骨髓細胞染色體標(biāo)本制備_第1頁
骨髓細胞染色體標(biāo)本制備_第2頁
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文檔簡介

1、實驗八 動物骨髓細胞染色體的制備一、實驗?zāi)康?1 .掌握動物骨髓細胞染色體制備方法 2 .觀察染色體的形態(tài)特征以及數(shù)目二、實驗原理 用適量的秋水仙素溶液注入動物體內(nèi)，處于分裂期的細胞經(jīng)秋水仙素處理，由于阻斷了紡錘絲的形成，使細胞分裂處于中期，此時的染色體具有典型的形態(tài)。骨髓中具有豐富的細胞，這些細胞具有高度的分裂活性，經(jīng)秋水仙素處理后，可使分裂期細胞處在有絲分裂中期，再經(jīng)過離心、低滲、固定、滴片、染色等步驟，可制作理想的染色體的標(biāo)本。是研究細胞遺傳學(xué)的好材料三、實驗步驟 1. 秋水仙素處理：取小白鼠一只，體重20g左右， 在實驗前3.5 4 h 腹腔注射0.80g/L的秋水仙素0.2 毫升。

2、2. 取股骨：實驗開始時，小鼠拉頸椎處死，取兩側(cè) 股骨，用酒精紗布擦去股骨上的肌肉。 3. 收集骨髓細胞： 1ml 注射器插入骨髓腔內(nèi)，將骨 髓腔先穿通. 然后針頭刺入一半位置，將股骨另一 端置于含有5ml0.85%生理鹽水的離心管，反復(fù)抽 打，直到股骨變白色為止，然后倒轉(zhuǎn)股骨，如法繼 續(xù)抽打，使骨髓腔內(nèi)的骨髓全部沖洗到離心管中。 然后1000 rpm離心10min，棄上清。4. 低滲處理：沉淀中加4ml 0.075M KCl(事先在37 溫箱中預(yù)熱) ，用吸管抽打均勻后，置于37 溫箱 中低滲處理30 min.5. 固定：低滲處理后，1000rpm離心10min去上清， 沉淀中慢慢加入新配置

3、的卡諾固定液45ml，立即 用吸管輕輕吹打均勻，靜置15min。1000rpm離心 10min, 去上清。6. 重復(fù)第5步操作一次。7. 離心后的上清，約剩0.5ml左右，用吸管吹打成懸液。8. 滴片：將干凈載玻片事先預(yù)浸在0 冰水中， 用時取出，將載玻片傾斜45o，用吸管取細胞 懸液。滴在載玻片上12滴（避免重疊），立 即用力吹散，使細胞分散均勻，然后置酒 精燈上微微加熱干燥。 9. 染色：取晾干的玻片，用Giemsa染液染色10min ，蒸餾水沖洗，自然干燥。10 . 鏡檢：先在低倍鏡下找到中期分裂相的細胞， 再轉(zhuǎn)高倍鏡，選擇染色體分散適度，長度適度的 分裂相觀察。四、作業(yè) 1、描繪小鼠骨髓細胞

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