幾種細(xì)胞混合培養(yǎng)特點及應(yīng)用

..幾種細(xì)胞混合培養(yǎng)特點及應(yīng)用高征摘要：混合細(xì)胞培養(yǎng)又稱協(xié)同培養(yǎng)<coculture>,系指兩種或多種細(xì)胞在同一個培養(yǎng)容器內(nèi),同樣的培養(yǎng)條件<如培養(yǎng)液、培養(yǎng)溫度等>下進(jìn)行混合培養(yǎng)。根據(jù)實驗不同的要求,可采用不同種類的敏感細(xì)胞,以細(xì)胞合適的比例進(jìn)行混合培養(yǎng)。本文介紹了幾種常見的細(xì)胞混合培養(yǎng)方法及其特點。關(guān)鍵字：混合細(xì)胞；培養(yǎng)；淋巴細(xì)胞；兔成骨細(xì)胞；兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞；肝癌細(xì)胞；大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞；大鼠膠質(zhì)細(xì)胞；表皮細(xì)胞；纖維細(xì)胞；U937；鼻咽癌細(xì)胞混合細(xì)胞培養(yǎng)又稱協(xié)同培養(yǎng)<coculture>,系指兩種或多種細(xì)胞在同一個培養(yǎng)容器內(nèi),同樣的培養(yǎng)條件<如培養(yǎng)液、培養(yǎng)溫度等>下進(jìn)行混合培養(yǎng)。根據(jù)實驗不同的要求,可采用不同種類的敏感細(xì)胞,以細(xì)胞合適的比例進(jìn)行混合培養(yǎng)。1.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)1.1混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)定義混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)〔mixedlymphocyteculture是指同種異體的淋巴細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)的現(xiàn)象。若一方<通常為供者>淋巴細(xì)胞經(jīng)滅活處理,則稱"單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)<one-waymixedlymphocyteculture>"。兩個無關(guān)個體功能正常的淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時,由于HLAⅡ類抗原中D和DP抗原不同,可相互刺激對方的T細(xì)胞發(fā)生增殖,此為雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)<twowayMLC>。若將其中一方的淋巴細(xì)胞先用絲裂霉素C<mytomycineC>處理或射線照射使之細(xì)胞中DNA失去復(fù)制能力,但仍能刺激另一方淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化,稱為單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)<onewayMLC>。1.2混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)用途混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)<MLC>或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)<MLR>常用于器官移植前的組織配型,以測定受體和供體主要組織相容性抗原<HLA抗原>相容的程度。由于MLC中淋巴細(xì)胞接受同種異型抗原的刺激而發(fā)生活化、增殖,產(chǎn)生種類眾多的細(xì)胞因子,促進(jìn)NK、LAK和CTL等殺傷細(xì)胞的分化,因此又是免疫調(diào)節(jié)研究中常用的實驗?zāi)Ｐ?。兩個個體間HLA抗原差異程度越大,反應(yīng)越強(qiáng)烈,可通過細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)檢查或3H-TdR摻入率檢測反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平。如用經(jīng)照射的、已知D位點抗原的純合子分型細(xì)胞<Homozygoustypingcell,HTC>作為刺激細(xì)胞,則可檢測待檢者的D位點抗原型別。若待檢者抗原與標(biāo)準(zhǔn)HLA-D抗原相同,MLC不發(fā)生增殖,此為HLA-D抗原陰性分型法。EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴母細(xì)胞表達(dá)高水平的HLAⅡ類抗原,常作為單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中的刺激細(xì)胞。2.混合細(xì)胞培養(yǎng)在病毒學(xué)和腫瘤學(xué)研究中的應(yīng)用2.1混合細(xì)胞培養(yǎng)的具體應(yīng)用方法根據(jù)實驗不同的要求,可采用不同種類的敏感細(xì)胞,以細(xì)胞合適的比例進(jìn)行棍合培養(yǎng)。待細(xì)胞形成致密的單層后接種病毒,研究蝕斑形成的條件,或以受染病毒的病人或尸解組織經(jīng)胰酶消化成單個細(xì)胞后再與其它種類的敏感細(xì)胞進(jìn)行棍合培養(yǎng),分離病毒,或以正常人體細(xì)胞與癌腫病人的腫瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)、觀察細(xì)胞之間的相互影響,由此達(dá)到實驗者所要研究的目的。2.2研究進(jìn)展研究病毒蝕斑的形成在探索影響流感病毒蝕斑形成的因素時,曾觀察到流感病毒可對雞胚腎單層細(xì)胞引起細(xì)胞病變,但雞胚腎單層細(xì)胞在培養(yǎng)液中維持的時間短暫,尤其在瓊脂培養(yǎng)基復(fù)蓋下細(xì)胞極易團(tuán)縮,細(xì)胞間隙加大,故不易形成明顯的流感病毒蝕斑。雖有關(guān)于流感病毒在雞胚腎細(xì)胞上形成蝕斑的簡報幻,但實驗不穩(wěn)定,數(shù)據(jù)不足,似乎不能重復(fù)。皮肌細(xì)胞對流感病毒雖不如雞胚腎細(xì)胞敏感,但在瓊脂培養(yǎng)基復(fù)蓋下維持時間較長。綜合雞胚腎細(xì)胞對流感病毒比雞胚皮刃細(xì)胞敏感以及雞胚皮肌細(xì)胞比雞胚腎細(xì)胞在瓊脂培養(yǎng)基下維持時間較長的特點,將雞胚腎細(xì)胞與雞胚皮肌細(xì)胞各以適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行混合培養(yǎng),結(jié)果流感病毒在此混合培養(yǎng)細(xì)胞上形成明顯的蝕斑。在雞胚腎與雞胚皮肌混合細(xì)胞上形成的流感病毒蝕斑<直徑2~3mm>比雞胚皮肌細(xì)胞上形成的蝕斑<直徑1~Zmm>大而清楚。前者的蝕斑形成。單位<PFU>比后者高達(dá)100倍。試驗證明采用雞胚腎與雞胚皮肌混合細(xì)胞,既保留了雞胚腎細(xì)胞對流感病毒較為敏感的特點,又在與雞胚皮肌細(xì)胞棍合培養(yǎng)時延長了雞胚腎細(xì)胞在瓊脂培養(yǎng)叢復(fù)蓋下維持的時間,保證蝕斑的形成。實驗結(jié)果能反復(fù)重演且穩(wěn)定。運(yùn)用這一混合細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對甲型流感病毒W(wǎng)S株、原甲型的PRS、亞甲型的洛57一4、亞洲甲衛(wèi)不敏感相的貴57一2、蘭生60一2以及乙型的Lee等株均能成功地在雞胚腎與雞胚皮肌棍合細(xì)胞。_L形成蝕斑。3.兔成骨細(xì)胞與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞混合培養(yǎng)3.1研究背景對骨髓基質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行改造,使其在保持快速生長的同時向成骨細(xì)胞方向分化是目前國內(nèi)外研究的熱點。實驗發(fā)現(xiàn),成熟的成骨細(xì)胞可以通過細(xì)胞間的直接接觸作用促進(jìn)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖,此外成骨細(xì)胞可產(chǎn)生多種生長因子促進(jìn)其骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的增殖、分化。但骨髓基質(zhì)干細(xì)胞通過誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化后,難以再與原有的成骨細(xì)胞區(qū)分開。3.2試驗方法實驗組：取第3代成骨細(xì)胞與第3代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞以1∶1比例直接混合培養(yǎng),一定時間后測定細(xì)胞的增殖及成骨情況。對照組：分別取上述兩種細(xì)胞在與混合培養(yǎng)細(xì)胞完全相同的條件下單獨進(jìn)行培養(yǎng),按測定混合培養(yǎng)細(xì)胞相同的方法分別測定該兩種細(xì)胞的相應(yīng)指標(biāo)。將混合培養(yǎng)細(xì)胞與同期兩種對照細(xì)胞相應(yīng)指標(biāo)的平均值進(jìn)行比較。3.3試驗結(jié)果在細(xì)胞增殖和細(xì)胞成骨能力等方面均是實驗組明顯高于相應(yīng)的平均值。3.4試驗結(jié)論將第3代成骨細(xì)胞與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞混合培養(yǎng),可以使其中一種或兩種細(xì)胞增殖加快,成骨能力加強(qiáng)。該方法可能成為一種新的骨組織工程種子細(xì)胞的獲取方法。4.淋巴細(xì)胞與肝癌細(xì)胞混合培養(yǎng)4.1試驗?zāi)康耐ㄟ^肝癌細(xì)胞和淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),體外誘導(dǎo)產(chǎn)生高活性的肝癌特異性細(xì)胞T淋巴細(xì)胞<HSCTL>。4.2試驗方法采用淋巴細(xì)胞和肝癌細(xì)胞混合培養(yǎng)技術(shù),在IL1,IL2,IL4和IL6刺激下,誘導(dǎo)產(chǎn)生HSCTL,應(yīng)用間接免疫熒光法和51Cr釋放法檢測其對靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。4.3試驗結(jié)果HSCTL與自身LAK相比,CD3+,CD4+和CD8+細(xì)胞明顯增多,抗腫瘤效應(yīng)明顯增強(qiáng)。4.4試驗結(jié)論采用淋巴細(xì)胞和肝癌細(xì)胞混合培養(yǎng)同時應(yīng)用白細(xì)胞介素可獲得大量擴(kuò)增的高活性的HSCTL。5.大鼠皮層神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)5.1試驗?zāi)康慕⒋笫笃由窠?jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)牽張損傷模型。5.2試驗方法提取出生時間24h到48h的SD大鼠大腦皮層組織行神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞原代混合培養(yǎng),根據(jù)Ellis方法采用CICⅡ型細(xì)胞損傷裝置建立大鼠皮層神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)牽張損傷模型,根據(jù)硅膠膜的變形距離將實驗組分為輕度組、中度組和重度組。同時設(shè)立對照組,不作牽張損傷。分別在不同時間進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞的PrI染色和測定培養(yǎng)上清液中的LDH含量,以確定損傷的程度。5.3試驗結(jié)果隨著牽張損傷程度加重,PrI紅染細(xì)胞數(shù)逐漸增多,同時細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH釋放量也逐漸增多。5.4試驗結(jié)論成功建立了大鼠皮層神經(jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞體外牽張損傷模型,可分別模擬輕、中、重度損傷。使用方便,可重復(fù)性好,可用于顱腦創(chuàng)傷的病理機(jī)制和藥物作用的進(jìn)一步研究。6.表皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)6.1研究目的異體、自體皮膚混合移植是提高大面積三度燒傷治愈率的有效方法。根據(jù)燒傷后皮膚混合移植的病理生理變化和組織學(xué)特點的研究,通過表皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),進(jìn)一步證實人體表皮細(xì)胞的組織特異性和較強(qiáng)的抗原性。根據(jù)這個特點,可在今后皮膚混合移植的過程中識別異體表皮,從而可更深入地探討混合移植的排異規(guī)律。6.2試驗原理皮膚表皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)一樣,它們之間的反應(yīng)強(qiáng)度均能反映出組織相容性差異程度。組織相容性相同的同卵雙生間反應(yīng)均為陰性,皮膚移植能長期存活,組織相容性差異越大,反應(yīng)亦越強(qiáng),皮膚移植存活時間越短。7.U937與鼻咽癌細(xì)胞的混合培養(yǎng)7.1試驗背景U937是一種前單核細(xì)胞,其主要是以懸浮生長為主,細(xì)胞形態(tài)成圓球狀,表面光滑,沒有突起。在PMA、內(nèi)毒素或生長因子的刺激下細(xì)胞可由懸浮狀態(tài)衍變?yōu)橘N壁生長,細(xì)胞形態(tài)由圓球狀變化為多邊型,細(xì)胞表面有突起伸出。本實驗采用流式細(xì)胞術(shù)檢測了U937與鼻咽癌細(xì)胞CNE-2混合培養(yǎng)對其CD36表達(dá)的影響。7.2試驗結(jié)果U937與CNE-2混合培養(yǎng)以促進(jìn)U937對CD36的表達(dá),共同培養(yǎng)24小時,CD36表達(dá)顯著增加。7.3試驗結(jié)論前單核細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)可促進(jìn)前單核細(xì)胞向單核細(xì)胞的分化。參考文獻(xiàn)[1]張漢荊.混合細(xì)胞培養(yǎng)在病毒學(xué)和腫瘤學(xué)研究中的應(yīng)用[J].國外醫(yī)學(xué).1986年06期.[2]蔡國鋒,章慶國,黃開.兔成骨細(xì)胞與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞混合培養(yǎng)的實驗研究[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué).20XX04期[3]李均樂,葉小鳴,程權(quán)永,等.淋巴細(xì)胞與肝癌細(xì)胞混合培養(yǎng)誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的形成[J].中華普通外科雜志.20XX03期.[4]范東東,鐘春龍,