中藥制劑分析3課件

1、第三章 中藥制劑的定性鑒別 目的： 檢定制劑的真實(shí)性。 方法： 1.顯微鑒別法 2.理化鑒別法 1）一般化學(xué)反應(yīng)法 2）升華法 3）熒光法 4）光譜法 5）色譜法 第一節(jié) 中成藥的顯微鑒別 一、制片方法 1散劑、膠囊劑 取粉末，直接加水或水合氯醛透化裝片。 2片劑 用刀片直接從藥片斷面刮取少量粉末或研碎后取少量樣品透化裝片。 3水丸、錠劑 研成粉末后取少量直接透化裝片。 4蜜丸 取蜜丸切碎，加水?dāng)嚢?，洗滌后，置離心管中離心分離沉淀。如此反復(fù)處理以除去蜂蜜后透化裝片。 若觀察細(xì)胞內(nèi)含物形狀，應(yīng)選用不同試劑制片。 淀粉粒 水或甘油醋酸試液； 糊粉粒 甘油； 水溶性內(nèi)含物 乙醇或水合氯醛試液(不加熱

2、)。 固定標(biāo)本片制片方法 取中成藥粉末置離心管中，加乙醇浸過上面，玻棒攪拌510分鐘后離心使粉末沉積，傾去稀醇液，再加無水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次1020分鐘；最后加入純二甲苯，略加攪拌，取處理后的樣品微量置載玻片上，滴加中性樹膠，加蓋玻片封藏，貼標(biāo)簽。 二、觀察要點(diǎn) 中成藥粉末鏡檢時(shí)，首先要了解處方中的藥味組成，明確其來源的藥用植物的部位，才能根據(jù)該部位的顯微特征來進(jìn)行檢出。 (一)根類 木栓組織碎片，表面觀多為多角形細(xì)胞， 排列緊密。 導(dǎo)管 直徑、節(jié)的長(zhǎng)短、末梢壁的穿孔及增厚壁的紋理類型。 草酸鈣結(jié)晶晶形、 分泌組織、 淀粉粒的形狀、 臍點(diǎn) 層紋 (二

3、)根莖類 與根類藥材粉末特征相似。而淀粉粒有時(shí)較大，有鱗葉組織，退化的鱗葉表皮細(xì)胞大多狹長(zhǎng)，細(xì)胞壁平直或波狀彎曲。 (三)莖類 1莖類 表皮細(xì)胞及垂周壁的形狀，氣孔的類型，毛茸的類型及形態(tài)； 導(dǎo)管的類型、直徑、長(zhǎng)短。 管胞的形態(tài)； 纖維的形狀、直徑、長(zhǎng)短、有無晶纖維等。 草酸鈣結(jié)晶多為方晶及簇晶，單子葉植物偶見針晶。 薄壁組織碎片、石細(xì)胞。 2皮類 纖維的直徑、長(zhǎng)短及形狀，是否成束存在， 細(xì)胞壁厚薄、木化與否，能否看到胞腔及壁孔等。 石細(xì)胞的形狀、細(xì)胞壁增厚情況。 草酸鈣結(jié)晶多為方晶及簇晶，砂晶及針晶較少。 皮類藥材粉末不應(yīng)含有木質(zhì)部組織，如導(dǎo)管、管胞等。 3木類 可見導(dǎo)管、管胞、木纖維、木射

4、線及木薄壁細(xì)胞。細(xì)胞壁通常均木化。不應(yīng)有木栓細(xì)胞及綠色組織等。 (五)葉類 1表皮 上下表皮細(xì)胞的形狀、大小，角質(zhì)層的形態(tài)，垂周壁的形狀、厚度或增厚情況以及有無氣孔、毛茸等。 2氣孔 氣孔的形狀、大小、型式， 保衛(wèi)細(xì)胞的形狀及內(nèi)含物， 副衛(wèi)細(xì)胞的數(shù)目、大小、形狀。 3毛茸 注意毛茸的種類。 非腺毛：注意細(xì)胞的數(shù)目、形狀、長(zhǎng)短、大小、細(xì)胞壁的厚薄及表面形態(tài)等。多為單列性多細(xì)胞毛，少為單細(xì)胞毛。形狀一般呈長(zhǎng)圓錐形或線形；細(xì)胞壁一般較薄，外壁表面大都光滑。 腺毛： 注意頭部的形狀、大小、細(xì)胞的數(shù)目、排列情況以及柄部的長(zhǎng)短、細(xì)胞數(shù)目及行列數(shù)目等。 (六)果實(shí)類 1果皮細(xì)胞的形狀、大小。 2外果皮上可能

5、有非腺毛及腺毛，注意長(zhǎng)短、形狀。 3中果皮內(nèi)的分泌組織 油細(xì)胞，油室、油管、石細(xì)胞等。 4內(nèi)果皮石細(xì)胞，大小、細(xì)胞壁的厚薄，如為鑲嵌層，則應(yīng)注意其排列形式。 三、應(yīng)用實(shí)例 六味地黃丸的顯微定性鑒別 顯微鑒別 取本品置顯微鏡下觀察，(1)薄壁組織棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物。 (熟地黃) (2)果皮表皮細(xì)胞橙黃色，表面觀類多 角形，垂周壁略連珠狀增厚。(山茱 萸) (3)淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直 徑2440um，臍點(diǎn)短縫狀或人字狀。 (山藥) 3a草酸鈣針晶束3b淀粉粒 (4)草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細(xì)胞中 ，有時(shí)數(shù)個(gè)排列成行。(牡丹皮) (5)不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無色，遇水合 氯醛

6、溶化；菌絲無色，直徑4-6um。 (茯苓) (6)薄壁細(xì)胞類圓形，有橢圓形紋孔， 集成紋孔群。(澤瀉)第二節(jié) 中藥制劑的一般理化鑒別法 一、一般化學(xué)反應(yīng)法 中藥制劑一般選擇有效成分、特征成分作為鑒別的對(duì)象。 一般化學(xué)反應(yīng)鑒別法多在試管中用濕法反應(yīng)進(jìn)行，制劑樣品要先制成適宜的供試液。一般情形下用50-70乙醇回流提取制備供試液。 一般化學(xué)反應(yīng)法用于中藥制劑鑒別應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)： (1)慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)，如泡沫生成反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)等。 (2)在分析前對(duì)樣品進(jìn)行分離、精制，除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性。 (3)采用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照的方式，對(duì)擬定的鑒別方法進(jìn)行反

7、復(fù)驗(yàn)證，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性。 實(shí)例1 牛黃解毒片中大黃、黃芩的定性鑒別反應(yīng) 取本品6片(去包衣)，研細(xì)，加乙醇10ml，溫?zé)?0分鐘，過濾，濾液作如下反應(yīng)： (1)取濾液5ml，加鎂粉少量與鹽酸0.5ml，加熱，即顯紅色。 （黃芩中有大量黃酮） (2)另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，顯紅色，再加30過氧化氫溶液，加熱，紅色不消失，加酸或酸性時(shí)，紅色變?yōu)辄S色。 （大黃中含有羥基蒽醌） 實(shí)例2 牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黃的定性鑒別反應(yīng) (1)取本品約0.1 g，研細(xì)，加氯仿5ml，浸泡1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟佐倭渴谷芙?，再滴加硫酸，初顯藍(lán)紫色，漸變?yōu)樗{(lán)綠色。（蟾蜍） (2)取本品約0.2g

8、，研細(xì)，加水濕潤(rùn)后，加氯酸鉀的硝酸飽和溶液2ml，振搖，放冷，離心，取上清液，加氯化鋇試液0.5ml，搖勻，溶液呈白色渾濁，離心，棄去上層酸液，再加水2ml，振搖，沉淀不溶解。（雄黃） (3)取本品適量，研細(xì)，用鹽酸濕潤(rùn)后，在光潔的銅片上摩擦，銅片表面即顯銀白色光澤，加熱烘烤后，銀白色消失。（朱砂） (二)取藥材粗粉加適當(dāng)?shù)娜軇┙?，將浸提液置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察反應(yīng)。 例如： 檳榔粉末0.5g，加水34ml及稀鹽酸1滴，微熱數(shù)分鐘，過濾，取濾液1滴于載玻片上，加碘化鉍鉀試液1滴，即發(fā)生混濁，放置后可見石榴紅球形或方形結(jié)晶(檳榔堿)。 曼陀羅葉少許，加氯仿提取，提取

9、液蒸干，加發(fā)煙硝酸1滴，顯黃色，加氫氧化鉀1粒，顯紫堇色(莨菪烷類成分Vitali反應(yīng))。 (三)取藥材切片或粉末，滴加各種試劑，直接觀察反應(yīng)現(xiàn)象。 例如： 鐘乳石少許，加濃鹽酸數(shù)滴，能產(chǎn)生大量氣泡(碳酸鹽分解產(chǎn)生CO2)。 番木鱉胚乳薄片，加1釩酸銨-硫酸試液1滴，胚乳速顯紫色(番木鱉堿)，另取切片加發(fā)煙硝酸1滴，即顯橙紅色(馬錢子堿)。 大黃粉末少許，置白磁板上，加氫氧化鈉液l滴，顯深紅色(蒽醌鈉鹽)。 四、熒光法 有些中藥材中含有能產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分，在可見光、紫外光照射下能發(fā)出熒光，或經(jīng)試劑處理后發(fā)出熒光。含有這類藥材的中藥制劑可用熒光法進(jìn)行鑒別。通常的操作方法是取制劑的提取液點(diǎn)在濾紙

10、上或試紙上，置紫外光燈下(365nm)觀察，有時(shí)則是加一定的試劑后再進(jìn)行觀察。 實(shí)例l 元胡止痛片的熒光鑒別 取本品適量，去糖衣，研細(xì)，取粉末1g，加0.25molL硫酸液10ml振搖片刻，濾過，取濾液數(shù)滴，點(diǎn)于濾紙上，陰干后置紫外光燈(365nm)下觀察，顯亮黃色熒光。 五、光譜法 (一)可見紫外分光光度法 不同的藥材所含的成分不同，在一定條件下吸收光譜的特征可用于鑒別藥材。利用這一特點(diǎn)，可見-紫外分光光度法也可用于中藥制劑的鑒別。 (二)紅外光譜法 六、色譜法 中藥制劑可用色譜法鑒定，包括薄層色譜法、紙色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法。 (一)薄層色譜法 使用本法鑒定中藥制劑，通常是在同

11、一塊薄層板上點(diǎn)入樣品和適宜的對(duì)照物，采用同一條件依法層析展開，經(jīng)顯色或用其他方法檢出色譜斑點(diǎn)后，將樣品與對(duì)照物所得的色譜圖進(jìn)行對(duì)比，作出鑒定。 1樣品應(yīng)作適當(dāng)?shù)念A(yù)處理 對(duì)樣品進(jìn)行初步的分離精制。 常用的預(yù)處理方法有：升華法，蒸餾法，溶劑提取法，小型層析柱的柱色譜法、離子交換法等。 2展開劑的選擇 選用能突出主要斑點(diǎn)，便于分析比較的展開劑，如果鑒別的對(duì)象相同，應(yīng)首先試用已有的、較成熟的展開劑。 如無現(xiàn)有展開劑，可先以無水乙醇-苯（14）展開，如主要物質(zhì)的Rf在0.8以上，改用苯-氯仿（13），如主要物質(zhì)的Rf在0.3以下，改用丙酮-甲醇（11）。 3對(duì)照品的選擇 中國(guó)藥典(一部)作薄層鑒別用的對(duì)

12、照物有對(duì)照品和對(duì)照藥材兩種。 TLC用作中藥制劑鑒別的另一類對(duì)照物是陰陽(yáng)對(duì)照溶液。 4薄層色譜的掃描定性鑒別 TLC展開后，斑點(diǎn)的檢識(shí)方法，有通用性的，如在紫外光燈下觀察出現(xiàn)的熒光，或用碘蒸氣、稀硫酸、磷鉬酸顯色等，這類方法專屬性不強(qiáng)。另一類是專屬性較好的顯色劑，例如碘化鉍鉀試液，茚三酮試液和三氯化鋁試液等，一般可依次說明斑點(diǎn)歸屬。 還可用薄層掃描儀將薄層板上的斑點(diǎn)轉(zhuǎn)換繪制成峰形色譜圖，這種色譜圖以斑點(diǎn)展開后移動(dòng)的距離為橫坐標(biāo)，斑點(diǎn)對(duì)光輻射的吸收強(qiáng)度或發(fā)射熒光的強(qiáng)度為縱坐標(biāo)的峰形曲線圖譜。 應(yīng)用實(shí)例 1.大黃及含大黃的成藥 1）供試液制備 取各樣品適量，加甲醇20ml浸漬1h，過濾，取濾液5m

13、l，蒸干，加水10ml使溶解，再加HCl 1ml，水浴加熱30min，立即冷卻，乙醚提取兩次，20ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确氯芙獬?ml。 2）對(duì)照液制備 取大黃對(duì)照藥材0.1g按供試液制備作為對(duì)照藥材溶液；另取蘆薈大黃素，大黃酸，大黃素，大黃素甲醚，大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。 3）薄層板 硅膠H加0.3CMC-Na溶液的自制板；厚度：300um 4）點(diǎn)樣 分別點(diǎn)樣4uL。 5）展開劑 石油醚(3060)-甲酸乙酯-甲酸(1551)放置后的上層溶液。 6）展開方式 上行展開；展距：7cm。 7）顯色 置紫外光燈(365nm)下檢視。 8）色譜識(shí)別

14、紫外光燈(365nm)下，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)。 9）備注 在部分成藥樣品的色譜中，除大黃的五個(gè)蒽醌成分的斑點(diǎn)外，尚有其它熒光斑點(diǎn)，為處方中的其它成分。 2.黃連、黃柏及含黃連、黃柏的成藥 1）供試液制備 取各品種藥粉適量，加甲醇5ml，置水浴回流15min，過濾，濾液濃縮至1ml。 2）對(duì)照液制備 取鹽酸香檳酒小檗堿，硫酸黃連堿，硫酸表小檗堿，非洲防己堿，藥根堿，鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每0.5mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。 3）薄層板 硅膠G自制板；厚度：500um 4）點(diǎn)樣 分別點(diǎn)樣1-2ul 5）展開劑 苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液 (631.51.50.5)；另槽中加入與展開劑等體積濃氨試液。 6）展開方式 展開箱預(yù)平衡15分鐘；上行展開；展距：8cm 7）顯色 置紫外光燈(365nm)下檢視。 8）色譜識(shí)別 中國(guó)藥典黃連項(xiàng)下收載有味連，雅連，云連三種，總體分析黃連可見45個(gè)主要的黃色熒光斑點(diǎn)，自下而上，分別為l.非洲防己堿+藥根堿(量少)；2.巴馬??；3.小檗堿；4.表小檗堿(云連不含，雅連含量低)；5.黃連堿(味連含量高)。黃柏主要檢出巴馬汀及小檗堿，可與