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白血病/淋巴瘤免疫(miǎnyì)分型臨檢(línjiǎn)血液蔣能剛第一頁,共三十五頁。應(yīng)用目的:確定淋巴系病變的起源和分化程度;鑒別反應(yīng)性與克隆性淋巴細(xì)胞增生性疾?。淮_定髓系白血病各亞型;對(duì)形態(tài)學(xué)分類(fēnlèi)不明細(xì)胞進(jìn)行定性;診斷急性未分化型白血病;診斷急性混合細(xì)胞白血??;診斷微小殘留白血病或白血病浸潤(rùn);判斷白血病/淋巴瘤預(yù)后。第二頁,共三十五頁。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry):對(duì)高速流過檢測(cè)區(qū)的單個(gè)細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速分析(或分選)的一種(yīzhǒnɡ)技術(shù)。第三頁,共三十五頁。第四頁,共三十五頁。數(shù)據(jù)(shùjù)顯示方式:?jiǎn)螀?shù)直方圖雙參數(shù)二維點(diǎn)圖等高圖二維密度圖三維圖第五頁,共三十五頁。單參數(shù)(cānshù)直方圖雙參數(shù)(cānshù)點(diǎn)圖第六頁,共三十五頁。熒光(yíngguāng)素FITC(異硫氰酸熒光(yíngguāng)素):530nm(綠)PE(藻紅蛋白):575nm(橙黃)PI(碘化丙啶):620nm(橙紅)PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白):675nm(深紅)APC(別藻蘭蛋白):660nm(紅)第七頁,共三十五頁。檢測(cè)物:細(xì)胞(xìbāo)表面、胞漿或胞核抗原性物質(zhì)第八頁,共三十五頁。CD(clusterofdifferentiation):1982年起將識(shí)別同一分化抗原的來自不同(bùtónɡ)實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體歸為一個(gè)分化群,并進(jìn)行流水編號(hào)。一個(gè)CD相關(guān)抗體可包含多個(gè)克隆號(hào)。其他非CD系列抗原:如TCR、HLA等第九頁,共三十五頁。正常血細(xì)胞中的抗原(kàngyuán)表達(dá)特點(diǎn)1.系列保守(bǎoshǒu)性2.時(shí)序性3.抗原表達(dá)量的模式化第十頁,共三十五頁。干細(xì)胞嗜堿性(jiǎnxìnɡ)細(xì)胞嗜酸性(suānxìnɡ)細(xì)胞定向(dìnɡxiànɡ)髓系干細(xì)胞紅系巨核系粒單核系粒系單核系CD36CD71CD235aCD41CD42a/bCD61CD4CD11bCD14CD64HLA-DRCD36CD15CD71CD16(TDTCD7)CD34CD117CD13CD33CD38MPOCD34CD13CD33CD117MPO第十一頁,共三十五頁??乖碳じ杉?xì)胞早前(zǎoqián)B前B靜止(jìngzhǐ)期BPro-BALLPre-BALLCommon-BALLCLL/SLL免疫(miǎnyì)母細(xì)胞漿細(xì)胞樣淋巴細(xì)胞大B細(xì)胞淋巴瘤淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤外套細(xì)胞濾泡區(qū)母細(xì)胞中心母細(xì)胞中心細(xì)胞邊緣帶細(xì)胞漿細(xì)胞套細(xì)胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤大B細(xì)胞淋巴瘤濾泡淋巴瘤邊緣帶淋巴瘤骨髓瘤TDT+CD34+cCD79a+CD19+CD10±cμ-TDT+CD34+cCD79a+CD19+CD20±CD10+cμ-TDT+CD34±cCD79a+CD19+CD20+CD10±cμ+CD5+CD19+CD20CD22+CD23+sIg+FMC7-CD38CD138CD56cIgCD19-CD45-CD22+CD5-CD10-CD23-CD22+CD10+FMC7+CD23±bcl-2+CD5-CD19+CD20+CD22+CD38+IgM++sIg++CD22+CD10+sIg+CD34-TDT-CD5+CD22+sIg+FMC7+CyclinD1+CD23-CD22+bcl-6+CD10±CD5±CD30±第十二頁,共三十五頁。干細(xì)胞胸腺Ⅱ期胸腺Ⅰ期TDT+CD34+CD2cCD3CD7CD71TDT+CD34±CD1aCD2cCD3CD7CD4CD8胸腺Ⅲ期TDT+CD2CD3CD5CD7CD4/CD8TCRPrecursor-TALL成熟(chéngshú)T細(xì)胞各分化群第十三頁,共三十五頁。造血細(xì)胞在其分化、發(fā)育過程中,細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或胞核抗原的有無、表達(dá)強(qiáng)弱與血細(xì)胞的分化發(fā)育階段密切相關(guān),表現(xiàn)出與細(xì)胞系列(xìliè)及其分化程度相關(guān)的特性。第十四頁,共三十五頁。白血病細(xì)胞中的抗原(kàngyuán)表達(dá)特點(diǎn)表達(dá)模式基本與相應(yīng)階段正常細(xì)胞相似,還具有以下(yǐxià)特點(diǎn):1.跨系表達(dá)2.時(shí)相混亂3.抗原表達(dá)量的改變第十五頁,共三十五頁。免疫(miǎnyì)分型四種急性白血病單表型急性白血病表達(dá)(biǎodá)某一個(gè)系列抗原為主的急性白血病雙表型/雙克隆急性白血病未分化型急性白血病第十六頁,共三十五頁。各系急性白血病重要抗原(kàngyuán)指標(biāo)1.急性(jíxìng)淋巴細(xì)胞白血病(AL)敏感性特異性B-ALL:CD19100%非特異cCD79a99%特異T-ALL:CD7100%非特異cCD3100%特異第十七頁,共三十五頁。2.急性髓細(xì)胞(xìbāo)白血病(AML)表達(dá)率特異性CD1370%非特異CD3370%非特異CD11770%特異cMPO70%特異第十八頁,共三十五頁。錯(cuò)譯表達(dá)(Ly+AML,My+ALL):白血病細(xì)胞表達(dá)非本系細(xì)胞抗原標(biāo)志物,具有(jùyǒu)預(yù)后意義。第十九頁,共三十五頁。ALLCD13,CD33 t(9;22)AMLCD2+,DR- M3 t(15;17),或RAR+, t(11;17)CD2+,DR+ M4Eo inv(16)或t(16;16)
CD19+ M0 t(9:22)多見M2 t(8;21)
TdT+,CD7+ 見于(jiànyú)M0CD56+ M5/M4第二十頁,共三十五頁。雙表型急性白血病記分(jìfēn)系統(tǒng)分值B系T系髓系2cCD79acCD3cMPOCD22TCRαβcIgMTCRγδ1CD19CD2CD117CD10CD5CD13CD20CD8CD330.5TdTTdTCD14CD24CD7CD15CD64第二十一頁,共三十五頁。部分(bùfen)慢性B淋巴細(xì)胞增殖性疾病的免疫表型
CD5CD10CD19CD22CD23HLA-DRFMC7SIgCD11cCLL+-++/-++-++/-PLL--++-+++-MCL+-/+++-+++-HCL--++-++++FCL-+++-/+++/-+-MZL--++-++++/-LPL--++-/++-/+注:HCLCD103+CD25+第二十二頁,共三十五頁。部分慢性T淋巴細(xì)胞增殖性疾病(jíbìng)的免疫表型CD2CD3CD5CD7CD4CD8CD25CD56CD57T-CLL/PLL+++++/--/+-T-LGL+++/-+/--+--/++NK-LGL+---+/--+-ATL+++-++肝脾γδT細(xì)胞(xìbāo)淋巴瘤:CD2+CD3+CD7+TCRγδ+CD16+/-CD56+/-CD8-/+
CD4-TCRαβ-第二十三頁,共三十五頁。標(biāo)本(biāoběn)種類:懷疑含有病變細(xì)胞的組織或體液,如外周血、骨髓、胸腹水、腦脊液、淋巴結(jié)等。標(biāo)本要求:細(xì)胞有活性,最好不要超過48h。第二十四頁,共三十五頁。光散射特征與細(xì)胞形態(tài)(xíngtài)的關(guān)系第二十五頁,共三十五頁。淋巴(línbā)單核粒細(xì)胞CD45CD45M4/M5M3正常(zhèngcháng)白血病L1~3,M0~2M6,M7TSSCSSCMM非造血(zàoxuè)來源細(xì)胞CD45在免疫分型中的應(yīng)用意義原始嗜堿嗜酸第二十六頁,共三十五頁。正常(zhèngcháng)骨髓第二十七頁,共三十五頁。AML-M1AML-M2AML-M3AML-M4/M5第二十八頁,共三十五頁。AML-M6非造血(zàoxuè)細(xì)胞非特異性染色(rǎnsè)(死亡細(xì)胞)ALL第二十九頁,共三十五頁。分類(fēnlèi)不明細(xì)胞第三十頁,共三十五頁。B細(xì)胞(xìbāo)克隆性第三十一頁,共三十五頁。結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告第三十二頁,共三十五頁。白血病免疫(miǎnyì)分型其他方法:酶-底物顯色熒光顯微鏡
第三十三頁,共三十五頁
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