版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、口腔疾病分子生物學(xué)口腔疾病分子生物學(xué) 分子生物學(xué)是研究生物分子的特征、相互關(guān)系及其對生命活動(dòng)影響的學(xué)科,分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用有助于從根本上理解生物的生理及病理機(jī)制與過程。 口腔疾病分子生物學(xué)Molecular biology of oral diseases 分子生物學(xué)是研究生物分子的特征、相互關(guān)系及其對生命活內(nèi)容第一節(jié) 分子生物學(xué)基礎(chǔ)一、概述二、基因三、基因表達(dá)四、基因表達(dá)的調(diào)節(jié)第二節(jié) 分子生物學(xué)研究的主要方法一、分子克隆的材料與方法二、分子克隆的主要步驟三、特異核酸的檢測第三節(jié) 牙發(fā)生的分子機(jī)制一、釉質(zhì)形成的分子機(jī)制二、牙本質(zhì)形成的分子機(jī)制第四節(jié) 分子生物學(xué)在口腔致病菌研究中的應(yīng)用一、
2、變形鏈球菌屬致齲毒力因子二、核酸雜交法檢測牙周病相關(guān)細(xì)菌三、基于16S rRNA基因分析的口腔微生物分類 與鑒定第五節(jié) 口腔病分子生物學(xué)基礎(chǔ)一、遺傳疾病的分類二、單基因遺傳病研究中的幾個(gè)概念三、基因多態(tài)性與突變第六節(jié) 口腔腫瘤分子生物學(xué)一、細(xì)胞增值與細(xì)胞凋亡二、口腔腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制三、口腔腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制四、口腔腫瘤相關(guān)基因的篩選與功能研究策略內(nèi)容第一節(jié) 分子生物學(xué)基礎(chǔ)第二節(jié) 分子生物學(xué)研究的主要方法第了解掌握熟悉分子生物學(xué)研究的主要方法與原理The Methods and Principles 牙發(fā)生中的分子機(jī)制以及口腔常見致病菌的毒力因子及檢測方法Molecular Mechanism
3、s of tooth development理解分子改變所導(dǎo)致遺傳病的原理How can gene mutations affect health and development?基因的基本結(jié)構(gòu)、功能及表達(dá)的調(diào)節(jié)The gene structure , function and expression了解掌握熟悉分子生物學(xué)研究的主要方法與原理牙發(fā)生中的分子機(jī)制第一節(jié) 分子生物學(xué)基礎(chǔ) 概述 基因的基本結(jié)構(gòu)和功能 基因表達(dá) 基因表達(dá)的調(diào)節(jié) 第一節(jié) 分子生物學(xué)基礎(chǔ) 概述基因的基本結(jié)構(gòu)和功能The Structure and functions of the nucleic acids Molecule
4、 (Gene)基因的基本結(jié)構(gòu)和功能核酸 nucleic acidsJohannes Friedrich MiescherSwiss physician and biologist 1844-1895 He was the first researcher to isolate and identify nucleic acid.核酸 nucleic acidsJohannes FriedDiscoverer of the structure of DNAThey were awarded the 1962 Nobel Prize for Physiology or Medicine, for
5、their discoveries concerning the molecular structure of nucleic acids and its significance for information transfer in living materia.James Dewey Watson 1928, AmericanMaurice Hugh Frederick Wilkins 1916, New ZealandX-ray diffractionFrancis Harry Compton Crick1916, BritishDiscoverer of the structure
6、of核糖核酸脫氧核糖核酸腺嘌呤胸腺嘧啶胞嘧啶鳥嘌呤腺嘌呤尿嘧啶胞嘧啶鳥嘌呤核酸 nucleic acids核糖核酸脫氧核糖核酸腺嘌呤胸腺嘧啶胞嘧啶鳥嘌呤腺嘌呤尿嘧啶胞The structure of the DNA double helix 嘧啶嘌呤The structure of the DNA doubl口腔疾病分子生物學(xué)課件基因(gene)基因是一段DNA序列,其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是編碼一條多肽或蛋白質(zhì)的RNA或具有獨(dú)立功能的RNA,基因決定遺傳性狀。基因在基因組上呈直線排列并世代相傳。基因組(genome)基因組是指細(xì)胞或生物體的整套DNA,基因組包含整套基因的編碼序列,同時(shí)還包括基因內(nèi)的非編碼
7、序列及基因間序列。這些序列也同樣含遺傳指令。基因(gene)基因組(genome)基因基因組基因基因組123456712345671234567DNA新生mRNA成熟mRNA轉(zhuǎn)錄拼接-轉(zhuǎn)錄后修飾翻譯蛋白質(zhì)1234567DNA新生mRNA成熟mRNA轉(zhuǎn)錄拼接-復(fù)制DNA Replication dATP/dGTP/dCTP/dTTP Mg2+ 引物(primer :DNA or RNA) DNA模板(Template) DNA多聚酶復(fù)制DNA Replication dATP/dGT基因表達(dá)Gene expression 基因表達(dá)基因表達(dá)Gene expression 轉(zhuǎn)錄翻譯基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄翻譯轉(zhuǎn)
8、錄 Transcription DNARNASence strandAntience strand反義鏈有意義鏈啟動(dòng)子PromotorTATA 框CAAT框GC框增強(qiáng)子沉默子終止子轉(zhuǎn)錄 Transcription DNARNASence sMessenger RNA (mRNA) Ribosomal RNA (rRNA)Transfer RNA (tRNA)Long non-coding RNA small nuclear RNA (snoRNA) microRNA (miRNA)Small interfering RNA (siRNA)Piwi-interacting RNA (piRNA)
9、RNAMessenger RNA (mRNA) RNA克雷格梅洛是美國馬薩諸塞大學(xué)醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)教授。2006年因與斯坦福醫(yī)學(xué)院病理學(xué)和遺傳學(xué)教授安德魯法厄發(fā)現(xiàn)RNA干擾現(xiàn)象而共同獲得2006年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。1982年獲得美國布朗大學(xué)學(xué)士學(xué)位,1990年在哈佛大學(xué)獲得博士學(xué)位。1994年加入馬薩諸塞州大學(xué)醫(yī)學(xué)院任分子醫(yī)學(xué)教授Craig C. Mello克雷格梅洛是美國馬薩諸塞大學(xué)醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)教授。2006年轉(zhuǎn)錄后修飾 Post-transcriptional modification mRNA轉(zhuǎn)錄后修飾 mRNA轉(zhuǎn)錄后修飾 Post-transcriptional modificat
10、ion mRNA5 cap addition Splicing Polyadenylation 轉(zhuǎn)錄后修飾 mRNA5 cap addition SplitRNArRNAmRNA翻譯 TranslationmRNAProtein (蛋白質(zhì))tRNArRNAmRNA翻譯 TranslationmRNA翻譯 TranslationmRNAProtein (蛋白質(zhì))翻譯 TranslationmRNAProtein (蛋白質(zhì)遺傳密碼Start :AUG遺傳密碼Start :AUG一個(gè)基因一種酶(EXTL2-糖基化轉(zhuǎn)移酶)一個(gè)基因一條多肽鏈血紅蛋白血紅蛋白兩條鏈和兩條鏈組成四聚體的血紅蛋白:鏈鏈一個(gè)基
11、因一種酶(EXTL2-糖基化轉(zhuǎn)移酶)一個(gè)基因一條多肽鏈一個(gè)基因多條多肽鏈(TP63基因)外顯子1外顯子2外顯子3外顯子4外顯子554314231534第1個(gè)轉(zhuǎn)錄本第2個(gè)轉(zhuǎn)錄本第3個(gè)轉(zhuǎn)錄本一個(gè)基因多條多肽鏈(TP63基因)外顯子1外顯子2外顯子3外NF1基因的有義鏈NF1基因的反義鏈外顯子外顯子5533OMGEVI2BEVI2A外顯子OMG、EVI2A、EVI2B三個(gè)基因在基因組上定位于NF1基因第36個(gè)外顯子和第37個(gè)外顯子之間的內(nèi)含子中。紅色:外顯子 藍(lán)色:內(nèi)含子重疊基因NF1基因的有義鏈NF1基因的反義鏈外顯子外顯子553基因表達(dá)的調(diào)節(jié)Regulation of gene expressi
12、on 基因表達(dá)的調(diào)節(jié)DNA Interactions with proteinsAll the functions of DNA depend on interactions with proteins. These protein interactions can be non-specific, or the protein can bind specifically to a single DNA sequence. Enzymes can also bind to DNA and of these, the polymerases that copy the DNA base sequ
13、ence in transcription and DNA replication are particularly important.DNA Interactions with proteins基因表達(dá)的調(diào)節(jié)乳糖操縱子模型基因表達(dá)的調(diào)節(jié)乳糖操縱子模型基因表達(dá)的調(diào)節(jié)Regulation of gene expression 基因表達(dá)的調(diào)節(jié) 基因表達(dá)的調(diào)控基因表達(dá)的調(diào)控基因表達(dá)的調(diào)節(jié)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)第二節(jié) 分子生物學(xué)研究的主要方法與原理The Methods and Principles 第二節(jié) 分子生物學(xué)研究的主要方法與原理核酸蛋白質(zhì)核酸核酸技術(shù)核酸制備與擴(kuò)增基因組DNA的提取與純化RNA制備
14、和cDNA的合成核酸擴(kuò)增(PCR技術(shù))核酸檢測核酸雜交SouthernNorthern基因芯片基因克隆分離目的基因切割目的基因和載體目的基因和載體的連接重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞陽性克隆的篩選電泳分析法分光光度分析法常用的分子生物學(xué)技術(shù)核酸技術(shù)核酸制備與擴(kuò)增基因組DNA的提取與純化核酸檢測核酸雜PCR技術(shù)發(fā)明者1985年,美國科學(xué)家Kary Mullis在高速公路的啟發(fā)下,經(jīng)過兩年的努力,發(fā)明了PCR技術(shù),并在Science雜志上發(fā)表了關(guān)于PCR技術(shù)的第一篇學(xué)術(shù)論文。從此,PCR技術(shù)得到了生命科學(xué)界的普遍認(rèn)同,Kary Mullis也因此而獲得1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。PCR技術(shù)發(fā)明者1985年,
15、美國科學(xué)家Kary Mullis聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) Polymerase Chain Reaction(PCR)PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降 至55左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合。3. 引物的延伸:DNA模板-引物結(jié)合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,
16、以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合 成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需 24分鐘,23小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) Polymerase Chain React 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) Polymerase Chain Reaction(PCR)模板DNA的變性模板DNA與引物的退火(復(fù)性)引物的延伸PCR產(chǎn)物 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 模板DNA的變性模板DNA瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物MarkerPCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳分析
17、PCR產(chǎn)物MarkerPCR產(chǎn)物PCR反應(yīng)要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。 PCR反應(yīng)要素: PCR引物設(shè)計(jì)應(yīng)遵循以下原則:引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。 引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。A
18、TGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 引物3端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。 引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。計(jì)算機(jī)軟件輔助設(shè)計(jì) PCR引物設(shè)計(jì)應(yīng)遵循以下原則:特異性強(qiáng) 引物與模板DNA特異正確的結(jié)合、堿基配對原則、聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,特異性擴(kuò)增靶基因區(qū)片段。2. 靈敏度高
19、 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的 起始待測模板擴(kuò)增到微克水平。3. 簡便、快速 只需將引物、酶、dNTP、模板和緩沖液混合后放入PCR儀中即可。一 般在24小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析即可。4. 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA粗制品可作為擴(kuò)增模板。可 直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等 DNA擴(kuò)增檢測。PCR優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)PCR優(yōu)點(diǎn)PCR技術(shù)在臨床上的應(yīng)用在遺傳病診斷上的應(yīng)用: 直接檢出基因突變位點(diǎn)篩查與遺傳病有關(guān)的點(diǎn)突變在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用: 病原體的定性及定量檢測(如病毒感染)在腫瘤基
20、因診斷中的應(yīng)用: 通過檢測與癌變有關(guān)的基因標(biāo)志物來判定組織學(xué)的良、惡性程度,癌的進(jìn)展以及腫瘤的耐藥性在基因表達(dá)水平檢測中的應(yīng)用: 定量PCR可用于檢測與疾病相關(guān)蛋白基因表達(dá)水平。 臨床上檢測腫瘤抗原的基因表達(dá)水平能對腫瘤做出早期診斷及治療效果評價(jià)等PCR技術(shù)在臨床上的應(yīng)用在遺傳病診斷上的應(yīng)用: 基因克?。夯蚪?jīng)無性繁殖獲得許多相同拷貝的過程。通常是將單個(gè)基因?qū)胨拗骷?xì)胞中復(fù)制而成?;蚩寺〖夹g(shù):一般來說,基因克隆技術(shù)包括把來自不同生物的基因同有自主復(fù)制能力的載體DNA在體外人工連接,構(gòu)建成新的重組DNA,然后送入受體生物中去表達(dá),從而產(chǎn)生遺傳物質(zhì)狀態(tài)的轉(zhuǎn)移和重新組合。因此基因克隆技術(shù)又稱為分子
21、克隆、基因的無性繁殖、基因操作、重組DNA技術(shù)以及基因工程等。步驟:1.分離目的基因 2.切割目的基因和載體 3.目的基因和載體的連接 4.重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞(E.Coli) 5.陽性克隆的篩選 6.DNA測序分析基因克隆技術(shù)基因克?。夯蚪?jīng)無性繁殖獲得許多相同拷貝的過程。通常是將單個(gè)限制性內(nèi)切核酸酶 (restriction endonuclease)DNA 連接酶 (DNA ligase)質(zhì)粒 (plasmid, vector)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)染(transfection)轉(zhuǎn)化 (transformation)限制性內(nèi)切核酸酶 (restriction endonuc 6.DNA測序RT-PCR
22、1. 目的基因2.切割目的基因和載體3.目的基因和載體的連接4.轉(zhuǎn)化(E.Coli)5.陽性克隆基因克隆技術(shù)6.DNA測序RT-PCR1. 目的基因2.切割目的基因和載口腔疾病分子生物學(xué)課件 6.DNA測序6.DNA測序 Transfection(Green Fluorescent Protein )克隆/體外表達(dá)目地基因Transfection(Green Fluorescent核酸雜交技術(shù)Southern blot:檢測DNANorthern blot:檢測RNA核酸雜交技術(shù)Southern blot:檢測DNASouthern blot:檢測DNASouthern blot:檢測DNAN
23、orthern blot:檢測RNARNANorthern blot:檢測RNARNAReal-time PCRReal-time PCR蛋白質(zhì)技術(shù)蛋白質(zhì)的提取分離與純化及定量(Protein isolation)蛋白印記法(Western blot)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)免疫組織化學(xué)( Immunohistochemistry,IHC)免疫共沉淀反應(yīng)(co-immunoprecipitation)細(xì)胞免疫熒光染色方法 Immunol Fluorescence Assay(IFA)蛋白質(zhì)技術(shù)蛋白質(zhì)的提取分離與純化及定量(Protein is蛋白印記法(Western blot)一種分析
24、和鑒定特定蛋白質(zhì)的技術(shù)。即將混雜的蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后,轉(zhuǎn)移至固相膜上,再用標(biāo)記的抗體或二抗與之反應(yīng),以顯示膜上特定的蛋白條帶。The western blot (sometimes called the protein immunoblot) is a widely accepted analytical technique used to detect specific proteins in the given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate nat
25、ive proteins by 3-D structure or denatured proteins by the length of the polypeptide. The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are stained with antibodies specific to the target protein.蛋白印記法(Western blot)一種分析和鑒定特定蛋白Western blot protocol一種分析和鑒定特定
26、蛋白質(zhì)的技術(shù)。即將混雜的蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后,轉(zhuǎn)移至固相膜上,再用標(biāo)記的抗體或二抗與之反應(yīng),以顯示膜上特定的蛋白條帶。蛋白樣品制備和上樣電泳轉(zhuǎn)膜封閉一抗二抗底物(ECL)Western blot protocol一種分析和鑒定特定免疫組織化學(xué)( Immunohistochemistry,IHC)應(yīng)用免疫學(xué)(抗原抗體特異性結(jié)合)及組織化學(xué)原理,對組織切片中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)Immunohistochemistry or IHC refers to the process of detecting antigens (e.g.,
27、proteins) in cells of a tissue section by exploiting the principle of antibodies binding specifically to antigens in biological tissues. IHC takes its name from the roots immuno, in reference to antibodies used in the procedure, and histo, meaning tissue (compare to immunocytochemistry).免疫組織化學(xué)( Immu
28、nohistochemistry,I1 免疫熒光方法先將已知抗體標(biāo)上熒光素,當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光,在熒光顯微鏡下可觀察到某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。2 免疫酶標(biāo)方法基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,在顯微鏡下對各種抗原成分進(jìn)行定位研究。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是:定位準(zhǔn)確,對比度好,染色標(biāo)本可長期保存。免疫組織化學(xué)( Immunohistochemistry,IHC)1 免疫熒光方
29、法先將已知抗體標(biāo)上熒光素,當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中免疫酶標(biāo)方法免疫熒光方法免疫酶標(biāo)方法免疫熒光方法免疫共沉淀反應(yīng)(co-immnoprecipitation)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。原理:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。Imm
30、unoprecipitation (IP) is the technique of precipitating a protein antigen out of solution using an antibody that specifically binds to that particular protein. This process can be used to isolate and concentrate a particular protein from a sample containing many thousands of different proteins. Immunoprecipitation requires that the antibody be coupled to a solid substrate at some point in the procedure.免疫共沉淀反應(yīng)(co-immnoprecipitation)免疫共沉淀反應(yīng)(co-immnopricipitation)Western blot免疫共沉淀反應(yīng)(co-i
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025商用門面租房合同
- 二零二五年度醫(yī)療廣告宣傳與合作合同3篇
- 二零二五年度北京云計(jì)算數(shù)據(jù)中心運(yùn)維服務(wù)合同2篇
- 化工系統(tǒng)工程課件-化工過程分析與合成
- 2025版高考數(shù)學(xué)一輪復(fù)習(xí)易錯(cuò)考點(diǎn)排查練解析幾何含解析新人教B版
- 二零二五年度體育健身SaaS解決方案銷售及服務(wù)協(xié)議2篇
- 二零二五年度教育領(lǐng)域投資保證擔(dān)保借款合同范本2篇
- 二零二五年度媒體內(nèi)容制作與分發(fā)合同
- 2025版汽車銷售商與汽車用品租賃服務(wù)合作協(xié)議范本3篇
- 《Google創(chuàng)新故事A》課件
- 2023-2024學(xué)年上海市普陀區(qū)三年級(上)期末數(shù)學(xué)試卷
- 小班班本課程《吃飯這件小事》
- 常用鉆井英語縮寫
- 東風(fēng)7C型(DF7C)內(nèi)燃機(jī)車
- 標(biāo)桿房企人力資源體系研究之龍湖
- 規(guī)則大副貨運(yùn)知識(shí)點(diǎn)
- 《2022年上海市初中語文課程終結(jié)性評價(jià)指南》中規(guī)定的150個(gè)文言實(shí)詞
- 關(guān)于轉(zhuǎn)發(fā)《關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)少先隊(duì)輔導(dǎo)員隊(duì)伍建設(shè)的若干意見》的通知
- 愛麗絲夢游仙境話劇中英文劇本(共6頁)
- 書法少年宮活動(dòng)記錄
- 鐵路橋梁鋼結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范(TB100022--99)修訂簡介
評論
0/150
提交評論