第25章 病毒感染的檢查方法與防治原則課件

1、病毒感染的檢查方法與防治原則第25章 1第一節(jié) 病毒感染的檢查2病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體 病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶 電鏡直接觀察 光鏡檢查包含體 分離培養(yǎng)3一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學(xué)診斷采雙份血清4二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動(dòng)物接種（animal inoculation）5（一）病毒的分離培養(yǎng) 1.細(xì)胞培養(yǎng) 單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell cultu

2、re） 分類(lèi) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 原代細(xì)胞（primary cell）細(xì)胞種類(lèi) 二倍體細(xì)胞（diploid cell） 傳代細(xì)胞系（continuous cell line）7病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞8特點(diǎn)：對(duì)多種病毒敏感 生長(zhǎng)能力有限, 獲取成本高 可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)10(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng) 體外分裂50100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點(diǎn)：對(duì)多種病毒敏感 不帶異種蛋白(人源性) 不帶病毒，無(wú)致瘤潛能 可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)11(3) 傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：對(duì)多種病毒敏感性高 繁殖能力

3、高，傳代時(shí)間長(zhǎng) 有致癌危險(xiǎn)，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)122、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜14151病毒增殖鑒定 (1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE ） 細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鑒定 1718細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)19麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效

4、應(yīng)(cytopathic effect, CPE)20形成包涵體(inclusion body)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)21腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)紅細(xì)胞表面HA受體22(4)細(xì)胞代謝改變 細(xì)胞代謝變慢 pH變化減慢242.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘類(lèi)病毒）， 對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大25(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(gel immuno- diffusion test) 多種病毒鑒定3.病

5、毒血清學(xué)鑒定274.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴(kuò)增 核酸雜交 基因芯片 基因測(cè)序28（三）病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒死病毒）2.蝕斑形成試驗(yàn) （plaque formation test） 3.50組織細(xì)胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病毒量29(四) 新病毒的鑒定核酸類(lèi)型的測(cè)定 理化性狀的檢測(cè) 形態(tài)學(xué)鑒定 血清學(xué)鑒定 基因測(cè)序和生物對(duì)比30三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚目前尚無(wú)分離此病毒的方法或難以分離的病毒為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查

6、等311.中和試驗(yàn)（neutralizing test）病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時(shí)間長(zhǎng)應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查 臨床診斷少用322.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) （complement fixation test） 用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測(cè)病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體 特點(diǎn)：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快 應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。33四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗體檢測(cè)（IgM）34（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查 普通光學(xué)顯微鏡檢查 包涵體35（二）病毒成分檢測(cè)1.病毒蛋白抗原檢測(cè) 免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測(cè) 核酸擴(kuò)增技術(shù) 核酸雜交技術(shù)

7、 基因芯片技術(shù) 基因測(cè)序36（三）早期抗體檢測(cè) 可診斷急性感染 特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒 EBV早期抗原抗體 核心抗原抗體 早期抗原的抗體 衣殼抗原抗體37第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防 微生物及其代謝產(chǎn)物 生物制品 動(dòng)物免疫血清（biological products） 免疫細(xì)胞 細(xì)胞因子 防治和診斷感染性疾病38滅活疫苗:乙型腦炎疫苗、狂犬病疫苗、流感滅活疫苗等活疫苗:痘苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、流行性腮腺炎疫苗、RV疫苗、黃熱病疫苗以及一些聯(lián)合疫苗等重組載體疫苗 亞單位疫苗:用化學(xué)試劑裂解病毒，提取其包膜或衣殼上的亞單位，除去其核酸以此制成疫苗。目前使用的有流感V、腺V 和HBV等重組疫苗 核酸疫苗 一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品39二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品 免疫球蛋白 血清丙種球蛋白 細(xì)胞免疫制劑 IFN-、 細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞 LAK細(xì)胞 40第三節(jié) 病毒感染的治療 核苷類(lèi)藥物 非核苷類(lèi)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 蛋白酶抑制劑 其他抗病毒藥物 干擾素和干擾素誘生劑中草藥 基因治療劑 治療性疫苗 抗病毒化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme） 41核苷類(lèi)藥物作用機(jī)制 HSV/VZV 無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷（NA）病毒胸苷激酶 NA一磷酸宿主細(xì)胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖環(huán)3-OH基）病毒DNA聚