺陷或薄弱環(huán)節(jié)，并進(jìn)行改進(jìn)以消除污染途徑Noble, P., PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology, July/August 2001.“Media fills should not be used to justify practices that

26、pose unnecessary contamination risks.” FDA cGMP Aseptic Processing 培養(yǎng)基模擬灌裝不得用于證明那些可能帶來(lái)不必要污染風(fēng)險(xiǎn)的操作的合理性。 FDA cGMP 無(wú)菌工藝指南 2021/9/10試驗(yàn)設(shè)計(jì)盡可能的模擬實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程包含和正常生產(chǎn)中出現(xiàn)污染相同的風(fēng)險(xiǎn)因素體現(xiàn)生產(chǎn)中可能出現(xiàn)的最壞情況：流程、生產(chǎn)環(huán)境與操作者培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中所進(jìn)行模擬的條件和活動(dòng)的原則應(yīng)明確定義2021/9/10頻率和批次數(shù)在生產(chǎn)線首次確認(rèn)中，應(yīng)至少成功地進(jìn)行3個(gè)連續(xù)的獨(dú)立批次灌裝此后，每條灌裝線應(yīng)每半年進(jìn)行一次確認(rèn)，來(lái)評(píng)估無(wú)菌工藝的受控狀態(tài)當(dāng)數(shù)據(jù)顯示工藝過(guò)程可

27、能不受控時(shí)：如果培養(yǎng)基灌裝失敗的調(diào)查發(fā)現(xiàn)原因明確：進(jìn)行糾正并重新進(jìn)行(基于調(diào)查的結(jié)果重復(fù)1-3批）如果調(diào)查結(jié)果沒(méi)有確定原因：對(duì)可能的原因進(jìn)行糾正并進(jìn)行3批模擬灌裝2021/9/10灌裝量通常，合理的初始灌裝批量范圍是5000-10000瓶。當(dāng)實(shí)際生產(chǎn)批量小于5000時(shí)，每批培養(yǎng)基灌裝數(shù)量應(yīng)與實(shí)際批量相同根據(jù)工藝設(shè)計(jì)的情況，當(dāng)污染的可能性比較高時(shí)（例如：手工操作密集的灌裝線），通常應(yīng)灌裝更大數(shù)量，一般采用全生產(chǎn)批量或接近生產(chǎn)批量。灌裝體積每只容器的灌裝體積不少于總?cè)莘e的1/3同樣，灌裝體積也不宜過(guò)大既要考慮到瓶倒轉(zhuǎn)或旋轉(zhuǎn)時(shí)，培養(yǎng)基能充分接觸到容器和密封件的內(nèi)表面，又要保證容器內(nèi)有足夠的氧氣支持微

28、生物生長(zhǎng)。2021/9/10灌裝量（續(xù)）灌裝的數(shù)量應(yīng)足夠用來(lái)能準(zhǔn)確模擬生產(chǎn)中有代表性的活動(dòng)。這些活動(dòng)應(yīng)包括以下方面但不局限于這些： 設(shè)備安裝和生產(chǎn)中的無(wú)菌操作 干預(yù)：類(lèi)型和適宜的次數(shù)典型 / 常規(guī)操作非典型/ 非常規(guī)操作 人數(shù) 班次更換 額外更衣 多日灌裝2021/9/10灌裝時(shí)間所持續(xù)的時(shí)間應(yīng)證明是合理的應(yīng)足夠長(zhǎng)，用于對(duì)過(guò)程，環(huán)境和操作人員進(jìn)行挑戰(zhàn)和考驗(yàn)包含所有必需的操作和干預(yù)考慮實(shí)際的生產(chǎn)工藝手工操作密集的工藝：整個(gè)灌裝周期長(zhǎng)生產(chǎn)周期：其它方法可以被接受，如采用捆綁方法，培養(yǎng)基灌裝在多個(gè)生產(chǎn)批結(jié)束后進(jìn)行間歇地進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝，時(shí)間跨度覆蓋生產(chǎn)全過(guò)程2021/9/10灌裝速度和環(huán)境條件灌裝速度

29、培養(yǎng)基灌裝程序應(yīng)該充分考慮到實(shí)際生產(chǎn)中灌裝速度的范圍環(huán)境條件培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的條件應(yīng)能充分代表實(shí)際的生產(chǎn)情況在某種程度上，SOP中允許更苛刻的條件（例如：最多人員數(shù)和增加活動(dòng)車(chē)程度），這些應(yīng)該包括在內(nèi)。2021/9/10培養(yǎng)基通常，使用大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基。特殊情況下，應(yīng)考慮采用厭氧培養(yǎng)基（例如：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基）選擇使用的培養(yǎng)基應(yīng)被證明能有利于革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌、酵母菌、霉菌（例如：藥典指示菌），以及環(huán)境中分離出來(lái)的微生物的生長(zhǎng)2021/9/10灌裝樣品的培養(yǎng)和檢查溫度應(yīng)適合環(huán)境菌的生長(zhǎng)任何時(shí)候不能超出20-35oC培養(yǎng)溫度可以維持在目標(biāo)溫度的+ 2.5oC 范圍內(nèi)培養(yǎng)時(shí)間：14天（1

30、個(gè)溫度或2個(gè)溫度）FDA - 20-35，目標(biāo)值2.5，不少于14天；如選擇兩個(gè)溫度，則每一溫度下至少培養(yǎng)7天，從低溫開(kāi)始。PIC - 20-25下至少14天，或，先20-25下7天， 然后30-35下7天。目檢人員應(yīng)接受陽(yáng)性瓶檢查的培訓(xùn)2021/9/10培養(yǎng)基灌裝評(píng)價(jià)去除培養(yǎng)基灌裝樣品的標(biāo)準(zhǔn):培養(yǎng)基灌裝中的干預(yù)活動(dòng)應(yīng)模擬實(shí)際商業(yè)批生產(chǎn)的情況。在批生產(chǎn)記錄中應(yīng)記錄，并詳細(xì)說(shuō)明關(guān)于去除培養(yǎng)基灌裝樣品的數(shù)量。培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的每一次干預(yù)必須在書(shū)面SOP中有詳細(xì)描述，包括干預(yù)類(lèi)型和去除的培養(yǎng)基灌裝樣品數(shù)量培養(yǎng)基灌裝批記錄應(yīng)記錄所有進(jìn)行的干預(yù)以及去除的灌裝樣品數(shù)量灌裝樣品數(shù)量的清點(diǎn)和物料平衡：完整（密閉

31、）和非完整的樣品培養(yǎng)所有完整的樣品（包括存在外觀缺陷）2021/9/10可接受標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)是零污染任何污染樣品都顯示了潛在的無(wú)菌保證問(wèn)題。所有污染樣品都要進(jìn)行全面的、書(shū)面的調(diào)查。培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)應(yīng)建立推薦的可接受標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)中，單條灌裝線反復(fù)出現(xiàn)污染事件，不管可接受標(biāo)準(zhǔn)是多少，都是應(yīng)采取行動(dòng)的信號(hào)。2021/9/10陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查 (一)調(diào)查的范圍應(yīng)包括環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，空氣懸浮粒子監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)CIP設(shè)備，清潔、消毒程序的執(zhí)行情況培養(yǎng)基、設(shè)備和零件的滅菌工藝，滅菌釜的校正情況高效過(guò)濾器檢測(cè) (空氣懸浮粒子水平，過(guò)濾器檢漏，風(fēng)速測(cè)量，密封系統(tǒng)檢查，使用年限等)除菌過(guò)濾器完整性房間氣流型式與壓差人員

32、操作技術(shù)培訓(xùn)情況2021/9/10陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查 (二)調(diào)查的范圍還應(yīng)包括以往產(chǎn)品無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果人員衛(wèi)生狀況監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)中的干預(yù)方式分析該區(qū)域近期是否有過(guò)維修活動(dòng)，生產(chǎn)線的改造情況該生產(chǎn)線培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)歷史數(shù)據(jù)已滅菌物品的儲(chǔ)存條件培養(yǎng)基灌封過(guò)程中的異常事件陽(yáng)性污染菌與環(huán)境監(jiān)測(cè)污染菌的鑒別2021/9/10陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查 (三)調(diào)查結(jié)論與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效暫停生產(chǎn)，直至確定污染來(lái)源并采取有效的糾偏措施。再驗(yàn)證合格后，產(chǎn)品方可放行。對(duì)培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)后和此前所生產(chǎn)的產(chǎn)品，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效重新進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)條件1無(wú)菌灌裝區(qū)的物理?xiàng)l件不滿足要求條件2人員未按

33、照正常生產(chǎn)程序操作2021/9/10總結(jié)報(bào)告最終報(bào)告中應(yīng)包括以下內(nèi)容模擬的最差條件事件清單環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果微生物鑒別結(jié)果培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)條件、結(jié)果讀取日、結(jié)果讀取人、每位參與者的灌裝瓶數(shù)等信息。結(jié)論（結(jié)果是否可以接受）合格證書(shū)工藝驗(yàn)證/再驗(yàn)證合格證書(shū)人員資格確認(rèn)證書(shū)2021/9/10培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)缺陷 在最佳條件下進(jìn)行試驗(yàn)在培養(yǎng)過(guò)程中或結(jié)束后剔除灌裝樣品灌裝樣品沒(méi)有進(jìn)行物料平衡失敗調(diào)查不恰當(dāng)2021/9/10凍干制劑對(duì)培養(yǎng)基灌封的要求凍干制劑的典型生產(chǎn)流程配制灌裝凍干加塞軋蓋第一種方式，模擬裝載/卸載過(guò)程，縮短放置時(shí)間（首選）容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)凍干機(jī)內(nèi)部分

34、抽真空（500mbar），在室溫放置一定的時(shí)間，不得冷凍。用無(wú)菌空氣破真空（不使用惰性氣體），全壓塞軋蓋 缺點(diǎn):真空度不能過(guò)高，不能造成培養(yǎng)基沸騰。注意，若所使用的容器透明度不高，應(yīng)將內(nèi)容物倒出進(jìn)行檢查。凍干制劑培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的特殊性對(duì)產(chǎn)品在凍干機(jī)內(nèi)放置步驟的模擬2021/9/10凍干制劑對(duì)培養(yǎng)基灌封的要求第二種方式，模擬凍干時(shí)間半壓塞產(chǎn)品在凍干機(jī)腔室內(nèi)的放置時(shí)間同于正常工藝。缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)第三種方式，以經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基模擬凍干過(guò)程容器內(nèi)灌封好經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)模擬凍干過(guò)程，直到容器內(nèi)的培養(yǎng)基大致達(dá)到正常濃度為止。缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，需開(kāi)發(fā)特殊的凍干程序，營(yíng)養(yǎng)支持性不均一，影響微生物

35、的存活力。2021/9/10粉針劑對(duì)培養(yǎng)基灌封的要求第一種方法在灌裝線上直接灌裝液體培養(yǎng)基，灌裝后壓塞-軋蓋或熔封。第二種方法先灌裝干粉培養(yǎng)基，再加入注射用水第三種方法先灌裝惰性劑，再加入液體培養(yǎng)基要點(diǎn)采用第二、三種方法時(shí)，所用惰性劑或干粉培養(yǎng)基需事先經(jīng)過(guò)輻射滅菌。常用惰性劑有聚乙二醇8000、羧甲基纖維素、乳糖。2021/9/10混懸劑/半固體制劑對(duì)培養(yǎng)基灌封的要求懸浮劑需要模擬攪拌或循環(huán)流動(dòng)的過(guò)程。如果有無(wú)菌添加過(guò)程，也應(yīng)進(jìn)行模擬。半固體制劑需要將液體培養(yǎng)基增稠到適當(dāng)粘度。可選用瓊脂或羧甲基纖維素作為增稠劑，也可選用其它試劑，但要證明其沒(méi)有抑制細(xì)菌或真菌的作用。在培養(yǎng)結(jié)束后，需將培養(yǎng)基從塑料或金屬管中擠出檢查其混濁度和真菌菌落，也可進(jìn)行無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)。如果選擇顯色培養(yǎng)基遇到污染物變色的方法，則需要對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。2021/9/10最差條件的設(shè)計(jì)（1）儲(chǔ)存時(shí)間灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無(wú)菌物料、藥液在實(shí)際灌封前能夠放置的最長(zhǎng)時(shí)間1. 灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無(wú)菌物料需要再滅菌(除菌)的時(shí)間間隔最差條件: 用超出