項目九 細胞培養(yǎng)技術 課件

項目九細胞培養(yǎng)技術項目導入：

Vero細胞和狂犬病毒的培養(yǎng)工藝DMEM培養(yǎng)基胎牛血清其他成分錐形瓶逐級放大培養(yǎng)加堿（碳酸氫鈉）加糖（葡萄糖）灌注培養(yǎng)液微載體5L種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)液50L生物反應器接種狂犬病毒出液口收獲病毒動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、動物細胞核移植等動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。提問：植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細胞雜交動物細胞工程常用的技術手段有哪些？動物細胞培養(yǎng)和核移植技術動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。1、選材：

動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。在進行動物細胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要是蛋白質。動物細胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。2.分散成單個細胞4.過程：細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系5.如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？多數(shù)組織細胞固定在表面生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質改變動物細胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細胞順利的生長增殖動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清（一）動物細胞培養(yǎng)動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境2.動物細胞培養(yǎng)技術的應用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據(jù)（二）動物細胞融合1.過程：誘導方式物理法化學法生物法：滅活的病毒仙臺病毒紫外線喪失感染性（不感染細胞）保留融合活性（誘導細胞融合）（二）動物細胞融合1.過程：滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）(三）單克隆抗體抗體1?？乖瓌游矬w內刺激效應B抗原動物體內刺激效應B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應B細胞不能增值產(chǎn)生大量抗體2。特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應不夠靈敏(三）單克隆抗體設計方案：一個B淋巴細胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖-化學性質單一、特異性強的抗體。雜種細胞？

？誘導其融合的方法有哪些？抗原效應B細胞(三）單克隆抗體2.制備過程：除通過雜交瘤細胞產(chǎn)生單克隆抗體外，還有什么方法？3.單克隆抗體的應用：①在基礎理論研究中具有重要意義②在疾病診斷、治療和預防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。③生物導彈(三）單克隆抗體總結一種誘導細胞融合的新方法一種新細胞滅活病毒雜交瘤細胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢二、動物體細胞核移植技術:將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植胚胎細胞核移植體細胞核移植（難度高）受體細胞：MⅡ期的卵母細胞多莉與“母親”克隆動物的研究意義1.克隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物體細胞核移植技術存在的問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調等。6.世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細胞白面綿羊卵腺細胞核重組細胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細胞工程ａ時，所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細胞也具有

。⑸請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義：。1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細胞A鞏固練習2..動物細胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服遠緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細胞3.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）誘導融合的方法完全相同B.所用的技術手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細胞BD4.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成D1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是--------------------（）

A．細胞系B．細胞株C．原代細胞D．傳代細胞2、動物細胞工程技術的基礎是------（）

A.動物細胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動物細胞培養(yǎng)

AD3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異

B．具有更強的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強D4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）

A.培養(yǎng)基不同；

B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；

C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能；

D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株。A作業(yè)：1、在動物細胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？

胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞間的膠原纖維和細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞，從而使每個細胞都能與培養(yǎng)液充分接觸。2、在動物細胞培養(yǎng)過程中為什么不用胃蛋白酶？

胰蛋白酶最適PH值為7.2

—

8.4

胃蛋白酶最適PH值為1.5左右