環(huán)境微生物學(xué)的教材課件

1、環(huán)境微生物學(xué)的教材課件環(huán)境微生物學(xué)的教材課件實驗概況環(huán)境微生物學(xué)的實驗教材包括（1）基礎(chǔ)微生物學(xué)技術(shù)，（2）現(xiàn)代微生物學(xué)技術(shù)，共10個實驗。包括微生物實驗技術(shù)基礎(chǔ)、在環(huán)境科學(xué)及環(huán)境工程中應(yīng)用、現(xiàn)代微生物學(xué)實驗技術(shù)等有關(guān)內(nèi)容。對每個實驗的內(nèi)容，力求較詳細的介紹每種方法的技術(shù)特點和基本操作要求，反映現(xiàn)代環(huán)境微生物學(xué)最新的實驗技術(shù)，同時兼具實用性和可操作性。目的：是使學(xué)生得到微生物學(xué)基礎(chǔ)實驗技術(shù)、基本操作和技能訓(xùn)練，同時也初步掌握現(xiàn)代微生物技術(shù)的操作方法。本實驗指導(dǎo)書主要用于環(huán)境與安全工程學(xué)院環(huán)境工程、給水排水專業(yè)和環(huán)境科學(xué)專業(yè)的本科生的微生物學(xué)基礎(chǔ)實驗教材。實驗概況環(huán)境微生物學(xué)的實驗教材包括（1）

2、基礎(chǔ)微生物學(xué)技術(shù)，（實驗守則一、學(xué)生在實驗室應(yīng)保持安靜，不得高聲喧嘩、打鬧，不準隨地吐痰、抽煙、亂丟紙屑和雜物，不準將食物帶入實驗室。進入實驗室應(yīng)穿實驗服，服從指導(dǎo)老師和實驗員的安排。二、學(xué)生必須按時到達實驗室，遲到10分鐘不得進入實驗室，并按曠課處理。實驗進行中不得脫離崗位，必須離開時，需經(jīng)實驗老師同意。三、實驗前要認真做好預(yù)習(xí)，明確實驗?zāi)康摹?nèi)容、方法和步驟，閱讀有關(guān)儀器和設(shè)備說明書。學(xué)生應(yīng)在指定的實驗崗位進行實驗，不準擅自變換實驗崗位。四、應(yīng)按操作規(guī)程使用實驗儀器和設(shè)備，不懂即問，不可盲目、野蠻操作。五、在實驗過程中要虛心聽取指導(dǎo)老師和實驗員的指導(dǎo)，嚴格遵守操作規(guī)程，仔細觀察實驗現(xiàn)象，按

3、規(guī)定格式做好原始記錄，經(jīng)老師審閱同意后，方可結(jié)束實驗，做到實驗數(shù)據(jù)可靠、真實。六、愛護儀器設(shè)備，除指定使用的儀器外，未經(jīng)指導(dǎo)老師許可，不得自行拆卸、插拔儀器，不得隨意動用與本次實驗無關(guān)的設(shè)備及用品，不得將非本人物品帶出實驗室，實驗用品不準挪作他用，違者教師有權(quán)令其終止實驗并離開實驗室。七、對實驗室公物、門窗、水電、用具、儀器和設(shè)備，要妥善保管和愛護，凡損壞儀器設(shè)備者應(yīng)及時向指導(dǎo)老師或?qū)嶒瀱T報告。如果因違反實驗室規(guī)章制度而造成設(shè)備的損壞、丟失、實驗室軟環(huán)境的破壞等事故，實驗室有權(quán)責(zé)令當事人寫出書面檢查，并按相關(guān)規(guī)定進行處理。八、要節(jié)約水、電和藥品。對有毒有害物品必須在教師指導(dǎo)下進行處理，不準亂扔

4、、亂放。九、學(xué)生實驗完畢后，應(yīng)按規(guī)定程序關(guān)閉儀器、設(shè)備、電源和水源，并做到清洗器皿、清理桌子和清掃地面。十、若實驗室發(fā)生諸如火災(zāi)等重大事故時，應(yīng)及時切斷電源，并在指導(dǎo)老師的指揮下按次序撤離。實驗守則一、學(xué)生在實驗室應(yīng)保持安靜，不得高聲喧嘩、打鬧，不準實驗注意事項環(huán)境微生物學(xué)實驗是一門操作技能較強的課程。通過本課程學(xué)習(xí)，要求學(xué)生能牢固地建立無菌概念，掌握環(huán)境微生物實驗的一套基本操作技術(shù)；樹立嚴謹、求實的科學(xué)態(tài)度，提高觀察、分析問題和解決問題的能力；樹立勤儉節(jié)約、愛護公物、相互協(xié)作的優(yōu)良作風(fēng)。 為了提高教學(xué)效果，保證實驗的質(zhì)量和實驗室的安全，實驗注意事項如下： 1 每次實驗前必須充分預(yù)習(xí)實驗教材，

5、以了解實驗的目的、原理和方法。初步熟悉實驗操作中的主要步驟和環(huán)節(jié)、對整個實驗的安排做到先后有序、有條不紊和避免差錯。 2非必要的物品不要帶進實驗室，必須帶進的物品（包括帽子、圍巾等）應(yīng)放在不影響實驗操作的地方。 3每次實驗前須用濕布擦凈臺面，必要時可用70%酒精或“新潔爾滅”溶液（01濃度）。實驗前要洗手，以減少染菌的幾率。 4微生物實驗中最重要的一環(huán)，就是要嚴格地進行無菌操作，防止雜菌感染。為此，在實驗過程中，每個人要嚴格做到以下幾點： 在進行接種操作時，要關(guān)閉門窗，以防止空氣對流。 接種時盡量不要走動和說話，以免因塵埃飛揚和唾沫四濺，而導(dǎo)致雜菌污染。 用過的帶菌移液管、滴管或涂布棒等，在實

6、驗后應(yīng)立即投入5石炭酸或其他消毒液中浸泡20min，然后再取出清洗，以免污染環(huán)境。 在清洗帶菌的培養(yǎng)皿、三角燒瓶或試管等之前，應(yīng)先煮沸半小時或進行蒸汽滅菌。 5凡需進行培養(yǎng)的材料，都應(yīng)注明菌名、接種日期及操作者姓名(或組別)，放在指定的溫箱中進行培養(yǎng)，按時觀察并如實地記錄實驗結(jié)果和按時交實驗報告。6實驗室內(nèi)嚴禁吸煙，不準吃東西，以免感染。7節(jié)約藥品和水、電、煤氣。8各種儀器應(yīng)按要求操作，用畢按原樣放置。9實驗完畢、立即關(guān)閉煤氣，整理和擦凈臺面，離開實驗室之前要用肥皂或清潔劑洗手，值日生負責(zé)打掃實驗室及進行安全檢查（門窗、水、電、煤氣等）。10意外事故的處理： 如因玻璃器皿打碎而使菌液灑到桌面或

7、地上時、應(yīng)立即以5石炭酸液或0.1%新潔爾滅溶液投蓋其上，半小時后再擦去。 如菌液污染手部時，應(yīng)先用70乙醇棉花拭去、再用肥皂水洗刷干凈；如污染致病菌時、應(yīng)將手浸于24來蘇爾或01新潔爾滅溶液中，10min20min后用自來水刷洗干凈。 如不慎將菌液及入口中，應(yīng)立即吐出并用大量自來水漱口。實驗注意事項環(huán)境微生物學(xué)實驗是一門操作技能較強的課程。通過本實驗一 光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計數(shù)實驗二 培養(yǎng)基的配置和滅菌實驗三 純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)實驗一 光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計數(shù)實驗一 光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計數(shù)1、掌握光學(xué)顯微

8、鏡的結(jié)構(gòu)、原理，學(xué)習(xí)顯微鏡的操作方法和保養(yǎng)2、觀察細菌、真菌、原生動物的標本裝片，學(xué)會繪制生物圖3、掌握使用測微尺測量微生物大小的方法4、了解血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)，掌握使用和計算方法實驗?zāi)康膶嶒炓?光學(xué)顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察、大小測定和計數(shù)1顯微鏡的構(gòu)造現(xiàn)代普通光學(xué)顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又常被稱為復(fù)式顯微鏡，由機械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。機械裝置包括鏡筒、轉(zhuǎn)換器、載物臺、鏡臂、鏡座、調(diào)節(jié)器：光學(xué)系統(tǒng)包括目鏡、物鏡、聚光器、電光源。顯微鏡的總放大倍數(shù)為目鏡和物鏡的放大倍數(shù)的乘積。顯微鏡的構(gòu)造現(xiàn)代普通光學(xué)顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放顯微鏡的使用 1、低倍鏡觀察

9、 將標本波片用標本夾夾住，移動到物鏡的正下方。下降10物鏡，使其接近標本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡簡，使標本在視野中初步聚焦，再使用微調(diào)調(diào)節(jié)圖像清晰。移動標本，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。2、高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其移至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調(diào)節(jié)后微調(diào)細調(diào)節(jié)器使物象清晰，移動標本，仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。3、油鏡觀察 在標本的蓋玻片上滴少量香柏油，將物鏡轉(zhuǎn)換到油鏡，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心降下，使鏡頭侵入香柏油中。開足光圈，旋轉(zhuǎn)細調(diào)節(jié)器至標本顯出，清晰為止。顯微鏡的使用 1、低倍鏡觀

10、察 微生物大小的測量標定目鏡測微尺 裝在目鏡上的目測微尺中央刻有等分為100格或更多格的標尺，使用前要用物測微尺標定。物測微尺中央刻有1mm長的標尺，等分為100格，10m格。將物測微尺的刻度朝上放在載物臺上，用低倍鏡找出物測微尺的刻度，移動物測微尺使其第一條線與目測微尺的第一條線重合，順著刻度線找出另一條重合線。算出低倍鏡下目測微尺每格的長度。換高倍鏡用同樣方法標定出高倍鏡下目測微尺每格的長度。微生物大小的測量標定目鏡測微尺微生物大小的測量微生物大小的測量 將物測微尺取下，換上標本片，選擇適當物鏡測量微生物的長度和寬度占目測微尺的格數(shù)，再按目測微尺1格的長度算出微生物的長度和寬度。10 10

11、 顫藻微生物大小的測量微生物大小的測量10 10硝化細菌大腸桿菌酵母菌硝化細菌大腸桿菌酵母菌作業(yè)記錄實驗結(jié)果完成下列任務(wù)并提交一份實驗報告。1、繪制所觀察的一種或兩種微生物的形態(tài)，并測量其大小。2、將菌液濃度的實驗結(jié)果填入下表：計數(shù)次數(shù)每個中方格菌數(shù)稀釋倍數(shù)原菌液濃度（個/ml）平均值（個/ml）第一次第二次作業(yè)記錄實驗結(jié)果完成下列任務(wù)并提交一份實驗報告。每個中方格菌實驗二 培養(yǎng)基的配置和滅菌1、明確培養(yǎng)基配置的原理2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟3、掌握滅菌鍋的使用方法實驗?zāi)康膶嶒灦?培養(yǎng)基的配置和滅菌1、明確培養(yǎng)基配置的原理實驗?zāi)康膶嶒灮驹肀敬涡枰渲频呐囵B(yǎng)基是為下次從土壤或活性污泥

12、中分離細菌用的，所以選擇配制適合細菌生長的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。這是一種應(yīng)用最廣泛最普遍的細菌基本培養(yǎng)基，牛肉膏提供碳原和能源，蛋白胨主要提供氮源，NaCI提供無機鹽，用HCI和NaOH調(diào)節(jié)pH，還要加入一定量的瓊脂最為凝固劑。瓊脂在大于96時融化，小于40時凝固，通常不被微生物利用。培養(yǎng)基配方如下：（調(diào)節(jié) pH 7.2 7.4）牛肉膏蛋白胨NaCI瓊脂水5 g10 g5 g 25 g1000ml實驗基本原理本次需要配制的培養(yǎng)基是為下次從土壤或活性污泥中分實驗內(nèi)容和步驟1.配制溶液：取一定容最的燒杯或搪瓷杯盛入適量蒸餾水，按培養(yǎng)基配方逐一稱取各種成分，依次加入水中溶解。牛肉膏、蛋白胨可加熱促進溶

13、解，待全部溶解后，加水補足所需容量。2.調(diào)節(jié)pH：用精密pH試紙測量培養(yǎng)基原始pH值。若偏酸，逐滴加入1molL的NaOH 溶液，邊加邊攪拌，隨時測pH值，直至達約7.4。若偏堿，同法用1molL的HCI溶液調(diào)節(jié)。3.分裝：將配制好的培養(yǎng)基裝入三角瓶和試管中，三角瓶裝量不要超過容積的1/2，試管裝量不要超過試管高度的1/3，約為5ml。5、加塞：分裝完畢后，在試管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進入并保證良好的通氣性能。4. 加塞：分裝完畢后，在試管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進入并保證良好的通氣性能。實驗內(nèi)容和步驟1.配制溶液：取一定容最的燒杯或搪瓷杯盛入適量實驗內(nèi)容和步驟5

14、. 包扎：加塞后，三角瓶外包一層牛皮紙或兩層舊報紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好：試管先用橡皮筋全部捆好，再在棉塞外包牛皮紙或舊報紙，防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。 6. 滅菌：將包扎好的培養(yǎng)基放進高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，0.103MPa，121，20min，高壓蒸汽滅菌。7. 擱置斜面：將滅菌的試管培蕎基冷卻至50左右，將試管口端擱在玻璃棒或其它合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。8. 無菌檢套：將滅菌的培養(yǎng)基放入37的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h，檢查滅菌是否徹底。實驗內(nèi)容和步驟5. 包扎：加塞后，三角瓶外包一層牛皮紙或兩層環(huán)境微生物學(xué)的教材課件作業(yè)

15、實驗結(jié)束完成下列思考題，并提交實驗報告。1、配制培養(yǎng)基的過程中應(yīng)該注意些什么問題？為什么？2、培養(yǎng)基配制好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的?作業(yè)實驗結(jié)束完成下列思考題，并提交實驗報告。實驗三 純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)l、掌握梯度稀釋平板法分離純種微生物的原理、方法2、掌握常規(guī)接種技術(shù)3、建立無菌操作意識實驗?zāi)康膶嶒炄?純種微生物的分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)l、掌握梯度稀釋平實驗基本原理土樣或活性污泥中含有的微生物數(shù)量很多，而且聚集在一起，經(jīng)過無菌水的梯度稀釋可以將微生物充分分散，成單個細胞，涂布到固體平板上，長成單菌落，一個單菌落對應(yīng)于原土樣（或活性污泥）中的一個微生物

16、，乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)可以計算出土樣的微生物濃度；將單菌落進一步劃線純化可分離到純種微生物。實驗基本原理土樣或活性污泥中含有的微生物數(shù)量很多，而且聚集在（一）梯度稀釋平板法1、 制備土壤（或活性污泥）稀釋液準確稱取土樣10g或活性污泥10ml，加入裝有90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩約20min，使土樣與水充分混勻，將細胞分散。用一支無菌吸管從中吸取1ml土壤或活性污泥懸液加入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸（深吸淺吹）3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液：再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1 ml移入裝有9ml無菌水的誠管中，也吹吸三次，即成10-3稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成

17、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀釋菌液。（一）梯度稀釋平板法1、 制備土壤（或活性污泥）稀釋液（一）梯度稀釋平板法 2、加菌將無菌平板編上10-4、10-5、10-6號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-6稀釋液各1ml放入編號10-6的3個平板中，同法吸取10-5稀釋液各1ml放入編號10-5的3個平板中，再吸取10-4稀釋液各1rnl放入編號10-4的3個平板中（圖3-1）（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。3、倒平板上述操作的同時，將培養(yǎng)基加熱融化，再冷卻到4050，傾注1015ml培養(yǎng)基入已含有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)（約23mm

18、厚）。迅速蓋上皿蓋，平放在工作臺上，輕輕轉(zhuǎn)動，是培養(yǎng)基和稀釋的菌液充分混合均勻，冷卻后，即制成平板。4、培養(yǎng)將培養(yǎng)皿倒置，放于30恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2436h，觀察結(jié)果。（一）梯度稀釋平板法 2、加菌（二）平板劃線平板劃線的主要目的是長出單菌落，得到純培養(yǎng)。將融化的培養(yǎng)基無菌操作倒入無菌的空培養(yǎng)皿中。接種環(huán)在火焰上徹底殺菌并冷卻后，蘸取少量菌種，在平板表面輕輕地劃線（如圖），使得初始聚集在一起的細胞漸漸稀釋，最后有單個分散的細胞，長出單菌落，達到分離純化的目的。將劃好線的培養(yǎng)皿倒置于30恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2436h，觀察結(jié)果。（二）平板劃線平板劃線的主要目的是長出單菌落，得到純培養(yǎng)。將（三）斜面接種1、在待接種的斜面培養(yǎng)基的試管上部，貼上標簽，寫上菌名、接種日期等。2、將一支斜面菌種和一支待接的斜面培養(yǎng)基放在左手上，拇指壓住兩只試管，中指位于兩只試管之間，斜面向上，管口齊平。3、右手先將棉塞擰松動，以便接種時拔出。右手拿接種環(huán)，將接種環(huán)可能進入試管的部分在火焰上灼燒滅菌。4、在火焰旁，用右手小指、無名指和手