大豆蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

1、大豆蛋白質(zhì)含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)方案原理 試樣在催化劑存在下用硫酸消解,反應(yīng)產(chǎn)物用堿中和后蒸餾。釋放出的氨被 硼酸溶液吸收,吸收液用硫酸溶液滴定,測(cè)定氮含量并計(jì)算粗蛋白質(zhì)含量。試劑 除參考物質(zhì)外,只使用經(jīng)確認(rèn)無(wú)氮的分析純?cè)噭?,試驗(yàn)用水為蒸餾水或去離 子水或同等純度水.警告：24、2.8、2ll和2.12中提到的試劑應(yīng)謹(jǐn)慎使用。硫酸鉀 (KSO)。242.2五水硫酸銅(CuSO5H 0)。42二氧化鈦 (TiO) 。2硫酸(HSO ):c(H SO)=18mol/L, p 20(H SO )=1.84g/mL。242424石蠟油 。N-乙酰苯胺(C H NO):熔點(diǎn) 114C，氮含量 10.36g/1

2、00g。89色氨酸(C H N0):熔點(diǎn) 282C，氮含量 13.72g/100g。11 12 2 22.8五氧化二磷(P0)。252.9 硼酸:水溶液 ， p 20(HBO)=40g/L， 或所使用儀器推薦的濃度。332.10指示劑:按照所使用儀器的推薦,加入一定體積的溶液A(2.10.1)和溶 液 B(2.10.2 )(例如:5 體積溶液 A 和 1 體積溶液 B) 。注 1:有可能準(zhǔn)各使用的硼酸溶液中含有指示劑(2.9+2.10)。注 2:溶液 A 和溶液 B 的比例可根據(jù)儀器進(jìn)行調(diào)整。也可以使用pH電極進(jìn)行電位滴定，PH電極需要每天校準(zhǔn)。5.10.1溶液A:200mg溴甲酚綠(C H

3、Br OS)溶于體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇21 144 5(CHOH),配制成100mL溶液。255.10.2溶液B:200mg甲基紅(C H NO )溶于體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇(CHOH),15 15 3 22 5配制成 100mL 溶液。5.11 氫氧化鈉水溶液( NaOH) : 質(zhì)量分?jǐn)?shù) 33%或 40%，含氮量少于或等于0.001%。也可以使用含氮量少于或等于 0.001%的工業(yè)級(jí)氫氧化鈉。5.12硫酸:標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，c (HSO ) =0.05mol/L24因?yàn)榱蛩嵩谶B接管中不產(chǎn)生氣泡，所以推薦用硫酸代替鹽酸。5.13硫酸銨：標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c (NH ) S0=0.05mol/L。 424

4、也可以選擇使用某一種鹽，例如( NH ) Fe( SO ) 6H0。4 2 4 2 2浮石:顆粒狀，鹽酸酸洗并灼燒。蔗糖(可選擇)：不含氮。3儀器機(jī)械研磨機(jī)。篩子: 孔徑 0.8mm。3,.3分析天平:分度值為O.OOlg。消化、蒸餾和滴定儀器：消化單元應(yīng)確保溫度的均勻性。通過(guò)使用兩種參考物質(zhì)(2.6或2.7)中任意一種進(jìn)行全過(guò)程測(cè)定來(lái)評(píng)估溫度的均勻性，并同時(shí)并同時(shí)測(cè)定回收率。蒸餾儀器也應(yīng)通過(guò)進(jìn)行已知量銨鹽的蒸餾例如 10mL 硫酸銨溶液(2.13)和檢查回收率, 回收率應(yīng)大于或等于 99.8%。4扦樣實(shí)驗(yàn)室接受的樣品應(yīng)具有代表性 , 在運(yùn)輸或儲(chǔ)藏過(guò)程中不應(yīng)受損或改變。本標(biāo)準(zhǔn)不規(guī)定扦樣方法，推

5、薦ISO6644和ISO1369O給出的扦樣方法。試樣制備如果需要, 樣品要進(jìn)行研磨 , 使其完全通過(guò) 0.8mm 孔徑的篩子。對(duì)于糧食,至少要研磨200g樣品,研磨后的樣品要充分混勻。水分測(cè)定用本標(biāo)準(zhǔn)第8章制備的部分樣品測(cè)定水分(W)。測(cè)定水分的方法要適合測(cè)定H對(duì)象(例如谷物和谷物制品按GB/T 21305測(cè)定;玉米按GB/T 10362測(cè)定?；蛘呤?用參考文獻(xiàn)10中描述的適合特殊種子的方法)。7操作步驟通則如果需要檢查是否滿(mǎn)足重復(fù)性限(9.2)的 要求 ,可按照 7.2 到 7.5 的步驟 迸行兩次獨(dú)立的測(cè)定。稱(chēng)樣依據(jù)預(yù)估含氮量稱(chēng)量試樣(第8章)，精確到O.OOlg,使試樣的含氮量在0.0

6、05g0.2g之間，最好大于0 .02 go測(cè)定7.31 消化 警告:下列操作應(yīng)在通風(fēng)良好,具有硫酸防護(hù)罩的條仵下進(jìn)行。 轉(zhuǎn)移試樣(7.2)到消解燒瓶,然后加人 :10g 硫酸鉀(2.1);0.30g五水硫酸銅(2.2);0.30g二氧化鈦(2.3)(也可以使用符合規(guī)定成分的粒狀催化劑)；20mL 硫酸(2.4)?？筛鶕?jù)儀器情況調(diào)整硫酸的加人量，但應(yīng)確認(rèn)此改進(jìn)可以滿(mǎn)足對(duì)N-乙酰 胺的回收率達(dá)到 99.5%和對(duì)色氨酸的回收率達(dá)到99.0%。小心混合以確保試樣的完全浸潤(rùn)。將燒瓶置于頂熱到420C 10C的消 化單元。從消化單元溫度再次達(dá)到420C 10C時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，至少消化2h, 然后取下自然冷卻

7、。注:建議加人浮石(2.14)作為沸騰調(diào)節(jié)器和加入如石蠟油(2.5)的消泡劑。 最短消化時(shí)間應(yīng)使用參考物質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)，因?yàn)閰⒖嘉镔|(zhì)很難達(dá)到回收率的要 求(見(jiàn)7.5)。遵循設(shè)備制造商關(guān)于蒸汽排空的建議，因?yàn)檫^(guò)強(qiáng)的吸力可能導(dǎo)致氮的損失。7.3.2 蒸餾小心地向冷卻后的消解燒瓶中加入50mL水,放冷至室溫。量取50mL硼酸(2.9) 到接收瓶中 ， 無(wú)論是使用目測(cè)比色或光學(xué)探頭 ， 均要向其中加至 10 滴指示劑(2.10)。連接好蒸餾裝置,向消解燒瓶中加入 5mL 過(guò)量的氫氧化鈉溶液完全中和所使 用的硫酸,然后開(kāi)始蒸餾。根據(jù)儀器,所用的試劑量可以變化。滴定 使用硫酸溶液(2.12)進(jìn)行滴定,滴定既可

8、以在蒸餾過(guò)程中進(jìn)行 ,也可以在蒸 餾結(jié)束后對(duì)所有蒸餾液進(jìn)行滴定。滴定終點(diǎn)的確定可以使用目測(cè)比色、光學(xué)探頭 或用 pH 計(jì)的電位分析判定?？瞻自囼?yàn)使用7.3.1 到 7.3.3 的試劑,不加試樣進(jìn)行空白試驗(yàn)。注:可以用 1g 蔗糖(2.15)代替試驗(yàn)樣品。參考物質(zhì)測(cè)試(檢查試驗(yàn))在五氧化二磷(2.8)的存在下,60C80C真空干燥參考物質(zhì)。進(jìn)行檢查試驗(yàn),試樣的最小量根據(jù)N-乙酰胺或色氨酸的含氮量決定，至少 0.15g。注:可以在參考物質(zhì)中加入1g蔗糖(2.15)。N-乙酰胺的氮回收率至少為99.5%,色氨酸的氮回收率至少為99.0%。結(jié)果表述氮含量氮含量(w),以干基質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，按式(1)計(jì)算

9、：N(V - V ) x c x 0.014 x 100100140c(V - V )/ 八0X二10(1)Nm100一m(100一)HH式中:空白試驗(yàn)滴定的硫酸溶液的量，單位為毫升(mL);0試樣滴定的硫酸溶液的量，單位為為毫升(mL)；10.014滴定1mL0.5mol/L硫酸溶液所需氮的量，單位為克(g); c滴定所使用的硫酸溶液的摩爾濃度，單位為摩爾/升(mol/L)；m一試樣的質(zhì)量，單位為克(g);試樣的水分。H 結(jié)果保留兩位小數(shù)。粗蛋白含量根據(jù)谷物或豆類(lèi)品種的不同采用相應(yīng)的換算系數(shù)(見(jiàn)附錄C,其他通常用 6.25)，乘以測(cè)定的氮含量 (11.1)值，計(jì)算得到干物質(zhì)的粗蛋白含量。 結(jié)

10、果保留兩位小數(shù)。精密度9.1 實(shí)驗(yàn)室間實(shí)驗(yàn)附錄 A 詳述了方法精密度的實(shí)驗(yàn)室間實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這些實(shí)驗(yàn)室間實(shí)驗(yàn)結(jié)果 可能不適用于附錄以外的其他濃度范圍。重復(fù)性在不同實(shí)驗(yàn)室,由不同的操作者使用不同的設(shè)備,按相同的測(cè)試方法,對(duì)同一被測(cè)試對(duì)象互相獨(dú)立進(jìn)行測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值大于重復(fù)性限r(nóng)的情況不超過(guò)5%,重復(fù)性限r(nóng)按式(2)計(jì)算：r=(0.0063X3 ) X2.8(2)P式中：3 以干基產(chǎn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示的樣品粗蛋白含量(見(jiàn)表B.1)。P對(duì)于粗蛋白含量在7%80%的產(chǎn)品，見(jiàn)表A.1和圖A.1。再現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室， 由不同的操作者使用不同的設(shè)備,按相同的測(cè)試方法， 對(duì)同一被測(cè)對(duì)象相互獨(dú)立進(jìn)行

11、測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值大于再現(xiàn)性限R的情況不超過(guò)5%,再現(xiàn)性限R按式(3)計(jì)算：R=(0.014X3 ) X2.8(3)P對(duì)于粗蛋白含量在7%80%的產(chǎn)品，見(jiàn)表A.1和圖A1。臨界差9.4.1 同一實(shí)驗(yàn)室兩組測(cè)定結(jié)果的比較在重復(fù)性條件下進(jìn)行兩組測(cè)定的結(jié)果平均值之間的臨界差按式 (4)計(jì) TOC o 1-5 h z CDr=1.98XS =1.98X (0.063X3 )=0.01247X3 (4)rPP兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室間兩組測(cè)定結(jié)果的比較在不同實(shí)驗(yàn)室在重復(fù)性條件下進(jìn)行兩組測(cè)定的結(jié)果平均值之間的臨界CDR = 2.8 yS 2 CDR = 2.8 yS 2 - 0.5 S 2 = 2.8x(0.014 x )2 0.5 x (0.0063 x )2RrPP=0.03716X3(5)P測(cè)試報(bào)告測(cè)試報(bào)告應(yīng)規(guī)定:完整的識(shí)別樣品所需的全部信息；如果已知取樣方法， 應(yīng)說(shuō)明使用的扦樣方法;采用的參考本標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定方法；使用的換箅系數(shù) (見(jiàn) 11.2中注)；所有本標(biāo)淮中沒(méi)有具體說(shuō)明的、或者被認(rèn)為是可選擇的，以及可能 影響測(cè)試結(jié)果的操作細(xì)節(jié)