副溶血性弧菌檢驗(yàn)課件

GB4789.7-2013

副溶血性弧菌檢驗(yàn)1GB4789.7-2013

副溶血性弧菌檢驗(yàn)1一、概述二、生物學(xué)特性三、檢測(cè)方法2一、概述2副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus于1950年從日本一次暴發(fā)性食物中毒中發(fā)現(xiàn)。該菌存在于近海海水、海底沉積物和魚類、貝殼等海產(chǎn)品中。在37℃、pH7.7、3～4%NaCl環(huán)境中生長(zhǎng)最好。一、概述3副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus于概述本菌嗜鹽畏酸怕冷，在無鹽環(huán)境不能生長(zhǎng)，3%～6%鹽水繁殖迅速，低于0.5%或高于10%鹽水中停止生長(zhǎng)。對(duì)酸敏感，在2%醋酸或50%食醋中1min即死亡。不耐熱，56℃5min可殺死，90℃1min滅活。對(duì)高鹽濃度抵抗力甚強(qiáng)。5℃以下容易死亡。4概述本菌嗜鹽畏酸怕冷，在無鹽環(huán)境不能生長(zhǎng)，3%～6%鹽水分類：屬弧菌科(Vibrio)，弧菌屬。分布：主要存在于近海岸的海水、海底沉積物和魚類、蝦類、貝類、牡蠣等海產(chǎn)品中。人多因食用被本菌污染而又未煮熟的海產(chǎn)品和其他食品而引起中毒。

5分類：屬弧菌科(Vibrio)，弧菌屬。5流行病學(xué)季節(jié)分布：8-9月為高峰期中毒食品：主要為海產(chǎn)品、其次為水產(chǎn)制品、淹制品、咸菜及污染食品地區(qū)分布：沿海地區(qū)居多臨床癥狀：主要有腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱潛伏期：10小時(shí)左右6流行病學(xué)季節(jié)分布：8-9月為高峰期6致病作用主要引起胃腸炎，最常見的是食物中毒和感染性腹瀉。由于病菌在食品中大量繁殖，侵入腸道后繼續(xù)繁殖并釋放出大量腸毒素，引起劇烈的胃腸炎。7致病作用主要引起胃腸炎，最常見的是食物中毒和感染性腹瀉。由于二、生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及染色特征革蘭氏陰性桿菌，無芽孢0.3~0.7×2~6μm

兩端濃染呈多形態(tài)（棒狀、弧狀、球狀、卵圓形等）排列不規(guī)則液體培養(yǎng)基生長(zhǎng)單鞭毛，固體培養(yǎng)基常有周生鞭毛（側(cè)毛）8二、生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及染色二、生物學(xué)特性

---培養(yǎng)特性需氧兼性厭氧在含NaCl3-4%的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好無鹽和NaCl10%的培養(yǎng)基中均不生長(zhǎng)最適培養(yǎng)溫度為：30--37℃最適pH范圍：pH7.4-pH8.29二、生物學(xué)特性

---培養(yǎng)特性需氧兼性厭氧在固體培養(yǎng)基上，菌落通常隆起，圓形半透明，表面光滑、濕潤(rùn)、一般不產(chǎn)生色素。在血平板和嗜鹽性平板上，菌落生長(zhǎng)良好。肉湯、瓊脂、生化管都應(yīng)含有3-4%的NaCl含量。10在固體培養(yǎng)基上，菌落通常隆起，圓形半透明，表面光滑、濕潤(rùn)、一神奈川現(xiàn)象(Kanagawaphenomenon，KP)--在特定條件下，某些菌株在含高鹽(7％)的人O型血球或兔血球及以D甘露醇作為碳源的我妻瓊脂平板上產(chǎn)生β溶血的現(xiàn)象神奈川現(xiàn)象與本菌的致病性密切相關(guān)11神奈川現(xiàn)象(Kanagawaphenomenon，KP)血清分型O抗原（耐熱的菌體抗原）

O1-O13共13種K抗原型（莢膜抗原）

K1-K71共65種H抗原（鞭毛抗原），無特異性12血清分型O抗原（耐熱的菌體抗原）12

三、檢測(cè)程序食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)

GB4789.7-201313三、檢測(cè)程序食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)副溶血性弧菌檢GB4789.7-201314GB4789.7-201314

1、樣品制備食品樣品魚類：表面組織、腸、鰓貝類：全部?jī)?nèi)容物（貝肉和體液）甲殼類：動(dòng)物的中心部分，包括腸、鰓水產(chǎn)制品如為帶殼貝類或甲殼類，應(yīng)先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無菌操作打開外殼，按上述要求取相應(yīng)部分。15

1、樣品制備食品樣品152、增菌--3%氯化鈉堿性蛋白胨水

定性--取樣品25g（mL），加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225mL。

定量--選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3支含有9mL3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1mL。置36℃±1℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)8h～18h。162、增菌--3%氯化鈉堿性蛋白胨水定性--取樣品3、分離—TCBS平板、弧菌顯色平板對(duì)所有顯示生長(zhǎng)的增菌液，用接種環(huán)在距離液面以下1cm內(nèi)沾取一環(huán)增菌液，于TCBS平板或弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。一支試管劃線一塊平板。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。173、分離—TCBS平板、弧菌顯色平板對(duì)所有顯示生長(zhǎng)的增菌液，TCBS平板上典型特征典型的副溶血性弧菌在TCBS上，呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落。18TCBS平板上典型特征典型的副溶血性弧菌在TCBS上，呈TCBS平板上典型特征19TCBS平板上典型特征19科瑪嘉弧菌顯色平板--紫色菌落20科瑪嘉弧菌顯色平板--紫色菌落204、純培養(yǎng)挑取3個(gè)或以上的可疑菌落，劃線3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。5、初步鑒定氧化酶試驗(yàn)涂片鏡檢3%氯化鈉三糖鐵嗜鹽性試驗(yàn)214、純培養(yǎng)21底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變，有動(dòng)力22底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變，有動(dòng)力226、確定鑒定甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)--含3%氯化鈉的培養(yǎng)基賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)V-P試驗(yàn)ONPG試驗(yàn)—采用3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行副溶血性弧菌：甘露醇+賴氨酸脫羧酶+V-P-ONPG-236、確定鑒定甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)--含3%氯化鈉的培養(yǎng)基23ONPG試驗(yàn)挑取1滿環(huán)新鮮培養(yǎng)物接種于0.25mL3%氯化鈉溶液，在通風(fēng)櫥中，滴加1滴甲苯，搖勻后置37℃水浴5min。加0.25mLONPG溶液，36℃培養(yǎng)觀察24h。陽性結(jié)果呈黃色。陰性結(jié)果則24h不變色。

ONPG--鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷24ONPG試驗(yàn)挑取1滿環(huán)新鮮培養(yǎng)物接種于0.25mL3%可選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。API20E25可選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系7、選做試驗(yàn)血清學(xué)分型--11種O抗原血清神奈川試驗(yàn)--我妻氏血瓊脂平板267、選做試驗(yàn)血清學(xué)分型--11種O抗原血清268、結(jié)果與報(bào)告根據(jù)檢出的可疑菌落生化性狀，報(bào)告25g（mL）樣品中檢出副溶血性弧菌。278、結(jié)果與