知識(shí)總結(jié)：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)教材解讀

1、PAGE7課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)教材內(nèi)容解讀要點(diǎn)1培養(yǎng)基（1）培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。（2）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長(zhǎng)還需要適宜的L）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。要點(diǎn)4純化大腸桿菌（1）微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃

2、線的操作。（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。（5）平板劃線法操作步驟：將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。將試管口通過(guò)火焰。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。將試管通過(guò)火焰，并塞上棉塞。左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。灼燒接種環(huán)，

3、待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（6）涂布平板操作的步驟：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。要點(diǎn)5菌種的保存（1）對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。臨時(shí)保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4的冰箱中保藏。以后每36缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于需要

4、長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20要點(diǎn)6實(shí)驗(yàn)安排及注意事項(xiàng)（一）從菌種保藏中心購(gòu)買菌種后，教師首先需要用平板劃線法純化培養(yǎng)所得菌種，并根據(jù)學(xué)生小組的數(shù)目，準(zhǔn)備好數(shù)個(gè)平板。（二）第1課時(shí)完成基礎(chǔ)知識(shí)的教學(xué)，學(xué)習(xí)各種操作方法，并制備培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌所需要的時(shí)間較長(zhǎng)，因此需要利用課下時(shí)間完成。課下完成后，再于第2課時(shí)完成大腸桿菌的純化培養(yǎng)。此后安排學(xué)生連續(xù)觀察記錄34d。（三）配制培養(yǎng)基時(shí)，教師需要提示學(xué)生按照每個(gè)培養(yǎng)基消耗1520mL的量來(lái)估算總用量。全班同學(xué)的培養(yǎng)基可以集中起來(lái)，分批滅

5、菌。（四）滅菌后，培養(yǎng)基冷卻到55后應(yīng)及時(shí)進(jìn)行倒平板操作。如果不能及時(shí)操作，需要將培養(yǎng)基放到55（五）如果打算做本專題的第2或第3課題，建議此課題不僅要練習(xí)平板劃線操作，還要練習(xí)稀釋涂布平板法操作。為此，教師需要提前1天用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，培養(yǎng)一夜后，于第2天將培養(yǎng)液分發(fā)到各小組。（六）實(shí)驗(yàn)后，所有用過(guò)的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液等都需要統(tǒng)一進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后再丟棄，否則將會(huì)造成環(huán)境污染。要點(diǎn)7疑難解答（1）生物的營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)是指生物攝取、利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元

6、素、水、二氧化碳等三類。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類。（2）確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天，無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（3）無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。要點(diǎn)8答案與討論（一）旁欄思考題1無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。2請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、

7、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。（二）倒平板操作的討論1培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3平板冷凝后，為什么要將平板倒置答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎為什么答

8、：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。（三）平板劃線操作的討論1為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎為什么答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落