酶聯(lián)免疫在食品檢測中的應用

酶聯(lián)免疫在食品檢測中的應用第1頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三

1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者

VanWeerman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即:

酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linkedImmunosorbent

Assay,ELISA)。

第2頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三ELISA現(xiàn)在已成為目前分析化學領域中的前沿課題，它將酶促反應的高效率和免疫反應的高度專一性有機地結合起來，可對各種微量有機物含量進行測定。第3頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三酶聯(lián)免疫吸附試驗

(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)用酶標記抗原或抗體檢測未知抗體或抗原的方法。1.定義2.分類間接法（IndirectELISA）：將已知抗原吸附于固相載體，酶標記二抗檢測液相中未知抗體雙抗體夾心法（SandwichELISA)：將已知抗體吸附于固相載體，酶標記一抗檢測液相中的可溶性抗原競爭法（CompetitiveELISA)

：將已知抗體或抗原吸附于固相載體，酶標記抗原或抗體檢測液相中的可溶性抗原或抗體第4頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三3.原理（以雙抗體夾心法為例）：顯色抗體待測抗原酶標抗體EE第5頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三第6頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三ELISA基本原理（1）利用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶建立關聯(lián)。（2）通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。

第7頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三ELISA測定中酶的作用由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定具有極高的靈敏度。

第8頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三ELISA技術在食品分析中的應用近年來，ELISA因其操作程序的規(guī)范化、簡單化和檢測的高靈敏性，在農藥殘留、動物違禁藥物殘留、有害細菌、有機物污染、生物毒素、食品添加劑和人畜共患疾病病原體的快速檢測和分析等食品安全性檢測領域正逐步推廣應用。第9頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三毒素檢測

真菌毒素是真菌產生的次級代謝產物，有十幾種對人類危害較大，它們具有毒性強和污染頻率高的特點。目前利用合成單克隆抗體的方式，幾乎所有重要真菌毒素如伏馬毒素、赭曲毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯酮、展青霉素、黃曲霉毒素（AFT）等的ELISA檢測方法均已建立。另外該方法也正在被廣泛地應用于各種藻類和貝類毒素的檢測。第10頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三

細菌污染檢測目前利用ELSIA檢測食品中的有害細菌數量有許多種途徑，其中通過制備單克隆抗體分析食品中細菌的酶聯(lián)免疫測定技術研究最多，檢測結果準確可靠。ELISA法可用于檢測食品中沙門氏菌、軍團菌、大腸桿菌、李斯特菌及金黃色葡萄球菌等致病微生物。另外，ELISA在寄生蟲的檢測中也有應用，如：豬弓形蟲。第11頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三農藥殘留檢測酶聯(lián)免疫測定已成為許多國際權威分析機構如AOAC分析農藥殘留的首選方法。迄今為止，應用酶聯(lián)免疫測定檢測食品中的殘留農藥主要為除草劑、殺蟲劑和殺菌劑。例如草甘膦的ELISA檢出下限為0.07μg/mL，與色譜法測定的結果一致。第12頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三肉類品質檢測

ELISA在肉類食品品質檢測中的應用主要包括加熱終溫判定分析和摻入異種肉的檢測兩個方面。利用蛋白質制備抗體，可以指示蛋白質在加熱過程中變化，在商業(yè)上作為快速判定分析肉品終溫的一種ELISA方法。對摻入異種肉的檢測，則利用單克隆抗體的酶聯(lián)免疫測定法。目前在商業(yè)上，酶聯(lián)免疫測定已可以檢測十多種動物肉。第13頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三動物食品違禁藥物殘留檢測目前幾乎所有違禁藥物均已建立了ELISA檢測方法，如：β-內酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內酯類、磺胺類和氟喹諾酮類等，尤其是鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和呋喃唑酮代謝物（AOZ）等違禁藥物。第14頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三

例如瘦肉精（鹽酸克倫特羅）酶聯(lián)免疫檢測法，基于抗原抗體反應進行競爭性抑制測定，不僅可作為一個定性篩選過程，也可以進一步進行定量測定。另外，寵物食品及含油食品中氟喹諾酮類藥物如諾氟沙星、環(huán)丙沙星等殘留也可以利用該方法檢出，且滿足歐盟及日本美國等地區(qū)和國家對該類藥物篩選檢測的要求。第15頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三轉基因成分檢測

ELISA法可以檢測某些特定的轉基因表達蛋白，以分析食品是否來自轉基因生物或含有轉基因成分。美國食品藥品管理局（FDA）已研究出用雙夾心ELISA法檢測食品中是否含有轉基因玉米成分。StratejicDignostics公司已開發(fā)利用ELISA原理的試劑盒用于檢測轉基因大豆。第16頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三病原體檢測目前在禽流感病毒檢測方面，我國已完成并建立了禽流感免疫酶診斷方法和技術，已形成試劑盒生產能力。另外，采用ELISA法還可以有效檢測牛及羊朊病毒蛋白，該蛋白可引起牛的病理性海綿狀病毒，是一種致死性神經系統(tǒng)疾?。ǒ偱２。珺SE），與人群發(fā)生變異型克雅氏?。╒CJD）有關。第17頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三環(huán)境污染物的檢測

ELISA亦可用于檢測環(huán)境污染物，如：重金屬、二噁英和甾體激素等的檢測。利用能與Hg、Cd、Pb、ZnCu、Ag等重金屬離子結合的金屬硫蛋白，設計的ELISA檢測方法可以高效靈敏地檢出食品中含有的以上幾種重金屬。第18頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三其他成分的檢測（1）食品中營養(yǎng)素的測定如:a檢測嬰幼兒配方食品中谷蛋白含量

b檢測保健食品中透明質酸的含量

c牛初乳中乳鐵蛋白含量（2）抗營養(yǎng)素因子的檢測如：大豆及其制品中的胰蛋白酶抑制因子（3）可用于檢測食品加工過程中的酶含量的變化如:磷酸丙糖異構酶(TIM)和轉谷氨酰胺酶(TG)

(4)有害食品包裝材料的檢測如：雙酚A（BPA）第19頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三前景

ELISA分析也存在著一些缺陷，比如：(1)不能同時分析多種成分；(2)對試劑的選擇性高；(3)對結構類似的化合物有一定程度的交叉反應。但是如果將ELISA與其它檢測手段聯(lián)合使用，如GC、HPLC，既可增加檢測的靈敏度又可降低交叉反應，還可進行更準確的定量。隨著McAb技術的成熟，隨著新ELISA法的不斷出現(xiàn)，隨著免疫試劑盒的商業(yè)化，ELISA分析在食品安全檢測領域中一定會得到進一步的應用和推廣。第20頁，共22頁，2022年，5月20日，21點5分，星期三結語當前我國在ELISA方面的研究還處于起步階段，