中藥制劑分析5課件

1、第五章 中藥制劑的含量測(cè)定（Content Determination）主講人 林於第五章 中藥制劑的含量測(cè)定（Content Determination） 含量測(cè)定的定義和意義 中藥制劑的含量測(cè)定是指用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法或儀器分析方法對(duì)制劑中某種（些）有效成分或有效部位進(jìn)行的定量分析。并以其測(cè)定結(jié)果是否符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定來判斷藥品的優(yōu)劣，是控制和評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要方法。 含量測(cè)定方法 中藥制劑含量測(cè)定的方法包括化學(xué)分析法和儀器分析法兩大類。由于中藥制劑組成復(fù)雜，儀器分析法更為常用。中國藥典中藥制劑含量測(cè)定方法概況見下表。 本章重點(diǎn)介紹浸出物測(cè)定法、揮發(fā)油測(cè)定法、分光光度法 、TLCS、 HPLC

2、 和GC等。方法 應(yīng)用品種數(shù)新增儀器分析法HPLC339282TLC3212GC2319分光光度法183化學(xué)分析法滴定法133重量法51氮測(cè)定法51揮發(fā)油測(cè)定法30浸出物測(cè)定法132總計(jì)4563272005年版中國藥典中成藥含量測(cè)定方法概況第一節(jié) 浸出物測(cè)定法（Determination of Extractive） 定義 浸出物測(cè)定法系根據(jù)制劑中化學(xué)成分的溶解性，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┙?提取)樣品，并測(cè)定浸出物（提取物）的含量，以此來控制藥品的質(zhì)量。 意義 這是一種較為粗略的定量分析方法。但對(duì)于有效成分不明確或無法建立確切的定量分析方法的中藥材及其制劑，尚具有一定的意義。 中國藥典附錄收載了三種

3、測(cè)定方法：水溶性浸出物測(cè)定法、醇溶性浸出物測(cè)定法和揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法。有的品種還采用了乙酸乙酯浸出物測(cè)定法。中國藥典收載的中成藥浸出物測(cè)定品種及其規(guī)定見表4-18。 供試品需粉碎，使能通過二號(hào)篩，并混合均勻。類別品名溶劑方法限度（%）醇溶性浸出物測(cè) 定七厘散乙醇熱浸法60.0刺五加浸膏甲醇熱浸法60.0刺五加片甲醇熱浸法80mg/片兒康寧糖漿正丁醇3.0獨(dú)一味膠囊正丁醇8.0鼻竇炎口服液正丁醇1.2揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定午時(shí)茶顆粒乙醚0.35沉香化氣丸乙醚0.40乙醚0.10九味羌活丸乙醚0.30龜齡集乙醚0.25水浸出物測(cè) 定暑癥片冷浸法25.0乙酸乙脂浸出物測(cè)定 一、水溶性浸出物測(cè)定法 本法

4、系以水為溶劑，對(duì)制劑中水溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量(%)。本法包括冷浸法和熱浸法。后者適用于不含或少含淀粉、粘液質(zhì)等成分的樣品且中成藥較少用。 1冷浸法 取供試品約4g，稱定重量，置250300ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過，棄去初濾液，精密量取濾液20ml，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量（W/W %）。 mi 為水溶性浸出物重量（g） ms為干燥供試品的重量（g）=供試品重量（1

5、含水量%)） 實(shí)例 暑癥片的水溶性浸出物測(cè)定（P128）mi100ml20ml ms含量（W/W %） = 100% 二、醇溶性浸出物測(cè)定法 本法系以甲醇、乙醇或正丁醇為溶劑，提取藥品中相應(yīng)的醇溶性成分，并計(jì)算其含量（ %）。正丁醇浸出物測(cè)定法主要用于含較多皂苷類成分的制劑，專屬性較強(qiáng)。 1.甲醇、乙醇浸出物的測(cè)定 照水溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定。 2.正丁醇浸出物的測(cè)定 按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法測(cè)定。一般說來，水溶液制劑可直接用水飽和的正丁醇提取數(shù)次，合并提取液，置已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干，置105干燥3小時(shí)，移置干燥皿中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，計(jì)算供試品中正丁醇浸出物的含量（W/V %

6、）。固體制劑可先加水溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取數(shù)次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，稱定浸出物重量，計(jì)算出制劑中正丁醇浸出物的含量（W/W %）。 3.實(shí)例 （1）兒康寧糖漿正丁醇浸出物的測(cè)定 （2）刺五加浸膏的甲醇浸出物測(cè)定 三、揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法 本法以乙醚為溶劑，對(duì)制劑中揮發(fā)性醚溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量（W/W %）。本法主要用于含揮發(fā)性成分較多的制劑，專屬性較強(qiáng)。 1.測(cè)定法 取供試品（過四號(hào)篩）25g，置五氧化二磷干燥器中，干燥12小時(shí)，精密稱定重量（ms）,置索氏提取器中，加乙醚適量，除另有規(guī)定外，加熱回流提取8小時(shí)，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸發(fā)

7、皿中，放置，揮去乙醚，殘?jiān)梦逖趸赘稍锲髦?，干?8小時(shí)，精密稱定（m1），緩緩加熱至105，并于105干燥至恒重（m2）。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量（m1-m2）。計(jì)算，即得。 msm1- m2 含量（W/W %） = 100%msm1-m2 2.注意事項(xiàng) （1）回流加熱乙醚須在水浴上進(jìn)行。 （2）蒸發(fā)皿中揮去乙醚須在室溫下通風(fēng)櫥中進(jìn)行。 （3）加熱揮去浸出物中揮發(fā)性成分時(shí)，應(yīng)緩緩加熱至105。 3.實(shí)例 九味羌活丸的揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定 本品由羌活、防風(fēng)、蒼術(shù)、細(xì)辛、川芎、白芷、黃芩、甘草、地黃等九味中藥組成，其主要有效成分為揮發(fā)油，故測(cè)定其中揮發(fā)性醚浸出物的含量。 四、山菊減壓

8、片乙酸乙酯浸出物測(cè)定法 取本品30片，精密稱定，研細(xì)，取約3g，精密稱定，精密加乙酸乙酯50ml，照浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法（附錄X A）測(cè)定，用乙酸乙酯作溶劑，每片含浸出物不得少于7.0mg。 第二節(jié) 揮發(fā)油測(cè)定法 （Determination of Volatile Oil） 一、意義 某些藥品中的主要有效成分為揮發(fā)油，故中國藥典收載了揮發(fā)油測(cè)定法，采用水蒸氣蒸餾法對(duì)藥品中揮發(fā)油總量進(jìn)行測(cè) 定，以控制藥品質(zhì)量。例如，正骨水、牡荊油膠丸、保婦康 栓滿山紅油滴丸等中揮發(fā)油的測(cè)定。 二、測(cè)定原理 首先利用揮發(fā)油的揮發(fā)性用水蒸氣蒸餾法將 其提取完全；再利用其較強(qiáng) 的親脂性與水不相溶而分層， 即 可

9、讀取油的總量并求算出含量。 三、揮發(fā)油測(cè)定裝置A. 園底燒瓶 B. 測(cè)量管 C. 冷凝器 四、測(cè)定方法 供試品需粉碎后過二號(hào)至三號(hào)篩，混勻再測(cè)定。 1.甲法 本法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以下的揮發(fā)油。取供試品適量（約相當(dāng)于揮發(fā)油0.5ml1.0ml），稱重（準(zhǔn)至0.01g），置燒瓶中，加水300ml500ml（或適量）與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止。置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，并保持微沸約5小時(shí)，至測(cè)定器中油量不再增加，放置片刻，開啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面

10、5mm處為止。放置1小時(shí)以上，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量，計(jì)算即得。 2.乙法 本法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以上的揮發(fā)油。取水約300ml與玻璃珠數(shù)粒，置燒瓶中，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后連接回流冷凝管。將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并繼續(xù)蒸餾，其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀態(tài)為度。30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取二甲苯的容積。然后照甲法自“取供試品適量”起，依法測(cè)定，自油層中減去二甲苯量，即為揮發(fā)油量，計(jì)算即得。五、含量計(jì)算 含量（V/W ）= 100% 含量（V/W ）= 1

11、00% 含量（V/W ）= 100% 揮發(fā)油體積（ml） 揮發(fā)油密度（g/ml） 樣品體積（ml） 樣品重量（g） VOWSWSVO DOVSVOVO WSDOVS第三節(jié) 紫外-可見分光光度法 （Ultraviolet and Visible Spectrophotometry） 定義 根據(jù)被測(cè)物質(zhì)在紫外-可見光的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析的方法稱紫外-可見分光光法。 紫外分光光度計(jì)工作原理紫外吸收光譜圖紫外吸收光譜圖紫外分光光計(jì)光路示意圖 特點(diǎn) 本法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，常用于中成藥含測(cè)。但本法不具分離功能，常用于總成分的測(cè)定。 定量分析的理論基礎(chǔ) 朗伯比爾

12、定律 A = K C L A為吸收度 K為吸收系數(shù) C為溶液濃度 L為溶液厚度 藥典收載了三種測(cè)定方法 1.吸收系數(shù)法 僅用于UV,不需對(duì)照品。 2.對(duì)照品比較法 主要用于Vis,需用對(duì)照品。 3.標(biāo)準(zhǔn)曲線法 主要用于Vis,需用對(duì)照品。 （原計(jì)算分光光度法取消）一、吸收系數(shù)法1.原理 C 為供試液濃度（g/100ml） A 為供試液測(cè)得的吸收度 E 為被測(cè)物質(zhì)的百分吸收系數(shù)（藥典給出） L 為比色皿（液層）厚度（1cm） 將求得的C值（供試液濃度）、樣品溶液的稀釋倍數(shù)和取樣量或平均片（丸）重代入公式計(jì)算，即可求出藥品中被測(cè)成分的含量。2.特點(diǎn) 不需對(duì)照品隨行測(cè)定，操作簡(jiǎn)便，僅用于紫外分光光度

13、法。故需嚴(yán)格校正儀器，規(guī)范實(shí)驗(yàn)條件，做好前處理工作。1cmA1%1%1cmA = E C LC =E L1%1cm1% 3.實(shí)例 （1）前列舒丸（水蜜丸）中牡丹皮的含量測(cè)定取本品切碎，取2g，精密稱定（2.135g）；用水蒸氣蒸餾，收集餾出液約450ml,置 500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，照分光光度法（附錄 A）在274nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度（A=0.333），按丹皮酚（C9H10O3 ）吸收系數(shù)（ ）為862 計(jì)算，即得。本品含牡丹皮按丹皮酚(C9H10O3) 計(jì)，每1g不得少于0.53mg 1cm (1)供試液濃度的計(jì)算（2）牡丹皮含量計(jì)算 C供（g/ 100 ml ） 0.0003

14、863AE1%1cmL含量（mg/g）C供（g/100ml） 500ml1000100 m供（g） 0.901%1cm （2）駐車丸（水丸）中總生物堿的含量測(cè)定 本品由黃連、炮姜、當(dāng)歸、阿膠等四味中藥制成。 取本品粉末（過三號(hào)篩）2g，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸甲醇(1:100) 的混合溶液適量，加熱回流至回流提取液無色時(shí)為止，將提取液（必要時(shí)濃縮）移至50ml量瓶中，加鹽酸甲醇(1:100) 的混合溶液至刻度，搖勻。照柱色譜法（附錄 C）試驗(yàn)，精密量取5ml,置中性氧化鋁柱（5g，內(nèi)徑0.9cm,濕法裝柱，用乙醇30ml預(yù)洗）上，用乙醇25ml分次洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加

15、乙醇至刻度，搖勻，精密量取2ml 置50ml量瓶中，加0.05molL硫酸溶液至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄 A），在345nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl)的吸收系數(shù)（ ）為728 計(jì)算，即得。 本品按干燥品計(jì)算，每1g含總生物堿以鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl) 計(jì)，不得少于 30.0mg。1% 1cm 二、對(duì)照品比較法 1.原理 在相同條件下分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算供試品溶液的濃度： C供=（A供/A對(duì)）C對(duì) C供為供試品溶液的濃度；A供為供試品溶液的吸收度；C對(duì)為對(duì)照品溶液的濃

16、度；A對(duì)對(duì)照品溶液的吸收度。 C供計(jì)算公式的推導(dǎo)： 因?yàn)?供試品=對(duì)照品 所以 E供 = E對(duì) A供/ C供= A對(duì)/ C對(duì) A供/A對(duì)= C供/ C對(duì) 供試品的含量（%）=（C供D供) / W供100% 式中，C對(duì)為供試品溶液濃度；D供為供試品溶液的稀釋倍數(shù)；W供為供試品取樣量。 2.特點(diǎn) 對(duì)照品溶液與供試品溶液的濃度應(yīng)盡可能接近，一般要求對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100%10%。 3.應(yīng)用實(shí)例 中國藥典華山參片中總生物堿、黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定等均采用本法。 黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定 本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑。 每片含環(huán)維黃楊星D 0.5mg或1

17、mg。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)105干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對(duì)照品25mg，置250ml量瓶中，加甲醇70ml使溶解,用 0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖 勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，用 0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖 勻，即得（每1ml含環(huán)維黃楊星D10g）。環(huán)維黃楊星D 供試品溶液的制備 取本品20片（每片含環(huán)維黃楊星D0.5 mg ），精密稱定（2.050g），研細(xì)，精密稱取0.1020g（約相當(dāng)于黃楊寧0.5mg），置50ml量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至近刻度，80水浴恒溫1.5小時(shí)后取出，冷卻至室溫,加0.05m

18、ol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，離心6分鐘（每分鐘轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)），取上清液，即得。 測(cè)定法 精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5ml,分別置分液漏斗中，各精密加入溴麝香草酚藍(lán)溶液（取溴麝香草酚藍(lán)18mg，置250ml量瓶中，加甲醇5ml使溶解，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，即得）5ml，搖勻，立即分別精密加入氯仿10ml，振搖2分鐘，靜置1.5小時(shí)，分取氯仿層，置含0.5g無水硫酸鈉的具塞試管中，振搖，靜置，取上清液，照分光光度法（附錄 A），在410nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度（ A對(duì) 0.454 A供0.445），計(jì)算，即得。 本品每片含黃楊寧以環(huán)維黃楊星D(C26

19、H46N2O)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0?！咀ⅰ凯h(huán)維黃楊星D無紫外吸收，故本法采用酸性染料比色法（1）求算供試液的濃度 C供（g/ml） =（A供/A對(duì)）C對(duì) = 9.8 （2）求算供試品的含量（標(biāo)示量 ） = 96.5BH + In BH In生物堿鹽 陽離子溴麝香草酚藍(lán) 陰離子 有色絡(luò)合物 （溶于氯仿 max 410nm ）緩沖液（pH6.8）定量生成C供（mg/ml）10-3 50ml 平均片重（mg）取樣量（mg） 標(biāo)示量（mg） 含量 = 100%A供A對(duì) 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線法 1.原理 配制一系列不同濃度（Ci）的對(duì)照品溶液（57份），在相同條件下分別測(cè)其吸收度(Ai)，以A為

20、縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)繪制A-C曲線，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線（又稱工作曲線）。在相同條件下測(cè)定供試品的A,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出與之對(duì)應(yīng)的C，即可求出濃度和含量（圖63）。亦可將一系列對(duì)照品溶液的C與相應(yīng)的A進(jìn)行一元線性回歸，求出回歸方程（相關(guān)系數(shù)r0.999），將供試品溶液的A代入回歸方程，算出被測(cè)成分的濃度和含量。A = a + b C標(biāo)準(zhǔn)曲線A-C曲線 2.特點(diǎn) 本法多用于可見分光光度法，由于影響顯色反應(yīng)的因素較多，有的儀器單色光純度較差，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用對(duì)照品同時(shí)操作。本法適用于批量樣品的分析，當(dāng)儀器和測(cè)定條件固定時(shí)，曲線可多次使用。 3.應(yīng)用 主要用于總成分的測(cè)定。例如中國藥典復(fù)方皂礬丸中的硫酸亞鐵，獨(dú)一味膠囊、益心酮片、消咳喘糖漿和排石顆粒中的總黃酮、桂林西瓜霜中的總生物堿的含量測(cè)定。 益心酮片總黃酮的含量測(cè)定 本品為山楂葉經(jīng)提取總黃酮制成的片劑。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)120干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品25mg置50ml量瓶中，加乙醇適量，超聲處 理使溶解，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取 20ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含無水蘆丁0.20mg）。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml、6.0 ml，分別置25ml量瓶中，各加