氣單胞菌屬 AeromonasKluyver and van Niel的檢驗

1、氣單胞菌屬 AeromonasKluyver and van Niel的檢驗氣單胞菌可分為運動性（motile）或嗜溫性（mesophilic）及非運動性或嗜冷性兩大類，前者以嗜水氣單菌為代表，包括溫和、豚鼠、凡隆、舒伯特、簡達及易損氣單胞菌等，其致病作用無明顯區(qū)別。臨床意義：氣單胞菌為水中常居菌 可引起哺乳動物（如人、鳥類等）和冷血動物（如鮭、魚、蛇等）的感染 在人類主要引起腸道內(nèi)感染和腸道外感染氣單胞菌常引起5歲以下兒童和成人的腸道內(nèi)感染，是夏季腹瀉的常見病原菌之一，其主要的致病物質(zhì)為溶血毒素和細(xì)胞毒素等。腸道外感染主要為皮膚和軟組織感染，與外傷后傷口接觸污染的水有關(guān)。2、形態(tài)及培養(yǎng)特性G

2、-，從直桿菌到接近球狀。單個，成對或短鏈。通常以一根極生鞭毛運動（固體培養(yǎng)幼齡時具周生鞭毛）。兼性厭氧。具呼吸和發(fā)酵兩種代謝類型。最適生長溫度22-28；多數(shù)種可在37生長，其它種最高生長溫度38-41，最低0-5，pH5.5-9.0。氣單胞菌形態(tài)特征：革蘭陰性短桿菌，有時呈球狀 絕大多數(shù)有極端單鞭 動力陽性兼性厭氧 營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上可以生長，形成灰白色、光滑、濕潤、凸起，2mm大小的菌落，在TCBS培養(yǎng)基上不生長。在0c-45c范圍內(nèi)均可以生長，根據(jù)生長溫度的不同，可分為嗜冷菌（37c以上不生長）和嗜溫菌（10c-42c之間生長）兩大類。嗜水和殺鮭氣單胞菌與霍亂弧菌一樣，存在所謂

3、活的非可培養(yǎng)（viable but nonculturable ,VBNC）狀態(tài)，實際上是一種休眠狀態(tài)，其菌體縮小成球狀，耐低溫及不良環(huán)境，常規(guī)培養(yǎng)不生長。溫度回升且獲得生長所需的營養(yǎng)條件時，細(xì)菌回復(fù)到正常狀態(tài)，重新具有致病力。3、生化性狀對葡萄糖和其他糖類能產(chǎn)酸，常產(chǎn)氣。氧化酶和觸酶陽性。通常精氨酸水解酶陽性，鳥氨酸脫羧酶和苯丙氨酸脫氨酶陰性，尿酶陰性。明膠酶和DNA酶皆陽性。還原硝酸鹽。多數(shù)種能發(fā)酵的糖包括麥芽糖、D-半乳糖和海藻糖。對抗菌抑制劑2，4二氨基6，7異丙基喋啶（O/129）不敏感。種屬鑒定：氧化酶陽性、觸酶陽性、硝酸鹽還原試驗陽性、發(fā)酵葡萄糖和其它碳水化合物產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。4

4、、致病性及毒力因子具有毒力因子的菌株才有致病性。其毒力因子有3類：一是胞外產(chǎn)物，如毒素和蛋白酶；二是粘附素，如S蛋白、4型菌毛和外膜蛋白等；三是鐵載體。5、微生物學(xué)診斷血平板、麥康凱平板或TSA培養(yǎng)基等可直接分離氣單胞菌。從動物腹瀉糞便分離則需采用RS選擇培養(yǎng)基。分離菌為革蘭氏陰性，氧化酶和觸酶陽性。同時可憑O129等其它關(guān)鍵生化指標(biāo)進行判定。分離株是否有致病性，則還需檢測胞外蛋白酶和溶血素等毒力因子，可用脫脂奶平板和血平板劃線培養(yǎng)，或用相應(yīng)抗體建立的ELISA試劑盒檢測。6 、常見種類嗜水氣單胞菌（A.hydrophila） 殺鮭氣單胞菌（A.salmonicida）（一）嗜水氣單胞菌（A.

5、 hydrophila）1 形態(tài)與染色特性G-, 兩端鈍圓、直或略彎的短小桿菌，0.3-1.01.0-3.5 m，多數(shù)單個存在，少數(shù)雙個排列。通常菌體一端有單鞭毛，幼齡培養(yǎng)在菌體四周形成鞭毛，但對數(shù)生長期過后，該細(xì)胞又呈極生單鞭毛。無莢膜，不形成芽孢。2 培養(yǎng)特性(1) 兼性厭氧。在普通瓊脂、TSA、麥康凱瓊脂、SS瓊脂上生長良好，血平板溶血，TCBS或6% NaCl中不生長，對弧菌抑制劑O/129不敏感，一般不發(fā)酵乳糖。(2) 普通瓊脂平板菌落: 直徑2-3mm, 圓形、表面光滑、邊緣整齊、中央隆起、灰白色、半透明。(3) 在溴化十六烷基三甲銨瓊脂上不生長。在TSA平板28培養(yǎng)18-24h，

6、菌落呈淡黃褐色，無水溶性色素。(4) 最適生長溫度28，最高38-41，一些菌株可在5生長，pH 6-11(7.2-7.4)，鹽濃度0-4%(0.5%)。3 生化性狀水解淀粉和精氨酸、發(fā)酵甘露醇、赤蘚糖醇、棉子糖、果膠糖：+苯丙氨酸脫氨酶、鳥氨酸脫羧酶、MR、V.P、氧化酶、觸酶試驗：+4 抵抗力水中常見菌，一般夏季較多、冬季減少。是魚腸道菌群之一。魚和動物分離株較環(huán)境分離株的蛋白質(zhì)分解能力強。對熱抵抗力較差，60-65,30min-1h死亡。 對氯霉素、土霉素、氟苯尼考、鏈霉素、四環(huán)素、磺胺嘧啶，硝基呋喃等具抗性的菌株被篩選。從這些菌株分離到相應(yīng)可轉(zhuǎn)移抗藥性質(zhì)粒。5 抗原性運動性氣單胞菌有O

7、、H和K抗原運動性氣單胞菌與殺鮭氣單胞菌及其他屬細(xì)菌也存在共同抗原成分6 致病性與致病因子嗜水氣單胞菌對多種魚、兩棲類及爬蟲有致病性，可引起鰻鱺赤鰭病、紅點病、爛鰓??；鯉魚和金魚豎鱗?。祸桏~打印??；青魚和草魚腸炎；青魚癤瘡??；香魚紅口??；甲魚“紅脖子病”；蛙紅腿?。簧邤⊙『涂谘?。此外，還可導(dǎo)致魚類敗血癥。稱為運動性氣單胞菌敗血病。感染人類引致急性胃腸炎，是食品衛(wèi)生檢驗對象。本菌主要通過腸道感染，魚體受傷或寄生蟲感染時可經(jīng)皮膚和鰓感染，并與水溫、有機質(zhì)含量，飼養(yǎng)密度等密切相關(guān)。水溫24-28死亡率較高，10以下不發(fā)病。致病因子(1)毒素:包括溶血素及腸致病性毒素。溶血素分和2種。 溶血素能引

8、起家兔注射局部的硬結(jié)、毛細(xì)血管充血和皮膚壞死，對Hela細(xì)胞、綠猴腎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和Y1腎上腺細(xì)胞具有毒性，可致動物敗血性腸炎。 溶血素毒性較強，靜注0.4g即可導(dǎo)致小鼠死亡，引起家兔皮膚壞死。 腸致病性毒素可分為3種，即霍亂樣腸毒素、細(xì)胞興奮型腸毒素和細(xì)胞毒腸毒素。(2)蛋白酶: 酪蛋白酶、纖維蛋白酶、膠原酶、葡萄球菌溶解素等,這些均與本菌的毒性有關(guān)。(3)外膜蛋白：與細(xì)菌的黏附相關(guān)。7 微生物診斷 細(xì)菌分離培養(yǎng)：TSA；生化試驗：一般不分解乳糖，對O/129不敏感；葡萄糖產(chǎn)氣，發(fā)酵甘露醇、蔗糖，利用阿拉伯糖，水解七葉苷/水楊苷，鳥氨酸脫羧酶陰性。 致病因子：檢測胞外蛋白酶、溶血素、外膜蛋

9、白等；血清學(xué)檢查：玻片/試管/微量凝集；動物感染試驗。（二）殺鮭氣單胞菌（A. salmonicida1 形態(tài)與染色特性 G-短小桿菌，長度不到寬度的兩倍，0.8-1.01.0-1.8m，通常成雙、短鏈或成叢狀排列。無鞭毛、無動力、不形成芽孢和莢膜。2 培養(yǎng)特性兼性厭氧，生長需精氨酸和蛋氨酸。普通瓊脂上22培養(yǎng)48h后，形成圓形、隆起、邊緣整齊、半透明、松散菌落。多數(shù)菌株在含酪氨酸和苯丙氨酸的TSA、FA(Furunculosis agar,癤瘡病瓊脂)上產(chǎn)生水溶性褐色素，但厭氧下不能產(chǎn)生色素。血瓊脂上快速溶血，7天后菌落變成淡綠色。生長溫度5-35(22-25)，生長pH6-9(7)，鹽濃度

10、0-3%3 生化特性阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、糊精、精氨酸水解：+山梨糖、山梨醇乳糖、棉子糖、纖維二糖：-KCN肉湯、7.5% NaCl營養(yǎng)肉湯生長：-氨基甲酰磷酸激酶脂酶、腺嘌呤3, 2-單磷酸激酶：+脲酶、鳥氨酸脫羧酶（ODC）和連四硫酸鹽還原酶：-4 抵抗力本菌在蒸餾水存活4d至2w，滅菌河水28d（20-25）、滅菌濕土40d（20-30）不死亡。強毒株在含有機質(zhì)淡水中可存活15w，在死魚腎臟存活28d（4）、在海水中10d內(nèi)死亡。對土霉素、四環(huán)素、氯霉素、萘啶酸、喹啉酮、噁啉酸等敏感。許多抗生素只能抑制其繁殖，不能將其殺滅。5 抗原性殺鮭氣單胞菌各亞種間具有共同的O抗原。此外，不產(chǎn)色

11、亞種還具有亞種特有的抗原。 殺鮭氣單胞菌與本屬的其他種也存在共同抗原成分。6 致病性與致病因子 致病性：主要感染鮭科魚類，為鮭科魚類癤瘡病病原。細(xì)菌通過患病魚、帶菌魚和污染水水平傳播。入侵門戶主要是受傷皮膚，也可通過胃腸道和鰓感染。致病因子本菌病因與細(xì)胞壁表面的A層(additional cell surface layer; A-layer)和胞外產(chǎn)物(extracellular products; ECPs)有關(guān)。有毒菌株的細(xì)胞壁都有A層，主要由50kD的蛋白質(zhì)組成，因此又稱A蛋白層。A蛋白的氨基酸序列類似于大腸桿菌的K88菌毛和胎兒彎桿菌的微莢膜，可吸附于宿主細(xì)胞。此外，還可幫助該菌獲取

12、鐵離子，避免血液中補體的溶解和吞噬細(xì)胞的吞噬。有A層的菌體懸浮于鹽溶液時往往產(chǎn)生自凝現(xiàn)象。這些菌株可凝集鮭鱒魚類的紅細(xì)胞，但不凝集鯉科魚類和哺乳動物的紅細(xì)胞。殺鮭氣單胞菌的胞外產(chǎn)物（ECP）至少由25種蛋白構(gòu)成。包括溶血素、鮭溶解素（salmolysin）、殺白細(xì)胞素、細(xì)胞性糖蛋白及酪蛋白酶、骨膠原酶等。7 微生物學(xué)檢查（1）涂片鏡檢 取病魚的血液、臟器等涂片，革蘭氏染色，可見革蘭氏陰性的短桿菌。（2）分離培養(yǎng) 取病魚腎臟或體表潰瘍的病健交界處組織，接種于TSA或FA平板，20-28培養(yǎng)，檢查有無產(chǎn)褐色素的菌落并進行革蘭氏染色。（3）對苯二胺試驗 將1%對苯二胺溶液傾注在上述平板中培養(yǎng)后形成的菌落上，殺鮭氣單胞菌形成的菌落在90s內(nèi)，從褐色變成黑色。（4）血清學(xué)檢查