基因敲除MDA-MB-231細(xì)胞系,乳腺癌研發(fā)福音

MDA-MB-231細(xì)胞系是從一名51歲的白種女性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的胸腔積液建立CRISPR/Cas9由于缺乏ER和PR表達(dá)以及HER2擴(kuò)增，該細(xì)胞系最初被歸類(lèi)為“基礎(chǔ)”乳腺癌細(xì)胞系。然而，由于它表現(xiàn)出claudin-3和claudinin-4的下調(diào)，Ki-67增殖標(biāo)記物的低表達(dá)，與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)的標(biāo)記物的富集，因此現(xiàn)在被認(rèn)為屬于claudin-低分子亞型。以及與乳腺癌干細(xì)胞（CSC）相關(guān)的特征的表達(dá)，例如CD44+CD24-/低表型。這就是為什么許多研究一直專(zhuān)注于基因編輯MDA-MB-231細(xì)胞系的原因。應(yīng)用：CRISPR/Cas9MDA-MB-231癌細(xì)胞需要表達(dá)某些基因的表達(dá)，這些基因編碼腫瘤生長(zhǎng)所必需的蛋白質(zhì)。沉MELKMDA-MB-231RNAiMDA-MB-231MELKMELKRNA（gRNA），RNAGFPCas9MDA-MB-231據(jù)報(bào)道會(huì)上癮。MELKMELKMELKβ1MDA-MB-231為了探索β1整合素的功能意義，研究人員通過(guò)基于CRISPR/Cas9的方法建立了β1-KOMDA-MB-231細(xì)胞。進(jìn)行蛋白質(zhì)的印跡和FACS分析以確認(rèn)MDA-MB-231β1MDA-MB-231ERKKOMDA-MB-231EGFR1OTMDA-MB-231β1ResKO中的這些異常表型。綜上所述，這些結(jié)果清楚地表明了β1在癌細(xì)胞中的獨(dú)特作用：抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)細(xì)胞存活，這可能有所啟發(fā)。BCL2L12MDA-MB-231BCL2L12MDA-MB-231BCL2L12的mRNABCL2L12ABCL2L12BCL2L12A誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果表明，BCL2L12和BCL2L12A的表達(dá)降低或缺失可能有助于乳腺癌患者的順鉑耐藥性。此外，我們發(fā)現(xiàn)順鉑誘導(dǎo)的BCL2L12BCL2L12AMDA-MB-231BCL2L12和BCL2L12A可能在順鉑誘導(dǎo)的MDA-MB-231基因敲除切割效率生重組蛋白。第三，可用于穩(wěn)定的重組蛋白生產(chǎn)。一些研究人員利用基因敲除切GLULEPO根據(jù)科研需求，結(jié)合靶基因的情況進(jìn)行基因穩(wěn)轉(zhuǎn)敲除方案設(shè)計(jì)。方案1：小片段基因敲除方案，gRNA設(shè)在外顯子2兩端的內(nèi)含子中，敲除外顯子編碼堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可造成移碼。方案2：移碼基因敲除方案，gRNA設(shè)在外顯子上，缺失的堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可發(fā)生移碼突變。方案3：大片段基因敲除方案，將整個(gè)基因的編碼序列敲除，達(dá)到大片段敲除的效果。Reference:5ContributionsHeLaCellsHaveMadetoScience.CellSciencefromTechnologyNetworks.Retrieved2020-03-25.o,g,,o.ofstableCdc25CknockoutHeLacellstrainsusingCRISPR/Cas9gene-editingsystem,MilitaryMedicalSciences,2019,42(1):1-5.g,g,,n,gXiaoyu,ZhengMing.ConstructionofstableCdc25CknockoutHeLacellstrainsusingCRI