研究生病理學(xué)總論-局部血液循環(huán)障礙 3課件

1、 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝功能： 1）作為完整的物理屏障隔絕血 小板與內(nèi)皮下膠原接觸 2）合成并分泌多種抗凝物質(zhì)： 凝血調(diào)節(jié)蛋白（TM） 合成蛋白S 2-巨球蛋白 硫酸乙酰肝素 ：結(jié)合抗凝血 酶III,增強(qiáng)其滅活凝血酶、凝血 因子的作用 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 血栓形成的原因和條件 血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝功能： 硫酸已酰肝素(HSPG) 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 3）合成并分泌抑制血小 板粘集的物質(zhì)： ADP酶 前列腺環(huán)素（PGI2） NO內(nèi)皮依賴(lài)性血管舒張：內(nèi)皮細(xì)胞 NO平滑肌舒張?zhí)悄虿「哐獕和桶腚装彼崛毖俟嘧?dòng)

2、脈粥樣硬化酒精多種內(nèi)皮功能異常的疾病模型 BH4 超氧陰離子 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝功能： 4）生成組織因子途徑抑制物（TFPI）,與因子X(jué)a-因子VIIa-組織因子形成四聯(lián)體復(fù)合物，抑制 外源性凝血.5）生成并釋放 組織纖溶酶原激活物 尿激酶型纖溶酶原激活物6）攝取并降解對(duì)血小板聚集有促進(jìn)作用的活性胺類(lèi)物質(zhì)： 如5-HT、兒茶酚胺等合成并釋放血小板活化因子（platelet activating factor,PAF） 是目前發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的脂質(zhì)遞質(zhì)，廣泛存在各種組織，并通過(guò)與其受體結(jié)合產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng) 受體分布：血小板、中性粒細(xì)胞、白血病分化細(xì)胞

3、、T或B淋巴細(xì)、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、枯否細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等.合成： 修飾（remodeling）途徑：磷脂酶 A2和乙酰輔酶PAF 新生（denovo）途徑：乙酰轉(zhuǎn)移酶、磷酸膽堿轉(zhuǎn)移酶等PAF（1）心血管內(nèi)膜損傷 血管內(nèi)皮細(xì)胞促凝活性增高：血小板活化因子：血小板和聚集 血栓素A生成多種細(xì)胞產(chǎn)生趨化性及活化（單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞）腫瘤壞死因子、白介素、MMP-1等合成分泌參與呼吸暴發(fā)和超氧化物的形成花生四烯酸及磷酸肌醇的代謝促使糖原的分解血小板活化因子： acute lung injury，ALI（1）心血管內(nèi)膜損傷 血管內(nèi)皮細(xì)胞促凝活性增高： 合成并釋放血栓素A2(TX

4、A2) 合成并釋放組織因子 合成并表達(dá)因子V 產(chǎn)生血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 內(nèi)皮細(xì)胞抗纖溶功能增高：PAI / t-PA u-PA 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 血栓形成的原因和條件 損傷內(nèi)皮細(xì)胞的主要因素 1. 修飾低密度脂蛋白 (ox-LDL) 1 修飾低密度脂蛋白（ ox-LDL, mm-LDL，Gly-LDL） 降低EC纖溶活性(PAI-1/t-PA) 激活與炎癥相關(guān)的核因子（NF-kB AP-1） 細(xì)胞毒性 增加EC通透性 誘導(dǎo)EC表達(dá)細(xì)胞粘附分子 生長(zhǎng)因子 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 血栓形成的原因和條件 損傷內(nèi)皮細(xì)胞的主要因素 同型半胱

5、胺酸（Homocysteine Hcy） 誘導(dǎo)組織因子表達(dá) 抑制硫酸乙 酰肝素釋放 抑制C蛋白活性 抑制NO的功能 促進(jìn)血小板聚集 誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化損傷慢性感染 （肺炎衣原體） TF PAI-1 分泌增多 激活核因子NF-kB 表達(dá)VACM-1 ICAM-1 MCP-1 免疫反應(yīng) 4 高血糖 （EC 分泌IL- 8） 高血壓 吸煙 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞 (circulating endothelial cells,CEC) 是從外周血中分離的血管內(nèi)皮細(xì)胞, CEC數(shù)量的變化可反映多種病理狀態(tài)下血管內(nèi)皮受損的程度, 是目前唯一可作為活體組織中反映VEC

6、損傷的直接而特異的標(biāo)志物。 內(nèi)皮素糖尿病視網(wǎng)膜病變?nèi)焉锔哐獕壕C合征阻塞性睡眠呼吸暫停腎病綜合征出血熱維持性血液透析患銀屑病移植腎血管性排斥反應(yīng)循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞 (circulating endothelial cells,CEC) 內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial progenitor cells,EPC）功能不良與血栓形成高血壓 氧化應(yīng)激 BH4被氧化 eNOS MMP-9 EPC 動(dòng)員抑制高血壓 氧化應(yīng)激 ROS EPC老化增多高血壓 血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷 EPC消耗增加內(nèi)皮祖細(xì)胞功能不良與血栓形成 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 血栓形成的原因和素條件 （2）血流狀態(tài)的變化 = 6 Q /wh ：

7、切應(yīng)力 Q：流量 ：液體黏度 , W：流動(dòng)腔寬 h：流動(dòng)腔高梯度切應(yīng)力和均勻切應(yīng)力 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 （2）血流變化 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 血流狀態(tài)狀態(tài)的變化parallel plate flow chamber 血液性質(zhì)的變化： 血小板數(shù)量增多 血小板功能亢進(jìn) 凝血因子異常增多 抗凝物質(zhì)異常（抗凝血酶III缺乏癥） 纖溶系統(tǒng)功能下降 局部血液循環(huán)障礙血栓性疾病 二 血栓形成的原因和條件 血栓形成動(dòng)物模型 （損傷內(nèi)皮細(xì)胞）1機(jī)械性損傷法原理： 機(jī)械損傷血管內(nèi)膜后,使內(nèi)皮下細(xì)胞外基質(zhì)裸露,促使血小板與膠原接觸而被激活和粘附,啟動(dòng)

8、凝血過(guò)程,導(dǎo)致血栓形成方法 ：球囊內(nèi)皮剝脫術(shù)：常采用家兔、大鼠,麻醉后分離股動(dòng)脈,然后用球囊剝脫血管內(nèi)皮優(yōu)點(diǎn) 成功率達(dá)100% ,操作簡(jiǎn)便易行。2 電流損傷法原理：利用電刺激,破壞局部血管,使血管內(nèi)膜損傷,促使血小板粘附聚集從而形成血栓?？筛鶕?jù)需要建立冠狀動(dòng)脈、頸總動(dòng)脈、髂動(dòng)脈、等部位的血栓形成模型 冠狀動(dòng)脈內(nèi)直流電刺激法方法：分離冠狀動(dòng)脈左旋支,放入電磁流量?jī)x探頭記錄血流量。于電磁流量?jī)x探頭遠(yuǎn)端將正電極穿過(guò)左旋支管壁作刺激電極,負(fù)電極縫在胸部皮下,以形成回路。用100A直流電刺激300min即形成血栓。要點(diǎn)：血栓形成時(shí),由于血流量的減少,冠狀動(dòng)脈血流會(huì)出現(xiàn)反應(yīng)性增加而影響血栓的形成。為避免這

9、種情況的發(fā)生,可在電極刺激部位放置縮窄器,此時(shí)刺激時(shí)間可大大縮短。冠狀動(dòng)脈外直流電刺激方法： 家犬分離左冠狀動(dòng)脈前降支,用塑料片置于游離的冠狀動(dòng)脈下方,將雙型刺激電極置于塑料片上,直流電05mA范圍內(nèi)可調(diào)。當(dāng)刺激部位冠狀動(dòng)脈外膜呈黃褐色并失去彈性及遠(yuǎn)端冠脈充盈狀態(tài)消失后即停止刺激。優(yōu)點(diǎn)：此方法和冠狀動(dòng)脈內(nèi)直流電刺激法一樣,所形成的血栓與人類(lèi)動(dòng)脈血栓形態(tài)結(jié)構(gòu)類(lèi)似,其主要成分為血小板,白細(xì)胞等。該方法是國(guó)內(nèi)外常用的冠狀動(dòng)脈血栓形成方法。冠狀動(dòng)脈外電刺激比冠狀動(dòng)脈內(nèi)電刺激法血栓形成耗時(shí)短,并保持了動(dòng)脈管壁的完整要點(diǎn)：選擇合適的刺激電量3 動(dòng)脈異物法原理：動(dòng)脈管腔狹窄形成湍流以及異物的誘導(dǎo)均可激活血小

10、板,使其粘附性和聚集性增加。血小板粘附于受損內(nèi)膜下的膠原和異物,激活凝血途徑形成血栓方法：犬麻醉后, 穿刺左頸總動(dòng)脈,在導(dǎo)絲引導(dǎo)下,將固定有銅網(wǎng)圈的球囊送到左前降支中段,擴(kuò)張球囊,將網(wǎng)圈固定在冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜上,退出球囊,即可誘發(fā)血栓形成。優(yōu)點(diǎn): 本法除直接影響血小板功能外,植入的銅網(wǎng)圈也可能誘發(fā)冠狀動(dòng)脈痙攣加速血栓形成。對(duì)研究抗冠狀動(dòng)脈血栓形成所致心肌梗死和藥理學(xué)的研究及溶栓治療非常有價(jià)值4 結(jié)扎法原理 扎后引起局部血流淤滯、低氧、導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷,啟動(dòng)凝血過(guò)程而致靜脈血栓形成方法 大鼠：分離下腔靜脈,結(jié)扎下腔靜脈26小時(shí)后血栓形成，于結(jié)扎線下方剖開(kāi)管腔,取出血栓稱(chēng)重犬：手術(shù)顯露雙側(cè)股靜脈,在其

11、近、遠(yuǎn)端分別結(jié)扎,持續(xù)48小時(shí),可造成犬股靜脈血栓。該法所形成血栓為紅色血栓 該法常用于制備下腔靜脈血栓模型5 光化學(xué)法原理 ：將光敏物質(zhì)引入機(jī)體后,在特定波長(zhǎng)光線的照射下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生單線態(tài)氧等活性氧,繼而損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,引起白細(xì)胞附壁,激發(fā)血小板粘附、聚集而形成血栓。方法 常用的光敏物質(zhì)有熒光素鈉、血卟啉、二碘曙紅、伊文思藍(lán)等。用于照射的光源為單色綠光,濾去紫外光的汞燈, He2Ne激光等腸系膜微循環(huán)栓塞模型：1 由大鼠尾靜脈注入血卟啉, 2 10min后進(jìn)行腸系膜微循環(huán)觀察,選擇直徑為4050m的細(xì)靜脈作為血栓形成的靶血管用落射熒光顯微鏡100W汞燈作光源經(jīng)紫外濾光片(波長(zhǎng)為45

12、5nm) , 光斑直徑為200m,照射在靶血管上以形成血栓優(yōu)點(diǎn)：可控性強(qiáng)，利用熒光顯微鏡自身配置的光源照明簡(jiǎn)便,光照強(qiáng)度,照射區(qū)域的大小易掌握。梗塞形成過(guò)程與人類(lèi)血管內(nèi)血栓形成的病理過(guò)程相似可用計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)進(jìn)行分析,定量計(jì)算血栓大小，微血栓形成的全過(guò)程可直接通過(guò)顯微鏡進(jìn)行觀察,并可通過(guò)計(jì)算機(jī)圖采集系統(tǒng)讀入。對(duì)研究血栓形成過(guò)程及定量評(píng)價(jià)抗血小板聚集藥物的效果是十分有用的。6 化學(xué)藥物致血栓形成法（1）月桂酸鈉方法:大鼠麻醉后,分離一側(cè)頸動(dòng)脈系統(tǒng),月桂酸鈉分兩次分別經(jīng)頸外動(dòng)脈及頸總動(dòng)脈插管緩慢注入頸內(nèi)動(dòng)脈,造成大腦微動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷而致血栓形成。優(yōu)點(diǎn) 該模型無(wú)須開(kāi)顱,創(chuàng)傷小,操作簡(jiǎn)便, 死亡

13、率低。血管內(nèi)皮的損害及血栓的梗阻發(fā)生在MAC的一些小分支,MAC內(nèi)皮無(wú)損傷或血栓形成,特異性較高,且大腦梗死范圍及行為學(xué)改變較恒定。所形成血栓主要成分為纖維蛋白。其他：血栓誘導(dǎo)劑、角叉菜膠、氯化鐵、胰蛋白酶、高分子右旋糖酐7 創(chuàng)傷性肢體深靜脈血栓形成法原理：骨科深靜脈血栓大多發(fā)生于創(chuàng)傷或手術(shù)后肢體制動(dòng)、長(zhǎng)期臥床者。故該法主要是模擬創(chuàng)傷后肢體深靜脈血栓獲得性因素中最主要的危險(xiǎn)因素(創(chuàng)傷、手術(shù)、活動(dòng)減少)而致肢體深靜脈血栓形成。方法:兔麻醉后,使用以骨科髓內(nèi)釘打撥器為基礎(chǔ)擊打裝置,以7. 5能量(創(chuàng)傷能量按Ep =mgh計(jì)算)擊打兔左側(cè)大腿近端外側(cè),石膏固定左下肢于屈髖屈膝位,約7天后即形成深靜脈血栓。優(yōu)點(diǎn) 該法具有不直接損傷深靜脈、創(chuàng)傷后固定、不使用促凝血藥、血栓形成為亞急性或慢性等特點(diǎn)。能較好反映骨科臨床肢體創(chuàng)傷固定后形成深靜脈血栓的病理變化過(guò)程。小鼠肺臟微血栓形成模型雄性2 月齡Babl/ C 小鼠,體重20 g 左右制備自體血栓微顆粒:將小鼠固定于小鼠固定器中, 尾部剪毛消毒,在距鼠尾末端約0. 10. 2 cm 處將其剪斷,以無(wú)菌1 ml EP 管接取尾靜脈血約0. 1 ml ,室溫下凝固后,置于60 水浴箱中溫浴10 min 。將自體血栓凝塊轉(zhuǎn)移至無(wú)菌玻璃研磨