生化自動化與標(biāo)準(zhǔn)化

1、2022/10/141自動生化分析檢測方法的現(xiàn)狀及進(jìn)展 蚌醫(yī)一附院檢驗(yàn)科李興武2020-02-112一、生化化分析儀儀的現(xiàn)狀狀二、生化化分析儀儀的測定定方法三、校準(zhǔn)準(zhǔn)與質(zhì)控控四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排2020-02-113一、生化化分析儀儀的現(xiàn)狀狀自動化釋釋義：自動化即即由機(jī)械械化的儀儀器設(shè)備備取代人人的手工工操作過過程。2020-02-114主要組成成：計(jì)算機(jī)前處理反應(yīng)模塊塊監(jiān)測計(jì)算算模塊機(jī)械手模模塊2020-02-1152020-02-116分類：連續(xù)流動動式或管管道式分立式常用離心式干片式急診常用用2020-02-117功能：隨計(jì)算機(jī)機(jī)與電子子技術(shù)的的發(fā)展：向通用用化、全全自動、微量

2、化化、組合合式（模模塊）方方向發(fā)展展。即：測定定技術(shù)與與反應(yīng)類類型增多多、測試試速度快快、通道道多、軟軟件功能能強(qiáng)、自自動化程程度高、樣品與與試劑用用量少、人工干干預(yù)少。2020-02-118功能：采用生物物技術(shù)與與機(jī)電控控制技術(shù)術(shù)有機(jī)融融合，集集生物技技術(shù)、機(jī)機(jī)械設(shè)計(jì)計(jì)、精密密儀器、工業(yè)控控制、電電機(jī)技術(shù)術(shù)、傳感感技術(shù)、通訊技技術(shù)、計(jì)計(jì)算機(jī)技技術(shù)于一一體自動動化分析析儀工作作站2020-02-119工作站：采用模塊塊化設(shè)計(jì)計(jì)的思路路，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)良好的的可擴(kuò)展展性。結(jié)結(jié)合條碼碼技術(shù)，再通過過實(shí)驗(yàn)室室信息系系統(tǒng)與醫(yī)醫(yī)院信息息系統(tǒng)相相連，可可達(dá)到整整個數(shù)據(jù)據(jù)共享，乃至遠(yuǎn)遠(yuǎn)程共享享(如獨(dú)立實(shí)實(shí)驗(yàn)室)。2

3、020-02-1110全實(shí)驗(yàn)室室自動化化(TotalLaboratoryAutomation,TLA)是指將臨臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室相互互有關(guān)或或互不相相關(guān)的自自動化儀儀器串聯(lián)聯(lián)起來,構(gòu)成流水水線作業(yè)業(yè)的組合合,形成大規(guī)規(guī)模的全全檢測過過程的自自動化.上世紀(jì)80年代末，日本Dr.Sasaki建立了世世界上第第一個組組合式自自動化實(shí)實(shí)驗(yàn)室2020-02-1111全實(shí)驗(yàn)室室自動化化體現(xiàn)以以下幾個個方面：1.提升快速速回報(bào)結(jié)結(jié)果的能能力2.將檢驗(yàn)報(bào)報(bào)告的誤誤差減少少到最小?。簛碓丛从跇颖颈镜?0%，來源于于分析的的不到30%。3.全面提升升臨床檢檢驗(yàn)的管管理2020-02-1112生化分析析儀在國國內(nèi)的使使用

4、1.1980-1984：半自動動及小型型全自動動為主，以美國國儀器為為主，國國內(nèi)開始始研制試試劑2.1984-1990：型號多多樣，日日本儀器器增多，與自動動化儀器器配套的的試劑盒盒投入生生產(chǎn)3.1990-今：高速速高質(zhì)量量的儀器器，一些些方法學(xué)學(xué)淘汰，從大醫(yī)醫(yī)院開始始逐步建建立Lis系統(tǒng)，實(shí)實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)據(jù)共享，逐步實(shí)實(shí)現(xiàn)全實(shí)實(shí)驗(yàn)室自自動化2020-02-1113未來實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室組織織及檢驗(yàn)驗(yàn)手段將將向兩極極化發(fā)展展：一方面是是實(shí)驗(yàn)室室全自動動化或全全程自動動化，自自動化儀儀器將生生化、免免疫、血血液、尿尿液及藥藥物檢測測等合為為一體。另一方面面是實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室儀器器的小型型化，快快速、即即時、簡簡易的檢檢

5、驗(yàn)手段段，用于于現(xiàn)場檢檢驗(yàn)、床床邊檢驗(yàn)驗(yàn)、醫(yī)師師診所和和家庭。2020-02-1114一、生化化分析儀儀的現(xiàn)狀狀二、生化化分析儀儀的測定定方法三、校準(zhǔn)準(zhǔn)與質(zhì)控控四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排2020-02-1115二、生化化分析儀儀的測定定方法終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法二點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法免疫比濁濁法雙波長法法2020-02-1116一點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法的設(shè)設(shè)置：以R和S混合之前前的空氣氣空白、水空白白或試劑劑空白的的吸光度度值為測測定計(jì)算算基點(diǎn)，以反應(yīng)應(yīng)達(dá)到平平衡的吸吸光度讀讀數(shù)減去去空白讀讀數(shù)，校校準(zhǔn)曲線線通過零零點(diǎn)且成成直線，對于反反應(yīng)速度度快的多多用：如如TP、ALB等二、測定定方法2020-02-1117二

6、、測定定方法一點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法反應(yīng)應(yīng)曲線AlT（時間）AS+R(吸光度）2020-02-1118二點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法的設(shè)設(shè)置：常常用單試劑分分析：當(dāng)當(dāng)測定波波長與干干擾物的的吸收光光譜有重重疊時(如脂血、溶血、黃疸)，消除樣樣本空白白的干擾擾。如GLU500nm,Hb500nm(整個過程程OD不變),通過雙波波長可消消除其干干擾。二、測定定方法2020-02-1119二點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法的設(shè)設(shè)置：常常用雙試劑法法：除可可消除樣樣本空白白的干擾擾外，還還可消除除內(nèi)源性性物質(zhì)的的干擾。二、測定定方法2020-02-1120AmTAR2AlS+R1(吸光度）（時間）兩點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)Ax=樣本空白白A2- kAl（液量校校正系數(shù)

7、數(shù)）k=S+VlS+Vm二、測定定方法2020-02-1121免疫比濁濁法通過物質(zhì)質(zhì)對光的的散射來來測定物物質(zhì)含量量的方法法。散射比濁濁：特定定蛋白分分析儀透射比濁濁：自動動生化分分析儀通常作兩兩點(diǎn)終點(diǎn)點(diǎn)法分析析，多采采用多點(diǎn)點(diǎn)校準(zhǔn)。應(yīng)用：用用Ab測定Ag（主要為為微量蛋蛋白：IG、C、APOA/B、ASO、RF、CRP等），要要求Ab過量，此此時Ag-Ab復(fù)合物的的生成量量隨Ag的增加而而遞增，光散射射強(qiáng)度與與抗原量量成正比比。二、測定定方法2020-02-1122雙波長法法消除樣品品中對測測定有干干擾的物物質(zhì)的影影響；1.脂血：吸吸收光譜譜300600nm呈下降趨趨勢2.Hb：350nm、

8、400nm、540nm、580nm吸收峰3.膽紅素：300500nm有吸收峰峰可見它們們的吸收收峰都較較寬，且且同測定定波長有有重疊現(xiàn)現(xiàn)象。二、測定定方法2020-02-1123輔助波長長的選擇擇：根據(jù)測定定波長選選擇輔助助波長，要求干干擾物質(zhì)質(zhì)在測定定波長同同輔助波波長有相相同的吸吸光度。如鉬酸銨銨法測P3用340nm，而Hb在340及380nm均有較高高吸收峰峰，選380nm作為輔助助波長。二、測定定方法2020-02-1124連續(xù)監(jiān)測測法屬于動態(tài)態(tài)監(jiān)測法法，或叫叫速率法法，適用用酶活性性和代謝謝產(chǎn)物檢檢測，測測定產(chǎn)物物生成或或底物消消耗速度度，多有有酶參與與，此法法測酶的的活力而而不是酶

9、酶的濃度度（質(zhì)量量）。在零級反反應(yīng)期單單位時間間內(nèi)的吸吸光度變變化(反應(yīng)速率率A/min)才與酶活活力呈正正比。二、測定定方法2020-02-1125測定時間間的選擇擇：監(jiān)測時間間應(yīng)根據(jù)據(jù)所用儀儀器不影影響檢測測速度和和結(jié)果的的準(zhǔn)確性性選在時時間反應(yīng)應(yīng)進(jìn)程曲曲線的線線性期。通常：延遲時間間：30-60秒監(jiān)測時間間：120秒二、測定定方法2020-02-1126酶活力計(jì)計(jì)算有兩兩種方法法1、絕對法法：酶活活力(U/L)=A(反應(yīng)液體體積/樣品體積積) (1000/消光系數(shù)數(shù))2、相對法法：(U/L或mmol/L)=A(測定)/A(標(biāo)準(zhǔn))標(biāo)準(zhǔn)物的的活力或或濃度二、測定定方法2020-02-1127

10、1.連續(xù)監(jiān)測測法即零級反反應(yīng)速率率法,亦稱斜率率法在較長反反應(yīng)時間間區(qū)段內(nèi)內(nèi)(90-180秒)，每隔一一定時間間(530秒)讀取一次次吸光度度值，至至少讀取取4點(diǎn)，得到到3個以上A，最后算算出反應(yīng)應(yīng)速率A/min。二、測定定方法2020-02-11282.兩點(diǎn)速率率法主要用于于其反應(yīng)應(yīng)過程不不成線性性，這樣樣只注意意其反應(yīng)應(yīng)的起始始點(diǎn)和終終止點(diǎn)，而忽視視其中間間過程的的線性變變化。如：測定定苦味酸酸法測Cr，反應(yīng)過過程中VitC、丙酮酸酸、蛋白白質(zhì)等均均可與苦苦味酸生生成紅色色化合物物而干擾擾反應(yīng)，通常選選擇1min內(nèi)的兩點(diǎn)點(diǎn)進(jìn)行測測定。二、測定定方法2020-02-1129AlTAS+R1R

11、2A2(吸光度）（時間）速率法A/min=(A2-A1 )-(空白)/(t2-t1)二、測定定方法A2TAS+R1A1R2(吸光度）（時間）兩點(diǎn)速率率Ax=A2-A1tt2020-02-1131速率B法1.一個通道道內(nèi)一次次進(jìn)行兩兩項(xiàng)反應(yīng)應(yīng)相關(guān)的的速率法法測定2.用于干擾擾或及及樣品空空白自動動補(bǔ)償：在第一一反應(yīng)(干擾反應(yīng)應(yīng))一直維持持線性的的前提下下，可以以從第二二反應(yīng)(主反應(yīng))速率中扣扣除第一一反應(yīng)速速率的延延續(xù)影響響。如用于消消除膽紅紅素轉(zhuǎn)化化為膽綠綠素吸光光度下降降、對肌肌酐苦味味酸法測測定的負(fù)負(fù)干擾等等二、測定定方法2020-02-1132雙項(xiàng)同測測法：指在不同同時間向向同一個個比色

12、杯杯加入幾幾種試劑劑，(一個通道道內(nèi)一次次進(jìn)行兩兩項(xiàng)反應(yīng)應(yīng)相關(guān)的的終點(diǎn)法法)。比如同測測游離脂脂肪酸和和甘油三三酯。二、測定定方法3.空白校正正：a.Ax=某點(diǎn)吸光光度-比色杯水水空白b.Ax=(終點(diǎn)測定定吸光度度-終點(diǎn)空白白吸光度度)一(始點(diǎn)測定定吸光度度-始點(diǎn)空白白吸光度度)c.終點(diǎn)法(帶試劑空空白)=終點(diǎn)吸光光度-R1點(diǎn)吸光度度(試劑空白白)d.終點(diǎn)法(不帶試劑劑空白)=終點(diǎn)吸光光度-比色杯水水空白e.兩點(diǎn)法(自身空白白)=(加R2后測定點(diǎn)點(diǎn)讀數(shù)-R1點(diǎn)讀數(shù))-(加R2前測定點(diǎn)點(diǎn)讀數(shù)-R1點(diǎn)讀數(shù))2020-02-1133二、測定定方法2020-02-1134一、生化化分析儀儀的現(xiàn)狀狀二、

13、生化化分析儀儀的測定定方法三、校準(zhǔn)準(zhǔn)與質(zhì)控控四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排2020-02-1135三、校準(zhǔn)準(zhǔn)與質(zhì)控控校準(zhǔn)：1.包括設(shè)備備本身的的校準(zhǔn)（如波長長、溫度度、加樣樣量、空空白吸光光度等）2.測定項(xiàng)目目的校準(zhǔn)準(zhǔn)：是常常規(guī)的工工作內(nèi)容容項(xiàng)目的校校準(zhǔn)：多多數(shù)項(xiàng)目目的測定定,其濃度同同吸光度度變化基基本上成成線性關(guān)關(guān)系,選擇低、中、高高三個校校正點(diǎn)可可獲得滿滿意的準(zhǔn)準(zhǔn)確度。如果只只設(shè)置一一個校正正點(diǎn),盡量選擇擇一個中中值校正正點(diǎn)。校準(zhǔn)2020-02-1137校準(zhǔn)品的的問題：測定系統(tǒng)統(tǒng)應(yīng)包括括測定原原理、試試劑、儀儀器、校校準(zhǔn)品四四要素1.校準(zhǔn)品與與方法、試劑、儀器是是相關(guān)聯(lián)聯(lián)的，作作用是減減

14、少系統(tǒng)統(tǒng)誤差，用人血血清基質(zhì)質(zhì)，最好好采用配配套使用用，或進(jìn)進(jìn)行區(qū)域域性的統(tǒng)統(tǒng)一，有有調(diào)查顯顯示使用用相同校校準(zhǔn)液后后其不同同類型儀儀器測定定結(jié)果更更接近靶靶值2.選擇適合合的校準(zhǔn)準(zhǔn)品，包包括數(shù)目目、類型型和濃度度校準(zhǔn)3.有可能校校準(zhǔn)品應(yīng)應(yīng)溯源到到參考方方法或參參考物質(zhì)質(zhì)4.校準(zhǔn)頻度度：通常常至少6個月進(jìn)行行一次5.當(dāng)更換試試劑或不不同的批批號時；質(zhì)控反反映出異異常的趨趨勢或偏偏移；儀儀器或者者檢驗(yàn)系系統(tǒng)進(jìn)行行一次大大的預(yù)防防性維護(hù)護(hù)或者更更換了重重要部件件6.必須有校校準(zhǔn)計(jì)劃劃：有記記錄和分分析7.不同廠家家生產(chǎn)的的定值質(zhì)質(zhì)控血清清靶值之之間有的的相差較較大，提提示不能能用定值值質(zhì)控血血清代

15、替替校準(zhǔn)品品作校準(zhǔn)準(zhǔn)用2020-02-1139線性校準(zhǔn)準(zhǔn)方法K因數(shù)法兩點(diǎn)線性性多點(diǎn)線性性校準(zhǔn)2020-02-1140K因數(shù)法主要用于于酶活性性的測定定a)理論K值b)實(shí)測K值c)廠家給的的K值d)校準(zhǔn)K值校準(zhǔn)2020-02-1141校準(zhǔn)K因數(shù)法(一點(diǎn)法)t2C=K*(A2-A1)/(t2-t1)A2t1A1(S1)2020-02-1142校準(zhǔn)C2CnAxCxAsS1ABSC1As多點(diǎn)線性性（36個校準(zhǔn)品品經(jīng)線性性一次回回歸制成成工作曲曲線）2020-02-1143校準(zhǔn)非線性校校準(zhǔn)方法法用于免疫疫比濁等等測定常常用Logit-logxpExponrenalSplineLinearGraph202

16、0-02-1144校準(zhǔn)Logit-logxp(對數(shù)方法法）C1C2CxC3CnBA2A3AnAx2020-02-1145校準(zhǔn)Exp(指數(shù)涵數(shù)數(shù))C1BC2A2A3C3CxCnAxAn2020-02-1146校準(zhǔn)Spline(樣條涵數(shù)數(shù)）C1C2CxCN-1CNBC3A2A3AxAN-1AN質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控控：對儀儀器的重重復(fù)性進(jìn)進(jìn)行監(jiān)控控，采用用定值或或非定值值，做標(biāo)標(biāo)本前或或中間做做，繪圖圖，對失失控進(jìn)行行分析記記錄，查查找原因因?？芍苯觽鱾魅隠IS系統(tǒng)統(tǒng)，還可可通過網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行行遠(yuǎn)程質(zhì)質(zhì)控及數(shù)數(shù)據(jù)圖形形的上傳傳。2020-02-1148室間質(zhì)評評采用PT方案同一質(zhì)評評項(xiàng)目連連續(xù)三次次中有兩兩次P

17、T80%，則該項(xiàng)項(xiàng)目為不不滿意現(xiàn)場質(zhì)評評2020-02-1149一、生化化分析儀儀的現(xiàn)狀狀二、生化化分析儀儀的測定定方法三、校準(zhǔn)準(zhǔn)與質(zhì)控控四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排生化分析析儀多采采用一根根針吸取取試劑,在吸取不不同檢測測項(xiàng)目的的試劑之之間僅有有一個短短暫的水水沖洗的的過程,若此過程程無法達(dá)達(dá)到徹底底沖洗的的目的,則可能會會造成前前后檢測測項(xiàng)目之之間的交交叉污染染。2020-02-1151四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排ALT（IFCC），AST（IFCC）試劑中中含有高高活力LDH成分，有有可能會會對LDH的測定帶帶來干擾擾。ALP（IFCC），CK（NAC）

18、，CK-MB（NAC），CO2（PEPC），AMY（EPS）等試劑劑中含Mg2+有，可能能會對其其后Mg的測定帶帶來干擾擾。2020-02-1152CHE（BUTYRYLTHIOCHOLINE），CHO（CHODPAP），GLU（GODPAP），UA（URICASE），HBDH（DGKC）等試劑劑使用磷磷酸緩沖沖液，也也可能會會對P的測定帶帶來干擾擾。CK，CK-MB試劑中含含有GLU成分，其其分析方方法的原原理中包包含GLU的HK反應(yīng)過程程，因此此可能對對GLU的測定帶帶來干擾擾。四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排2020-02-1153四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排2020-02-1154四、測定定項(xiàng)目間間的順序序安排2020-02-1155四、測定定項(xiàng)目間間